• 한국어류학회지
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• 제20권1호
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• pp.1-6
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• 2008

제브라피쉬 배아로부터 확보한 세포주로부터 외부형태와 세포 크기에 따라 3종류의 동형세포주를 확립하였다. 활발하게 증식하는 안정된 세포주 및 이들로부터 확립된 동형세포주의 세포특성은 변하지 않고 지속적으로 유지되었으며, 안정된 세포주로부터 총 18개의 콜로니를 확보하여 배양한 다음 3종류의 동형세포주를 선별하여 세포 특성을 분석하였다. 대부분의 동형세포주는 약 80% 정도 정상적인 염색체(2N=50)를 가지고 있었으며 FACs 분석과 일치하였다. 배아로부터 확립된 동형세포주에 항체테스트 결과, vimentin에서 양성을 보이는 결과로 볼 때 확립된 세포주는 분화된 섬유세포임이 확인되었다. 이러한 결과는, 확립된 동형세포주를 이용한 유전자조작과 어류복제에의 활용도를 높일 수 있음을 시사한다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제33권11호
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• pp.3676-3680
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• 2012

An Epstein-Barr virus (EBV)-based plasmid contains the EBV nuclear antigen 1 (EBNA1) gene and EBV replication origin (oriP) sequence. Since EBNA1 (the only EBV-encoded protein) is combined with oriP, it is replicated simultaneously with chromosomal DNA in human, primate, and canine cells and is faithfully segregated at a stable copy number upon cell division. Consequently, it can be used to stably express gene inserts over a prolonged time in target cells. We have previously shown that the polyamidoamine (PAMAM) dendrimer can be surface-modified with L-arginine. Arginine is present at a high frequency in the transactivator of transcription (Tat) sequences of human immunodeficiency virus (HIV). It presents high membrane permeability and permits effective transfer of DNA inside the cells. In this study, we constructed two kinds of recombinant DNA by inserting the luciferase gene and enhanced green fluorescence protein (eGFP) gene as reporter genes into the pCEP4 plasmid vector. We measured dynamic light scattering (DLS) and zeta potential after preparing PAMAM-based cationic polymer/EBV-based plasmid complexes. We performed transfection of HEK 293 cell lines with the polyplexes, and monitored luciferase activity and green fluorescence protein (GFP) expression. Our results show that PAMAM-based cationic polymer/EBV plasmid complexes provide enhanced and sustained gene expression.

• 한국균학회지
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• 제26권1호통권84호
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• pp.103-107
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• 1998

Coprinus cinereus에서 tryptophan 생합성에 관여하는 trp2 유전자의 이종 버섯에서의 발현여부를 조사하였다. 유전자 상동성을 확인하기 위하여, C. cinereus trp2 유전자를 함유하는 재조합 DNA인 pHIONA8을 probe로 사용하여 southern blot을 한 결과 S. commune 1-71의 tryptophan 생합성 유전자와 상당한 homology가 있는 것으로 나타났다. pHIONA8 DNA를 이용한 S. commune T1(tryptophan 영양요구주)의 상보성 검증에서는 pertri-dish당 약 50개의 형질전환체가 나타났으며, 이들 형질전환체는 다른 S. commune의 다른 화합성 균주와의 교배 실험에서 clamp cell의 유도와 동시에 약 $2{\sim}3$주만에 자실체를 관찰하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제27권9호
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• pp.1586-1592
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• 2017

Some promoters were isolated and characterized from the genome of Leuconostoc mesenteroides SY2, an isolate from kimchi, a Korean traditional fermented vegetable. Chromosomal DNA of L. mesenteroides SY2 was digested with Sau3AI and ligated with BamHI-cut pBV5030, a promoter screening vector containing a promoterless cat-86. Among E. coli transformants (TFs) resistant against Cm (chloramphenicol), 17 were able to grow in the presence of $1,000{\mu}g/ml$ Cm and their inserts were sequenced. Transcription start sites were examined for three putative promoters (P04C, P25C, and P33C) by primer extension. Four putative promoters were inserted upstream of a promoterless ${\alpha}$-amylase reporter gene in $pJY15{\alpha}$. ${\alpha}$-Amylase activities of E. coli TFs containing $pJY15{\alpha}$ (control, no promoter), $pJY03{\alpha}$ ($pJY15{\alpha}$ with P03C), $pJY04{\alpha}$ (with P04C), $pJY25{\alpha}$ (with P25C), and $pJY33{\alpha}$ (with P33C) were 66.9, 78.7, 122.1, 70.8, and 99.3 U, respectively. Cells harboring $pJY04{\alpha}$ showed 1.8 times higher activity than the control. Some promoters characterized in this study might be useful for construction of food-grade expression vectors for Leuconostoc sp. and related lactic acid bacteria.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권6호
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• pp.1221-1227
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• 2008

