The use of droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR) has greatly improved the quantification of harmful protists, outperforming traditional methods like quantitative PCR. Notably, ddPCR provides enhanced consistency and reproducibility at it resists PCR inhibitors commonly found in environmental DNA samples. This study aimed to determine the most effective filter material for ddPCR protocols by assessing the reproducibility of species-specific gene copy numbers and filtration time across six filter types: cellulose acetate (CA), mixed cellulose ester (MCE), nylon (NY), polycarbonate (PC), polyethersulfone (PES), and polyvinylidene fluoride (PVDF). The study used two species of Chattonella marina complexes as a case study. Filtration rates were slower for NY, PC, and PVDF filters. Moreover, MCE, NY, PES, and PVDF yielded lower DNA amounts than other filters. Importantly, the CA filter exhibited the lowest variance (38-39%) and the highest determination coefficients (R2 = 0.92-0.96), indicating superior performance. These findings suggest that the CA filter is the most suitable for ddPCR quantification of marine protists, offering quick filtration and reliable reproducibility.
This study mainly focused on isolation of marine algicidal bacteria associated with phytoplankton blooms and characterization of algicidal activity against harmful algae. Harmful algal blooms (HABs) found naturally in surface waters have caused many environmental problems worldwide. In this study, forty bacterial strains that have capability of inhibiting harmful algal growth were isolated from Masan Bay, Jinhae Bay, Dol Island, Jangmok Bay, and the Tongyeong Sea, Republic of Korea. The bacteria were screened furthermore for the characteristics on algicidal activities against Cochlodinium polykrikoides, Chattonella marina, Skeletonema costatum, Heterosigma akashiwo, Heterocapsa triquetra, Prorocentrum minimum, and Scrippsiella trochoidea. As a result, the algicidal bacteria that were screened from double over layer agar and microscopic counts tests belonged to genera Pseudomonas, Vibrio, Bacillus, Pseudoalteromonas, Ruegeria, Joostella, Marinomonas, Stakelama, Porphyrobacter, and Albirhodobacter. One of the most important HAB species is Co. polykrikoides and the strongest algicidal activity against the dinoflagellate was 94.00% after 6 h treatment with 10% bacterial culture filtrate. In this study, Marinomonas sp. M Jin 1-8, Stakelama sp. ZB Yeonmyeong 1-11 & 1-13, Porphyrobacter sp. M Yeonmyeong 2-22, and Albirhodobacter sp. 6-R Jin 6-1 were found to be as new genera of bacteria having anti-algal activity. These results suggest that these bacteria might play an important role in controlling phytoplankton blooms.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.16
no.4
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pp.2951-2957
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2015
The development of worldwide harmful algal blooms(HAB) is a serious problem for public health and fisheries industries. To evaluate the algicidal impact on the HAB species, algicide thiazolidinedione derivative (TD49) and yellow clay were examined, which is focus on assess the algicidal effects and inhibition to photosynthesis of HAB species. To obtain the detailed information, we analyzed the viability of target species related to activity Chl. a, photosynthetic efficiency($F_v/F_m$), and electron transport rate(ETR). Culture experiment was conducted to evaluate the algicidal effects of three harmful species(raphidophyceae Heterosigma akashiwo, Chattonella marina, and dinophyceae Heterocapsa circularisquama) and one non-harmful species (cryptophyceae Rhodomonas salina). Our experiments revealed that three HAB species were easily destroyed of the cell walls after TD49 dosing. Also, they had significantly reducing values of active Chl. a, $F_v/F_m$, and ETR, due to the damage of photosystem II by inter-cellular disturbance. As a result, the algicidal effect(%) for the three HABs were as follows, in the order of greatest to the least: H. circularisquama> C. marina> H. akashiwo. However, the algicidal effect for yellow clay remained to be <30% (p>0.01), implying that it may not have damaged the photosystem II. On the other hand, non-HAB R. salina was promoted at both TD49 and yellow clay treatments. Our results demonstrated that the TD49 is a good agent for the control of HABs H. akashiwo, C. marina, and H. circularisquama, whereas the yellow clay would not be suitable for the field application based on our experimental results.
