본 연구는 multiplex real-time PCR을 이용하여 Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythus, Treponema denticola, Prevotella intermedia 등과 같은 6종의 주요 치주 질환 원인 미생물들을 동시에 검출할 수 있는 분석 방법에 관한 것이다. 4개의 형광 염료를 사용하여 internal control과 함께 3개의 균종씩 나누어 분석하였으며, 분석 대상 균종 간 그리고 다른 종류의 구강 미생물 균종과의 간섭과 교차 반응이 없음을 확인하였다. 본 연구의 multiplex real-time PCR은 타액과 플라그 등의 다양한 샘플에 포함되어 있는 각 미생물들을 정성, 정량적으로 분석할 수 있었으며, 치주염 환자와 건강한 사람들에 대한 비교 분석 결과 분명한 차이를 발견 할 수 있었다.
Jang, Won Tae;Jo, Na Hyun;Song, Mi Ok;Eun, Byung Wook;Ahn, Young Min
Pediatric Infection and Vaccine
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제26권1호
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pp.22-31
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2019
목적: 캄필로박터 장염은 박테리아 장염의 흔한 원인 중 하나로 알려져 있다. 그러나 국내에서 소아에서의 캄필로박터 장염의 빈도와 임상 양상에 대한 연구는 드물다. 본 연구는 단일 병원 소아청소년과 환자에서 경험한 캄필로박터 장염의 빈도와 임상적 특징을 파악하고자 시행하였다. 방법: 2012년 1월부터 2017년 12월까지 을지대학교 을지병원 소아청소년과에 급성 위장관염으로 방문한 18세 이하 소아환자로부터 대변 검체를 확보하였다. 그 중에서 배양 혹은 polymerase chain reaction을 통해 캄필로박터 장염으로 진단된 환자들의 의무기록을 후향적으로 검토하였다. 결과: 총 123명의 환자가 캄필로박터 장염을 진단받았으며 환자의 나이 중앙값은 12 세(사분위수, 8-16세)이었다. 캄필로박터 장염은 일년 내내 발생했지만 주로 6월과 9월 사이에 86명(69.9%)으로 집중적으로 발생하였다. 증상은 설사(97.6%), 발열(96.7%), 복통(94.3%), 구토(37.4%)와두통(34.1%) 순으로발생하였다. 복부컴퓨터단층촬영은 25.2%의사례에서시행되었다. 다른 치료군과 비교했을 때, azithromycin 3일 요법으로 치료하는 것이 더 짧은 입원 기간과 관련이 있었다 (P<0.05). 결론: 캄필로박터 장염은 청소년기와 여름철에 흔하다. 설사 증상을 보이기 전에 심한 복통과 열이 발생하여 병원에 내원하게 된다. 캄필로박터 장염에 대한 올바른 이해를 수반한다면 적절한 진단과 항생제 사용을 통해 장염의 이환시간을 줄일 수 있을 것으로 보인다.
Campylobacter is a pathogen for both humans and animals that can be transferred from animals to humans. Four isolates, which grew under 5-10% $CO_2$ and had small and translucent colonies, were obtained from swine gastric mucosa and characterized using various methods. These bacteria were gram negative, spirally shaped with round ends. One or two non-sheathed polar flagella were observed under electron microscopy. A PCR with species-specific protein (SSP) primers for 16S rRNA gene in Campylobacter produced a typical 462 bp fragment. The isolates had various biochemical and molecular characteristics which differentiated them from other Campylobacters. The isolates were catalase and oxidase positive, urease (rapid) negative, nitrate reduction positive, indoxyl acetate hydrolysis positive, y-glutamyl transpeptidase negative, and alkaline phosphatase negative. All four isolates showed growth at $37^{\circ}C{\;}and{\;}42^{\circ}C{\;}but{\;}not{\;}at{\;}25^{\circ}C$, were resistant to cephalotin and cefoperazone, and susceptible to carbenicillin. The isolates showed various results in the reduction of chloride to triphenyl tetrazolium (TTC) and a susceptibility to nalidixic acid. Western blot analysis of these isolates with antiserum raised against one isolate showed different patterns from those of reference strains. A dendrogram drawn with the RAPD results showed that these isolates belonged to a new Campylobacter spp. group different from those of C. jejuni, C. doylei, C. lari, and C. coli.
