Bulgasem, Bulgasem Y.;Lani, Mohd Nizam;Hassan, Zaiton;Yusoff, Wan Mohtar Wan;Fnaish, Sumaya G.
Mycobiology
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v.44
no.4
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pp.302-309
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2016
The role of lactic acid bacteria (LAB) in honey as antifungal activity has received little attention and their mechanism of inhibitory of fungi is not fully understood. In this study, LAB were isolated from honey samples from Malaysia, Libya, Saudi Arabia, and Yemen. Twenty-five isolates were confirmed LAB by catalase test and Gram staining, and were screened for antifungal activity. Four LAB showed inhibitory activity against Candida spp. using the dual agar overlay method. And they were identified as Lactobacillus plantarum HS isolated from Al-Seder honey, Lactobacillus curvatus HH isolated from Al-Hanon honey, Pediococcus acidilactici HC isolated from Tualang honey and Pediococcus pentosaceus HM isolated from Al-Maray honey by the 16S rDNA sequence. The growth of Candida glabrata ATCC 2001 was strongly inhibited (>15.0 mm) and (10~15 mm) by the isolates of L. curvatus HH and P. pentosaceus HM, respectively. The antifungal activity of the crude supernatant (cell free supernatant, CFS) was evaluated using well diffusion method. The CFS showed high antifungal activity against Candida spp. especially The CFS of L. curvatus HH was significantly (p < 0.05) inhibited growth of C. glabrata ATCC 2001, C. parapsilosis ATCC 2201, and C. tropicalis ATCC 750 with inhibitory zone 22.0, 15.6, and 14.7 mm, respectively. While CFS of P. pentosaceus HM was significantly (p < 0.05) effective against C. krusei, C. glabrata, and C. albicans with inhibition zone 17.2, 16.0, and 13.3 mm, respectively. The results indicated that LAB isolated from honey produced compounds which can be used to inhibit the growth of the pathogenic Candida species.
Samples of Laru (a fermentation starter) obtained from the upper part of Borneo Island were analyzed for their lactic acid bacteria (LAB) and fungal diversity using both a culture-independent method (PCR-DGGE) and culture-dependent methods (SDS-PAGE and MALDI-TOF MS). Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus brevis, Saccharomycopsis fibuligera, Hyphopichia burtonii, and Kodamaea ohmeri were detected by all three methods. In addition, Weissella cibaria, Weissella paramesenteroides, Leuconostoc citreum, Leuconostoc mesenteroides, Lactococcus lactis, Rhizopus oryzae/Amylomyces rouxii, Mucor indicus, and Candida intermedia were detected by PCR-DGGE. In contrast, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Pichia anomala, Candida parapsilosis, and Candida orthopsilosis were detected only by the culture-dependent methods. Our results indicate that the culture-independent method can be used to determine whether multiple laru samples originated from the same manufacturing region; however, using the culture-independent and the two culture-dependent approaches in combination provides a more comprehensive overview of the laru microbiota.
Gopal, Dhayaalini Bala;Lim, Chua Ang;Khaithir, Tzar Mohd Nizam;Santhanam, Jacinta
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.45
no.4
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pp.358-364
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2017
Asymmetric PCR preferentially amplifies one DNA strand for use in DNA hybridization studies. Linear-After-The-Exponential-PCR (LATE-PCR) is an advanced asymmetric PCR method which uses innovatively designed primers at different concentrations. This study aimed to optimise LATE-PCR parameters to produce single-stranded DNA of Candida spp. and Aspergillus spp. for detection via probe hybridisation. The internal transcribed spacer (ITS) region was used to design limiting primer and excess primer for LATE-PCR. Primer annealing and melting temperature, difference of melting temperature between limiting and excess primer and concentration of primers were optimized. In order to confirm the presence of single-stranded DNA, the LATE-PCR product was hybridised with digoxigenin labeled complementary oligonucleotide probe specific for each fungal genus and detected using anti-digoxigenin antibody by dot blotting. Important parameters that determine the production of single-stranded DNA in a LATE-PCR reaction are difference of melting temperature between the limiting and excess primer of at least $5^{\circ}C$ and primer concentration ratio of excess primer to limiting primer at 20:1. LATE-PCR products of Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis and Aspergillus terreus at up to 1:100 dilution and after 1 h hybridization time, successfully hybridised to respective oligonucleotide probes with no cross reactivity observed between each fungal genus probe and non-target products. For Aspergillus fumigatus, LATE-PCR products were detected at 1:10 dilution and after overnight hybridisation. These results indicate high detection sensitivity for single-stranded DNA produced by LATE-PCR. In conclusion, this advancement of PCR may be utilised to detect fungal pathogens which can aid the diagnosis of invasive fungal disease.