To understand growth characteristics of eight dominant red tide species ($Prorocentrum$$minimum$, $Heterocapsa$$triquetra$, $Scrippsiella$$trochoidea$, $Akashiwo$$sanguinea$, $Chattonella$$marina$, $Heterosigma$$akashiwo$, $Amphidinium$$carterae$ and $Rhodomonas$$salina$) in the Korean coastal water, the growth rates were examined in relation with the impacts of water temperature and bio-volume. Of these, $P.$$minimum$, $C.$$marina$, $H.$$akashiwo$, $A.$$carterae$ and $R.$$salina$ were eurythermal species with relatively high growth rates in a borad ranges (15 to $25^{\circ}C$) of water temperature. On the other hand, the growth rate of $H.$$triquetra$, $S.$$trochoidea$ and $A.$$sanguinea$ were high in relatively mid temperature (optimum: $25^{\circ}C$) condition. In particular, $H.$$triquetra$ was well adapted in low temperature of 5 to $15^{\circ}C$, implying that the species can survive and grows even at very low temperature. Based on results of our experiment, the growth characterestics of five eurythermal species and three mid temperature species may have dominated in Korean coastal water during summer season and fall season, respectively. Contrastively, the growth characteristics of $H.$$triquetra$ make a consistently dominant during the cold winter season. In addition, the growth rates of large bio-volume species were lower than those of small bio-volume species, indicates that growth of single cells of several flagellates might be depended on the cells sizes.
Reactive oxygen species (ROS) generated by harmful algal blooms (HABs) exert detrimental effects on aquaculture systems. Fish gill cells deteriorate upon exposure to HABs, suggesting that internally generated ROS in HABs influences the external environment. Therefore, we investigated the internal and external changes in ROS concentrations during growth using fluorescence staining of four representative HABs: Alexandrium affine, Chattonella marina, Karenia mikimotoi, and Margalefidinium polykrikoides. The concentrations of H2O2 and O2- produced by A. affine were low; H2O2 from M. polykrikoides was primarily detected internally throughout the experiments, and O2- was not detected. High H2O2 and O2- concentrations were observed in K. mikimotoi during the death phase, with weak external O2- concentrations. Regarding C. marina, which produces large amounts of ROS, H2O2 was observed internally during the exponential phase, whereas weak O2- concentrations were measured externally in the stationary phases. Collectively, our results highlight that ROS concentrations and internal/external distributions are functions of HABs and growth stage. These differences indicate the potential allelopathic mechanisms of proliferating HABs and suggest a possible impact of ROS on aquaculture organisms.
Lee, Minji;Shin, Juyong;Kim, Jin Ho;Lim, Young Kyun;Cho, Hoon;Baek, Seung Ho
Korean Journal of Environmental Biology
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v.36
no.3
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pp.359-369
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2018
Harmful algal blooms (HABs) are a serious problem for public health and fisheries industries, thus there exists a need to investigate the possible ways for effective control of HABs. In the present study, we investigated the algicidal effects of a newly developed GreenTD against the HABs (Chattonella marina, Heterosigma akashiwo, Cochlodinium polykriokides, and Heterocapsa circularisquama) and non-HABs (Chaetoceros simplex, Skeletonema sp. and Tetraselmis sp.), which is focused on the different population density and concentration gradients of algicidal substances. The time series viability of target alga was assessed based on the activity of Chl. a photosynthetic efficiency in terms of $F_v/F_m$, and in vivo fluorescence (FSU). Effective control of Raphidophyta, C. marina and H. akashiwo was achieved at a GreenTD concentration of $0.5{\mu}gL^{-1}$ and $0.2{\mu}gL^{-1}$, respectively, and regrowth of both the species was not observed even after 14 days. The inhibitory ratio of the dinoflagellate, C. polykriokides was more than 80% at $0.2{\mu}gL^{-1}$ of GreenTD. H. circularisquama was constantly affected in the presence of $0.2{\mu}gL^{-1}$ of GreenTD in the high- and low-population density experimental groups. On the other hand, diatoms, C. simplex, and Skeletonema sp. were not significantly affected even in the presence of $0.2{\mu}gL^{-1}$ of GreenTD and exhibited re-growth activity with the passage of incubation time. In particular, green alga Tetraselmis sp. remained unaffected even in the presence of the highest concentration of GreenTD ($1.0{\mu}gL^{-1}$), implying that non-HABs were not greatly influenced by the algicidal substances. As a result, the algicidal activity of GreenTD on the harmful and nonharmful algae was as follows: raphidophyte>dinoflagellates>diatoms>green alga. Consequently, our results indicate that inoculation of GreenTD substances into natural blooms at a threshold concentration ($0.2{\mu}gL^{-1}$) can maximize the algicidal activity against HABs species. If we consider the dilution and diffusion rate in the field application, it is hypothesized that GreenTD will demonstrate economic efficiency, thus leading to effective control against the target HABs in the closed bay.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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