목 적: 소아의 급성 위장관염은 매우 흔하고 입원율이 높은 중요한 질환이다. 본 연구에서는 지역 사회에서 소아의 급성 위장관염을 일으키는 대표적인 바이러스 및 세균을 대상으로 1년간 발생 경향에 대한 최근 자료를 제시하고자 하였다. 방 법: 서울대학교 보라매병원 소아과에 3일 이내의 급성 설사를 주소로 내원한 15세 미만의 소아를 대상으로 임상 검사 및 대변 검사를 시행하였다. 입원 소아는 2003년 4월부터 2004년 3월까지 1년간, 외래 소아는 2003년 4월부터 7월까지 단일 외래를 방문한 환아들에 국한하여 연구하였다. 방문 2일 이내에 대변 검체를 얻었으며 바이러스성 원인균 검사로는 로타바이러스, 장 아데노바이러스 항원 검출법을, 세균성 원인균 검사로는 Salmonella, Shigella, Vibrio, Campylobacter 균종 및 Yersinia enterocolitica 대해 배양검사를 시행하였고 병원성 E.coli (ETEC, EHEC, EPEC) 검출을 위해서는 PCR 법을 이용하였다. 입원 환아들은 전해질 검사를 포함한 혈액 검사를 같이 시행받았다. 결 과: 전체 입원 환아는 130명, 외래 환아는 28명이 대상에 포함되었으며, 6세 미만의 환아가 각각 94.6% (123명), 92.8% (26명)로 대부분을 차지하였다. 모두 단일 원인균이 분리되었으며 그 중 로타바이러스가 가장 흔한 원인균으로 입원 환아의 42.3% (55명)에서, 외래 환아의 29.6% (8명)에서 검출되었다. 대변 배양 검사에서는 비장티푸스성 살모넬라균이 입원 환아의 3.9% (4명), 외래 환아의 3.6% (1명)에서 배양되었다. 병원성 대장균은 입원 환아의 2.1% (2명/97명), 외래 환아의 25.0% (3명/12명)에서 분리되었으며 EPEC (4명), ETEC (1명) 순이었고 EHEC는 분리되지 않았다. 이외에 장 아데노바이러스와 Campylobacter, Yersinia, Shigella 균종은 한 예도 없었다. 결 론: 로타바이러스는 국내 지역 사회 병원에서 소아기 위장관염으로 입원하게 되는 가장 흔한 원인균이며 세균성 장염의 원인균으로는 비장티푸스성 살모넬라와 병원성 대장균, 특히 EPEC와 ETEC가 중요하다. Campylobacter 균종은 급성 설사로 입원하게 되는 환아에서는 흔하게 분리되지 않는 것으로 보여지나 외래 환아를 다수 포함한 대단위의 연구가 더 필요하리라 생각된다.
Kim, Hyeri;Cho, Jin Ho;Song, Minho;Cho, Jae Hyoung;Kim, Sheena;Kim, Eun Sol;Keum, Gi Beom;Kim, Hyeun Bum;Lee, Ju-Hoon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제31권12호
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pp.1701-1708
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2021
Food safety is the most important global health issue due to foodborne pathogens after consumption of contaminated food. Foodborne bacteria such as Escherichia coli, Salmonella enterica, Staphylococcus aureus, Campylobacter spp., Bacillus cereus, Vibrio spp., Yersinia enterocolitica and Clostridium perfringens are leading causes of the majority of foodborne illnesses and deaths. These foodborne pathogens often come from the livestock feces, thus, we analyzed fecal microbial communities of three different livestock species to investigate the prevalence of foodborne pathogens in livestock feces using metagenomics analysis. Our data showed that alpha diversities of microbial communities were different according to livestock species. The microbial diversity of cattle feces was higher than that of chicken or pig feces. Moreover, microbial communities were significantly different among these three livestock species (cattle, chicken, and pig). At the genus level, Staphylococcus and Clostridium were found in all livestock feces, with chicken feces having higher relative abundances of Staphylococcus and Clostridium than cattle and pig feces. Genera Bacillus, Campylobacter, and Vibrio were detected in cattle feces. Chicken samples contained Bacillus, Listeria, and Salmonella with low relative abundance. Other genera such as Corynebacterium, Streptococcus, Neisseria, Helicobacter, Enterobacter, Klebsiella, and Pseudomonas known to be opportunistic pathogens were also detected in cattle, chicken, and pig feces. Results of this study might be useful for controlling the spread of foodborne pathogens in farm environments known to provide natural sources of these microorganisms.