Colonial morphology of the various yeasts grown on the yeast morphology agar medium containing orange-yellow pigments extracted from the fruits of Gardenia jasminoides (GJPM) was investigated in hopes of the differential identification of yeasts on primary cultures. Colonies of Candida lusitaniae and Ca. guilliermondii on GJPM turned to prussian blue within three days of incubation and Ca. tropicalis and Ca. viswanathii turned to bluish gray but the latter species turned to deep blue after 7 days. Ca. krusei, Saccharomyces cerevisiae, and Torulopsis glabrata showed neutral gray, grayish green, and baby blue respectively after one or two weeks. However, the colonies of Ca. albicans and parapsilosis remained unchanged even after 20 days. Colonial color of Cryptococcus neoformans showing brown to purple brown was distinguishable not only from buff color of Cr. laurentii after one or two weeks incubation but also from those of Candida spp. Growth of certain species was promoted on GJPM. The findings clearly showed that Ga. jasminoides pigments medium was useful to the morphological differentiation of medically important yeasts which were often encountered in sputum or other clinical specimens.
Colonial morphology of the various yeasts often encountered in sputum or other clinical specimens was investigated on the corn meal-potato-yeast extract agar medium (GJCPY) containing orange-yellow pigments extracted from Gardenia jasminoides fruits in hopes of differential identification on primary cultures. The results obtained are as follows. 1) Cryptococcus neoformans which is a medically important yeast and whose colony showed brown to purple brown on GJCPY medium was distinguishable not only from buff colored Cr. laurentii after one week incubation but also from Candida spp. 2) Colony color of Candida albicans, a most common species in sputum specimens and of Ca. parapsilosis, a rare isolate, remained unchanged even after 15 days incubation. 3) Ca. tropicalis, second common isolate from sputums and Ca. krusei, a rare isolate, formed a characteristic rough and wrinkled colonies that permit to differentiate them from others. 4) Rare isolates, Ca. guilliermondii and Ca. lusitaniae, turned to prussian blue within three days of incubation. 5) Torulopsis sp. and Saccharomyces cerevisiae showed glossy grayish blue or light blue after one week incubation. The findings clearly showed that Ga. jasminoides pigments medium was useful to the morphological differentiation of medically important yeasts that were often encountered in sputum or other clinical specimens.
${\beta}-1$, 4-Mannobiose was prepared by the enzymatic hydrolysis of brown copra meal and the subsequent elimination of mono-saccharides from the resultant hydrolysate with a yeast. The enzyme system hydrolyzed brown copra meal and produced monosaccharides and $\beta$-1, 4-mannobiose without other oligomers at the final stage of the reaction. Brown copra meal (30 g) was hydrolyzed at $50^{\circ}^C$ and pH 5 for 48 hr with the crude enzyme solution (300 ml) from Penicillium purpurogenum. By the elimination of monosaccharides from the hydrolysis products with a yeast (Candida parapsilosis var. komabaensis k-75), 5.2 g of crystalline mannobiose was obtained without the use of chromatographic techniques. After 50 hours of yeast cultivation, the total sugar content fell from 3.5% to 2.4%, and the average degree of polymerization rose from 1.8 to 2.2.
The root extract of Scilla scilloides (which has been used as a traditional folk medicine in Korea) was evaluated with regard to antimicrobial, anti-inflammatory, and anti-oxidative activities. The roots of S. scilloides were minced and extracted with 95% ethanol (root:ethanol=25:75, w/v). The inhibitory effects of S. scilloides root extract on the growth of Staphylococcus aureus ATCC 35556, Salmonella enteritidis ATCC 12021, Escherichia coli O157:H7, and Candida parapsilosis KCCM 35428 were tested. The results indicate that the antimicrobial effects of both 0.1 and 1.0% extract of S. scilloides were greater against the growth of S. aureus ATCC 35556 and C. parapsilosis KCCM 35428 than the growth of S. enteritidis ATCC 12021 and E. coli O157:H7. The anti-inflammatory effects were evaluated by measurement of the inhibition of hyaluronidase activity in vitro. It appears that both 0.1 and 1.0% concentrations of extract have inhibitory effects on hyaluronidase relative to the control. Finally, the anti-oxidative effect of 1.0 and 10% extract solutions were measured according to the thiocyanate method and were compared with 1.0% BHT. The results indicate that the anti-oxidative effect of 10% S. scilloides root extract (anti-oxidative index (AOI); $72.3{\pm}4.2$) is not significantly different from that of 1.0% BHA (AOI; $76.8{\pm}3.5$) (p<0.05). However, it appears that the anti-oxidative effect of S. scilloides root extract is at least three-fold greater than that of BHA when accounting for the amount of dissolved solids in each.