The application of the cellulase gene (celA) as a selection marker of food-grade integration system was investigated in Lactobacillus (Lb.) casei, Lactococcus lactis, and Leuconostoc (Leu.) mesenteroides. The 6.0-kb vector pOC13 containing celA from Clostridium thermocellum with an integrase gene and a phage attachment site originating from bacteriophage A2 was used for site-specific recombination into chromosomal DNA of lactic acid bacteria (LAB). pOC13 was also equipped with a broad host range plus replication origin from the lactococcal plasmid pWV01, and a controllable promoter of nisA ($P_{nisA}$) for the production of foreign proteins. pOC13 was integrated successfully into Lb. casei EM116, and pOC13 integrants were easily detectable by the formation of halo zone on plates containing cellulose. Recombinant Lb. casei EM 116::pOC13 maintained these traits in the absence of selection pressure during 100 generations. pOC13 was integrated into the chromosome of L. lactis and Leu. mesenteroides, and celA acted as an efficient selection marker. These results show that celA can be used as a food-grade selection marker, and that the new integrative vector could be used for the production of foreign proteins in LAB.

• 원예과학기술지
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• 제33권1호
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• pp.83-92
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• 2015

xBrassicoraphanus line BB#5, a new synthetic intergeneric hybrid between Brassica rapa L. ssp. pekinensis and Raphanus sativus L. var. rafiphera induced by N-methyl-N-nitroso-urethane mutagenesis in microspore culture, shows high seed fertility and morphological uniformity. Dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH) using 5S and 45S rDNA probes and genomic in situ hybridization (GISH) using B. rapa genomic DNA probe were carried out to analyze the chromosome composition and the meiosis pairing pattern compared to its parental lines. The somatic chromosome complement is 2n = 38, which consists of 17 metacentric and two submetacentric chromosomes with lengths of 2.18 to $5.01{\mu}m$. FISH karyotype analysis showed five and eight pairs of 5S and 45S rDNA loci. GISH meiosis pairing analysis showed that 19 complete bivalents were most frequent and accounted for 42% of the 100 pollen mother cells examined. Based on chromosome number, size, morphology, rDNA distribution, and meiosis pairing pattern, both parental genomes of B. rapa and R. sativus appear to exist in xBrassicoraphanus line BB#5, demonstrating its genome integrity. Such stable chromosome constitutions and meiotic pairing patterns in somatic and meiotic cells are very rare in natural and synthetic intergeneric hybrids. Chromosomal studies and genetic and phenotypic changes in allopolyploids a re discussed. The results p resented h erein will b e usef ul f or f urther g enomic s tudy o f xBrassicoraphanus lines and their improvement as promising new breeding varieties.

• 한국육종학회지
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• 제42권2호
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• pp.163-168
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• 2010

본 실험은 곡류 작물중에서 육종의 소재로써 많은 장점을 지닌 호밀을 Gimsa C-분염법과 FISH기법을 이용하여 구성이질 염색질과 5S와 18S-26S rRNA 유전자의 염색체상의 위치를 확인하고자 본 실험을 수행하였다. 그 결과를 요약하면 아래와 같다. 표지되었으며 2차협착으로 부수체가 존재하는 1번 염색체의 부수체의 말단과 5번 염색체의 중간에 표지되었고, 18S-26S rDNAs 유전자는 1개의 염색체에 표지되었으며 이 염색체는 2차협착으로 부수체가 존재하는 1번 염색체의 인 형성체 부위에 표지되었다. 1번 염색체에는 5S 와 18S-26S rDNAs 유전자가 표지되었고 5번 염섹체에는 5S rDNA 유전자만이 표지되었다.