The general characteristics of campylobacters and related organisms (e.g., species of the genera Helicobacter and Wolinella, Bacteroides ureolyticus, and Bacteroides gracilis) are as follows: slender, non-sporeforming, gram-negative, vibroid bacteria (helical- or spiral- shpaed; except that B. ureolyticus and B. gracilis are straight-rod), 0.2-0.5 .mu.m in width and 0.5 .mu.m in length. (Smibert, 1984; Penner, 1988). The species of genus Campylobacter and related organisms are chemoorganotrophs; however, they neither oxidize nor ferment carbohydrates and instead obtain energy from amino acids, the salts of tricarboxylic acids (TCA) cycle intermediates, the salts of organic acids, or, in some species, H$\_$2/. With regard to their oxygen responses for growth, they all are microaeophilic i.e., they are capable of oxygen-dependent growth (respiring with oxygen as a terminal electron acceptor) but can not grow in the presence of a level of oxygen equivalent to that present in an air atmosphere (21% oxygen). This review will take interests in how these microorganisms response to oxygen for growth and what repiratory types they have.
1996년도에 서울${\cdot}$경기지역 소재의 재래시장과 백화점에서 판매되고 있던 계육과 계란을 구입하여 각종 미생물학적 위생실태를 조사하였다. 먼저 계육을 구입처에 따라 구분하고 총균수, 대장균군수와 포도상구군수를 산정하여 오염도를 비교하였으며, 또한 주요 인수공통 병원균들인 Salmonella 속균을 비롯하여 Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus 및 E. coli O157:H7에 대해서도 분리율을 조사하였다. 그리고 비교를 위해서 수입판매 되고 있는 미국과 중국산의 수입계육과 국내산 계육에 대해서도 전술한 바의 각종 미생물학적 위생실태를 비교조사 하였던 바 그 성적을 보고하고자 하였다. 먼저 미생물오염도비교조사에서 백화점의 시판계육은 총세균수와 대장균군수에 있어서 재래시장의 시판계육보다도 낮은 세균오염도를 보였지만, 포도상구균수에 있어서는 오히려 백화점의 시판계육에서 더욱 높은 오염도를 나타내었다. Salmonella 속균의 분리율 성적에서는 재래시장의 시판계육이 $76.5\%$의 분리율을 보였고, 백화점의 시판계육은 $60\%$의 균분리율을 나타내었으며, 국내 시판계육 전체적으로는 $68.8\%$의 Salmonella 분리율을 나타내었다. 한편 인수공통 병원균인 Listeria 속균의 분리율 성적은 재래시장의 시판계육이 $73.3\%$로서 백화점 시판계육의 $53.\%$ 보다도 더욱 높았고, 전체적으로는 $63.3\%$의 분리율 성적을 보였다. 반면에 Campylobacter 속균의 경우에는 백화점 시판계육이 $80\%$로서 재래시장의 시판계육의 $53.3\%$ 보다도 높은 분리율 성적을 보였으며, 전체적으로는 $64.0\%$의 분리율을 나타내어 Salmonella속균에 이어서 두 번째로 높은 균분리율을 보였다. 그러나 국내산 시판계육에서 E. coli O157:H7 균주는 전혀 분리되지 않았다. 국내 및 수입산(미국 & 중국) 닭부분육(닭다리, 닭날개 및 발골육)에 대한 각종 미생물의 오염도 조사에서 대장균군수의 경우 양자 간에 비슷한 수준이었으나, 총세균수와 포도상구균수에 있어서는 수입산 계육이 국내산 보다 $10\~100$ 배정도 낮은 오염도를 보였다. 닭날개(Wings)의 경우 국내산에서는 S.typhimurium $(33\%)$이 분리 되었으나, 미국산 닭날개에서는 Salmonella 속균이 전혀 분리되지 않아 대조적이었다. 하지만, 중국산의 닭부분육(혼합육)에서는 S. enteritidis와 L. monocytogenes도 함께 분리되었다. 그러나 부분육의 경우 국내산 및 수입산 모두에서 Campylobacter 속균과 E. coli O157:H7 균주는 전혀 분리되지 않았다. 서울${\cdot}$경기지역의 재래시장과 백화점에서 시판되고 있는 계란 총 446개에 대해서도 동일한 절차와 방법으로 조사하였던바, 재래시장에서 구입했던 계란의 난각부분(Egg-shell)에서만 가금티푸스(fowl Typhoid)의 병원체인 S. gallinarum이 1주$(0.2\%)$만이 분리되었고, 기타 세균으로서는 대장균군이 역시 난각에서 가장 높은 빈도로 분리되었고, 난황(Yolk)에서는 극히 낮은 수준의 세균오염도를 보였다.