Lee, Choung Kyu;Kim, Baolo;Kang, Young Min;Lee, Hee Yul;Hwang, Chung Eun;Ahn, Min Ju;Seo, Weon Taek;Cho, Kye Man
Korean Journal of Microbiology
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v.50
no.4
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pp.351-359
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2014
A beverage was produced by the fermentation of mixed extracts from the various fruits, vegetables, algae, and medical herbs. The physicochemical properties of the fermented beverage of plant extracts (FBPE) and microbial diversity were analyzed in cultures enriched from FBPE using 16S and 26S rRNA gene sequence analyses. The pH, acidity, $^{\circ}brix$, reducing sugar, and alcohol contents of the FBPE were determined to be the 3.48, 1.68%, 70.0, 1,026 g/L, and 3.5%, respectively. The most abundant free sugar and organic acid in the FBPE were glucose (567.83 g/L) and tartaric acid (93.68 mg/L), respectively. Lactobacillus homohiochii was the predominant species in all enriched culture samples: 100% of the species in 0B (0% sugar) and 40B (40% sugar) libraries and 95.6% of 20B library (20% sugar). Lactobacillus fructivorans was detected in the 20B library. The predominant species in the samples of enrichment cultures collected from FBPE with three different sugar concentrations were: Candida zeylanoides (45.2%) in the 0Y library (0% sugar), Candida lactis-condensi (35.7%) and C. zeylanoides (35.7%) in the 20Y library (20% sugar), and C. lactis-condensi (38.1%) in the 40Y library (40% sugar). This result may provide a useful frame of reference for further analyses of microbial population dynamics in FBPE.
Seventy nine swollen commercially canned grapes and peaches were collected from wholesale and retail outlets in Seoul area for the investigation of the causes of their swell. Hydrogen generation and microbial spoilage were the only two common causes of can swelling. Nevertheless, the spoilage profile of the two products was different. Seventeen out of twenty one canned peaches were spoiled by microorganisms, while the rest of five were swollen due to hydrogen generation. In contrast, fifty one out of fifty eight canned grapes were swollen due to hydrogen generation, while the rest of seven were spoiled by microorganisms. Seventeen yeast and five bacterial strains were isolated and only the yeasts were identified to their genera and species. Saccharomyces cerevisiae was the most frequently isolated spoilage yeast, closely followed by Torulopsis stellata. Candida parapsilosis, Pichia kluyveri, Pichia membranaefaciens, Torulopsis globosa and Torulopsis lactis-condensi were also isolated but with lower frequencies.
In vitro antifungal susceptibility test was carried out on 53 strains of Candida spp isolated from milk of dairy cows with subclinical mastitis and teat cups of milking machines, Nystatin, clotrimazole, miconazole, econazole, 5-fluorocytosine, cycloheximide, haloprogin and griseofulvin were tested by the agar dilution method. The 84.8% to 98.2% of Candida strains were inhibited by clotrimazole, econazole and miconazole at $${\leq_-}25{\mu}g/ml$$, and clotrimazole was most active. Interspecies differences of antifungal susceptibility were recognized and these were as follows. C albicans was most sensitive to clotrimazole (GM-MIC, $5.49{\mu}g/ml$) followed by 5-fluorocytosine, econazole and miconazole. C pseudotropicalis and C guilliermondii were notably sensitive to haloprogin, clotrimazole, miconazole, cconazole, 5-fluorocytosine, and haloprogin (GM-MIC, $0.17{\sim}0.19{\mu}g/ml$) was most active. C krusei was most sensitive to cycloheximide (GM-MIC, $0.54{\mu}g/ml$) followed by clotrimazole, haloprogin, miconazole and econazole. C parapsilosis was somewhat sensitive to econazole, cycloheximide, clotrimazole, and econazole (GM-MIC, $7.26{\mu}g/ml$) was most active. C tropicalis showed very low sensitivity to all tested drugs (GM-MIC, $${\geq_-}20.32{\mu}g/ml$$).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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