Plastid transformation was attempted with soybean [Glycine max (L.) Merr.] leaves and photoautotrophic and embryogenic cultures by particle bombardment using the transforming vector pZVII that carries the coding sequences for both subunits of Chlamydomonas reinhardtii Rubisco and a spectinomycin resistance gene (aadA). Spectinomycin resistant calli were selected from the bombarded leaves but the transgene was not present, indicating that the resistance was due to mutations. The Chlamydomonas rbcL and rbcS genes were shown to be site-specifically integrated into the plastid genome of the embryogenic cells with a very low transformation efficiency. None of the transformed embryogenic lines survived the plant regeneration process so no whole plants were recovered. This result does indicate that it should be possible to insert genes into the plastid genome of the important crop soybean if the overall methods are improved.
The average specific growth rate of C. reinhardtii (${\mu}$) was decreased with increase in biocide concentrations. The toxicity of biocides toward was as follows (in descending order of toxicities): herbicide 〉 pesticide 〉fungicide. $EC_{50}$ in each biocide was 0.0017 mg/L, 1.06 mg/L and 13.3 mg/L for herbicide, pesticide and fungicide respectively. When herbicide and pesticide were mixed, $EC_{50}$ was decreased by $2.7{\times}10^{-7}mg/L$. $EC_{50}$ in effective components of each biocide was 5.26 mg/L, 9.37 mg/L and 20.58 mg/L for herbicide, pesticide and fungicide respectively. Mixed main components of herbicide and pesticide caused to decrease by 3.10 mg/L.
We experimented on growth in light and production of hydrogen and organic matters in dark fermentation by using C. reinhardtii. In the light, growth rate of C. reinhardtii following $CO_2$ fixation was proportional to consumption rate of nitrogen source. And the starch in cell was accumulated more when the period of culture was lengthened more. But the accumulation rate of starch in cell was decreased when the growth rate of cell become dull. In the dark fermentation, the production volume and production rate of hydrogen were the highest value in the mid exponential state among other states. The utilization efficiency of substrate was better in the early exponential state than other states. In production of organic matters, acetic acid didn't change remarkably and ethanol showed the highest value in early exponential state.
Under sulfur deprived conditions, PS II and photosynthetic $O_2$ evolution by Chlamydomonas reinhardtii UTEX 90 are inactivated, resulting in shift from aerobic to anaerobic condition. This is followed by hydrogen production catalyzed by hydrogenase. We hypothesized that the photosynthetic capacity and the accumulation of endogenous substrates such as starch for hydrogen production might be different according to cell age. Accordingly, we investigated (a) the relationships between hydrogen production, induction time of sulfur deprivation, increase of chlorophyll after sulfur deprivation, and residual PS II activity, and (b) the effect of initial cell density upon sulfur deprivation. The maximum production volume of hydrogen was 151 ml $H_2$/l with 0.91 g/l of cell density in the late-exponential phase. We suggest that the effects of induction time and initial cell density at sulfur deprivation on hydrogen production, up to an optimal concentration, are due to an increase of chlorophyll under sulfur deprivation.
Oh, Soojung;Kim, Jangho;Ryu, Hyun Ryul;Lim, Ki-Taek;Chung, Jong Hoon;Jeon, Noo Li
Journal of Biosystems Engineering
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제39권3호
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pp.244-252
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2014
Purpose: The development of an efficient in vitro cell culture device to process various cells would represent a major milestone in biological science and engineering. However, the current conventional macro-scale in vitro cell culture platforms are limited in their capacity for detailed analysis and determination of cellular behavior in complex environments. This paper describes a microfluidic-based culture device that allows accurate control of parameters of physical cues such as pressure. Methods: A microfluidic device, as a model microbioreactor, was designed and fabricated to culture Saccharomyces cerevisiae and Chlamydomonas reinhardtii under various conditions of physical pressure stimulus. This device was compatible with live-cell imaging and allowed quantitative analysis of physical cue-induced behavior in yeast and microalgae. Results: A simple microfluidic-based in vitro cell culture device containing a cell culture channel and an air channel was developed to investigate physical pressure stress-induced behavior in yeasts and microalgae. The shapes of Saccharomyces cerevisiae and Chlamydomonas reinhardtii could be controlled under compressive stress. The lipid production by Chlamydomonas reinhardtii was significantly enhanced by compressive stress in the microfluidic device when compared to cells cultured without compressive stress. Conclusions: This microfluidic-based in vitro cell culture device can be used as a tool for quantitative analysis of cellular behavior under complex physical and chemical conditions.