유통중인 계란의병원성균 오염상태를 시판되는 multiplex polymerase chain reaction (mPCR) kit로 검사한 결과, 총 90개의 검사시료 가운데 한 가지 이상의 미생물이 검출된 계란시료는 30개로, 검사시료의 미생물 오염도는 약 33.3% 수준이었다. 미생물별 검출 빈도는 B. cereus가 17개 시료(18.9%)에서 검출되어 가장 높은 빈도를 보였으며 Y. enterocolitica는 16개(17.8%), L. monocytogenes 15개(16.7%), St. aureus 12개(13.3%), E. coli O157:H7 4개(4.4%)의 검출빈도를 보였다. 한편, 선택배지를 이용한 viable cell count 방법에서는 27개의 시료에서 미생물이 검출되어 검사시료의 미생물 오염도는 약 30.0% 수준이였으며, 미생물별 검출 빈도는 B. cereus가 17개 시료(18.9%)에서 14개(15.6%) 시료로, Y. enterocolitica는 16개(17.8%)에서 12개(13.3%)로, L. monocytogenes는 15개(16.7%)에서 13개(14.4%)로, St. aureus는 12개(13.3%)에서 10개(11.1%)로 감소하였으며, E. coli O157:H7은 두 가지 검출방법간의 차이가 나타나지 않았다. 검출 대상 미생물 9종 가운데 Campylobacter jejuni, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella spp., 및 Shigella spp.는 두 방법 모두에서 검출되지 않았다. 이상의 결과에서 살펴본 바와 같이 PCR을 이용한 병원성 미생물의 검출 방법은 viable cell count 방법보다 감도가 높음을 알 수 있었다.
This study examined changes of rumen fermentation, ruminal bacteria biodiversity and abundance caused by nitrate addition with Ion Torrent sequencing and real-time polymerase chain reaction. Three rumen-fistulated steers were fed diets supplemented with 0%, 1%, and 2% nitrate (dry matter %) in succession. Nitrate supplementation linearly increased total volatile fatty acids and acetate concentration obviously (p = 0.02; p = 0.02; p<0.01), butyrate and isovalerate concentration numerically (p = 0.07). The alpha (p>0.05) and beta biodiversityof ruminal bacteria were not affected by nitrate. Nitrate increased typical efficient cellulolytic bacteria species (Ruminococcus flavefaciens, Ruminococcus ablus, and Fibrobacter succinogenes) (p<0.01; p = 0.06; p = 0.02). Ruminobactr, Sphaerochaeta, CF231, and BF311 genus were increased by 1% nitrate. Campylobacter fetus, Selenomonas ruminantium, and Mannheimia succiniciproducens were core nitrate reducing bacteria in steers and their abundance increased linearly along with nitrate addition level (p<0.01; p = 0.02; p = 0.04). Potential nitrate reducers in the rumen, Campylobacter genus and Cyanobacteria phyla were significantly increased by nitrate (p<0.01; p = 0.01).To the best of our knowledge, this was the first detailed view of changes in ruminal microbiota by nitrate. This finding would provide useful information on nitrate utilization and nitrate reducer exploration in the rumen.
Purpose: This study clarified the bacterial pathogens currently causing acute infectious enterocolitis (AIE) in children and evaluated the clinical characteristics and ultrasonographic findings according to the different pathogens. Methods: Medical records regarding age, sex, clinical symptoms, laboratory data, identified enteropathogens, ultrasonographic findings, treatment, and outcome of 34 patients who were diagnosed with AIE via stool examination using multiplex polymerase chain reaction (PCR) or culture, were retrospectively reviewed. Results: Twenty-four patients (70.6%) were male. The mean age of the patients was $8.5{\pm}6.2$ (range, 1.1-17.1) years. Six bacterial pathogens were isolated: Salmonella species (spp.) (32.4%), Campylobacter spp. (20.6%), verotoxin-producing Escherichia coli (14.7%), Staphylococcus aureus (11.8%), Clostridium difficile (8.8%), and Shigella spp. (2.9%). Abdominal pain occurred in all patients regardless of pathogen. The patients infected with Salmonella were older than those infected with verotoxin-producing E. coli (p<0.05). C-reactive protein levels were higher in patients with Salmonella and Campylobacter infections than in those with verotoxin-producing E. coli infection (p< 0.05), the other clinical and laboratory data were indistinguishable between pathogens. Ultrasonography demonstrated diverse involvement of bowel segments according to pathogen. Wall thickening of both the ileum and the entire colon was the most common lesion site regardless of pathogen. Conclusion: Various bacterial agents cause AIE and the symptoms are diverse symptoms, however, all most children recovered spontaneously. Use of multiplex PCR on stool samples warrants improvement of its sensitivity for diagnosis of enteropathogenic bacteria. Ultrasonographic examination is useful for diagnosis of AIE; it can also detect the disease extent and severity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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