• 한국콘텐츠학회논문지
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• 제22권2호
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• pp.762-769
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• 2022

산전 진단에서 유전자 검사는 임상 관리 및 부모의 의사 결정에 중요한 정보를 제공하고 있다. 지난 여러 해 동안 G-banidng 핵형 분석, 형광성 제자리 교잡 방법, 염색체 마이크로어레이 및 유전자 패널과 같은 세포유전학적 검사 방법들이 일반적인 산전 진단의 검사의 일부가 되어 발전해 왔다. 그러나 이러한 각각의 방법은 한계를 가지고 있으며 각각의 진단 기술의 단점들을 보완할 수 있는 혁신적인 검사 방법의 도입의 필요성이 매우 필요한 시점이다. 최근 차세대 염기서열 분석에 기반한 유전체 분석 방법의 도입은 현재의 산전 진단에서의 관행에 많은 변화를 주고 있다. 이렇게 산전 진단에서의 유전체 단위의 염기서열 분석은 정교한 해상도와 높은 정확도를 통해 데이터를 빠르게 분석하고 비용을 감소시키는 기술의 혁신을 보여주고 있다. 따라서 본 논문에서는 시퀀싱 기반 산전 진단의 현재 상태와 관련 과제 및 미래 전망에 대하여 검토해 보았다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권1호
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• pp.75-84
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• 2014

Aberrant DNA methylation of tumor suppressor genes has been reported in all major types of leukemia with potential involvement in the inactivation of regulatory cell cycle and apoptosis genes. However, most of the previous reports did not show the extent of concurrent methylation of multiple genes in the four leukemia types. Here, we analyzed six key genes (p14, p15, p16, p53, DAPK and TMS1) for DNA methylation using methylation specific PCR to analyze peripheral blood of 78 leukemia patients (24 CML, 25 CLL, 12 AML, and 17 ALL) and 24 healthy volunteers. In CML, methylation was detected for p15 (11%), p16 (9%), p53 (23%) and DAPK (23%), in CLL, p14 (25%), p15 (19%), p16 (12%), p53 (17%) and DAPK (36%), in AML, p14 (8%), p15 (45%), p53 (9%) and DAPK (17%) and in ALL, p15 (14%), p16 (8%), and p53 (8%). This study highlighted an essential role of DAPK methylation in chronic leukemia in contrast to p15 methylation in the acute cases, whereas TMS1 hypermethylation was absent in all cases. Furthermore, hypermethylation of multiple genes per patient was observed, with obvious selectiveness in the 9p21 chromosomal region genes (p14, p15 and p16). Interestingly, methylation of p15 increased the risk of methylation in p53, and vice versa, by five folds (p=0.03) indicating possible synergistic epigenetic disruption of different phases of the cell cycle or between the cell cycle and apoptosis. The investigation of multiple relationships between methylated genes might shed light on tumor specific inactivation of the cell cycle and apoptotic pathways.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제46권4호
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• pp.537-546
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• 2004

APM1(adipose most abundant gene transcript 1)은 지방세포에서 분비된는 단백질로서 Adiponectin을 암호화하며 GBP-28, AdipoQ, Acrp30으로 불리워졌다. 이 유전자는 쥐의 16번 염색체 및 인간의 3번 염색체 q27 부위에 존재하며 지방의 대사 및 호르몬의 여러 과정에 중요하게 작용하는 것으로 알려져 왔다. 돼지에서 APM1과 양적형질과의 연관성을 알아보기 위하여 somatic cell hybrid panel과 radiation hybrid panel을 이용하여 염색체상의 위치를 밝혀냈다. 분석결과 이 유전자는 돼지 13번 염색체의 q41이나 q46-49에 존재하는 것으로 밝혀졌다. RH pnael의 분석 결과, 이 APM1과 가장 연관이 된 marker는 SIAT1(LOD score 20.29)로 밝혀졌으며 이미 보고된 지방과 관련된 양적형질 유전자 좌위와 일치하였다. 8개의 다른 품종을 이용한 SSCP 분석으로, 한국재래돼지와 한국야생돼지에서 두 개의 특이한 SSCP 타입이 발견되었으며 sequence 분석결과 두 개의 염기가 치환(T672C and C705G)되어 있음을 알 수 있었다. 이 유전자는 사람, 마우스, 소의 염기서열과 약 79-87%의 상동성을 가지고 있으며 다른 포유동물에서 밝혀진 signal sequence, hypervariable region, collagenous region, globular domain과 유사한 구조로 되어 있음을 알 수 있었다.