Water temperature is one of the major factors that impacts the growth and life cycle of Pyropia tenera, one of the most valuable and cultivated marine red algae belonging to Bangiales (Rhodophytes). We analyzed transcriptome from gametophyte of P. tenera under normal and high temperature conditions, and identified four small heat shock proteins (sHSPs). They have no significant amino acid sequence homology with known proteins in public databases except PhsHSP22 from Pyropia haitanensis. PtsHSP19.3 gene responded to high temperature but slightly or not to desiccation, freezing or high salt condition. When the PtsHSP19.3 gene was overexpressed in Chlamydomonas reinhardtii, transformed Chlamydomonas lines revealed much higher growth rate than that of control cells under heat stress condition. Transformed cells also grew well in those of the control cell onto the medium containing high salt or $H_2O_2$. When the PtsHSP19.3 was fused to GFP and introduced into tobacco protoplast, fluorescence was detected at several spots. Results indicate that PtsHSP19.3 may form super-molecular assembles and be involved in tolerance to heat stress.
Tran, Huynh Nguyen Khanh;Youn, Ui Joung;Kim, Minji;Cao, Thao Quyen;Kim, Jeong Ah;Woo, Mi Hee;Kim, Sanghee;Min, Byung Sun
Natural Product Sciences
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제26권1호
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pp.59-63
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2020
This study focused on investigation of the immunosuppressive inhibitory effect through determination of IL-2 production of nine compounds (1 - 9) isolated from Chlamydomonas sp. KSF108. Among them, compounds 1, 5, and 6 displayed moderately inhibitory effects on IL-2 production at a concentration of 100 µM. In addition, the related ones including cytotoxic, anti-inflammatory, and anti-oxidant activities were also elucidated. 6 further displayed cytotoxic activity against the MCF-7 cell line, with an IC50 value of 17.2 µM and 4, 6 - 7, and 9 possessed significant DPPH radical scavenging activity, with IC50 values ranging from 3.1 to 4.4 µM. To the best of our knowledge, this is the first report on the bioactivity of isolated chemical constituents from the genus Chlamydomonas. Compounds 1 and 5 investigated for the first time in the activity of immunosuppressivity and 6 may come to serve as the most important marker in broad-spectrum activities of the secondary metabolites identified from C. sp. KSF108.
A DNA extraction method using Chelex 100 is widely used for bacteria, Chlamydomonas, and animal cell lines, but only rarely for plant materials due to the need for additional time-consuming and tedious steps. We have modified the Chelex 100 protocol and successfully developed a rapid and simple method of DNA extraction for efficient PCR-based detection of transgenes from a variety of transgenic plant and algal species. Our protocol consists of homogenizing plant tissue with a pestle, boiling the homogenized tissue in a microfuge tube with 5% Chelex 100 for 5 min, and centrifuging the boiled mixture. The supernatant, which is used for PCR analysis, was able to successfully amplify transgenes in transgenic tobacco, tomato, potato, Arabidopsis, rice, strawberry, Spirodela polyrhiza, Chlamydomonas, and Porphyra tenera. The entire DNA extraction procedure requires <15 min and is therefore comparable to that used for bacteria, Chlamydomonas, and animal cell lines.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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