Adherence of probiotic bacteria to intestinal epithelium is found to be the most principal characteristics among the various physiological functionality. This study was conducted to investigate the effect of bifidobacterial growth properties and condition on the Caco-2 cell adherence and to construct a basic data on adherence-related research. Among 20 strains of bifidobacteris tested, when measured by cell surface hydrophobicity(CSH) and cell agglutination(CA), Bifidobacterium bifidum ATCC29521, Bif. adolescentis K8, and Bif. infantis K9 were selected. Using these strains, variations of Caso-2 cell adherence depending upon experimental condition were analyzed. The results obtained are as follows : Even though Bif. bifidum ATCC29521, Bif. adolescentis K8, and Bif. infantis K9 reached more 85% cell surface hydrophobicity there was no significant difference in cell agglutination, when reached 31.54$\pm$0.54mg/ml. By direct count method for adherence, viable cell count of M3, K1, K2, K8, K9 and K10 reached more 100 counts per 100 Caco-2 cells. When Bif. bifidum ATCC29521, Bif. adolescentistis K8, and Bif. infantis K9 were used to compare the adherence depending upon viable cell counts, reaction time, and growth phase, the more viable cell count, and the more adhered cell counts, the less adherence percentage. In addition, there was no difference in adherence percentage of bifidobacteria when bifidobacteria was incubated from 1 to 8 hrs after Caco-2 cells already formed monolayer. Considering of the effect of growth phase of bifidobacteria on adherence variation, all strains showed the highest adherence during the early stage of stationary phase. In conclusion, adherence of bifidobacteria was affected by strain specificity, viable cell count, and growth activity.
This study was conducted to select lactic acid bacteria which possess potential inhibitory effect on Helicobacter pylori, and to make feasibility test of fermented milk products using them. In order to select lactic acid bacteria specifically inhibiting the growth of H. pylori, antibacterial activity using paper disk method, adherence ability to Caco-2 cell inhibitory effect on urease activity of H. pylori, and milk fermentation feasibility were measured. Among 45 strains of lactic acid bacteria tested, 28 strains showed clear zone and Lactobacillus gasseri MK-03 showed the largest clear zone. Caco-2 cell adherence by lactic acid bacteria and inhibitory effect of them on H. pylori adherence were also evaluated. Of 28 strains tested, 18 strains appeared to be effective on adherence to Caco-2 cell, and especially Bifidobacterium longum MK-26 was found to be superior to others. When Bif. longum MK-26 and H. pylori were reacted with Caco-2 cell 2hrs before, adherence percentage of H. pylori decreased from 0.105% to 0.004%. To investigate inhibitory effect of lactic acid bacteria-derived supernatant on urease activity of H. pylori, pH-adjusted fermented supernatant(pH-4.4) was assessed by co-cultivation method. There of Lb. acidophilus MK-07-derived supernatant showed the most inhibitory effect on urease activity of H. pylori. Considering milk fermentation ability of selected 3 strains, they were comparably feasible to fermented milk products. Consequently, Lb. gasseri MK-03, Lb. acidophilus MK-07, and Bif. longum MK-26 were selected to specifically inhibit the growth of H. pylori, by antibacterial activity, inhibition of urease activity, and inhibition of Caco-2 cell adherence, respectively.
This study was conducted to investigate the effects of bifidobacteria on the growth and Caco-2 cell-adherence of Escherichia coli O157:H7 .Dur-ing momo-culture of E. coli O157:H7 and mixed culture with Bifidobacterium infantis K9, pH viable cell count, and ammonia concentration were measured Co-cultivation of E. coli O157:H7 with bifidobacteria. producing acidic metabolites rapidly decreased the viable cell count of E. coli O157:H7 In addition rapid decrease of ammo- nia concentration was observed during mixed culture after 8 hrs incubation compared to single culture of E. coli O157:H7 Therefore it is likely that bifidobacteria assimilate ammonia produced by E. coli O157:H7 P4 B, infantis K9 showed quite similar adherence on the Caco-2 cells in either case. On the other hand adherence of E. coli O157:H7 decreased from 2.6% to 1.86% when B infantis K9 was adhered to Caco-2 cell 2 hrs prior to the application of E. coli O157:H7 In conclusion in adherence of E coli O157:H7 to Caco -2 cell was inhibited by competition of its binding to the adherence site with bifidobacteria. In addition inhibitory effects of bifidobacteria on E coli O157:H7 appeared to be much higher with increae of the number of bifidobacteria and its ability of adherence to Caco-2 cells.
Kim, Kyeong Ah;Min, Arim;Lee, Young Ah;Shin, Myeong Heon
Parasites, Hosts and Diseases
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v.52
no.5
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pp.459-469
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2014
Entamoeba histolytica is a tissue-invasive protozoan parasite causing dysentery in humans. During infection of colonic tissues, amoebic trophozoites are able to kill host cells via apoptosis or necrosis, both of which trigger IL-8-mediated acute inflammatory responses. However, the signaling pathways involved in host cell death induced by E. histolytica have not yet been fully defined. In this study, we examined whether calpain plays a role in the cleavage of pro-survival transcription factors during cell death of colonic epithelial cells, induced by live E. histolytica trophozoites. Incubation with amoebic trophozoites induced activation of m-calpain in a time- and dose-dependent manner. Moreover, incubation with amoebae resulted in marked degradation of STAT proteins (STAT3 and STAT5) and NF-${\kappa}B$ (p65) in Caco-2 cells. However, $I{\kappa}B$, an inhibitor of NF-${\kappa}B$, was not cleaved in Caco-2 cells following adherence of E. histolytica. Entamoeba-induced cleavage of STAT proteins and NF-${\kappa}B$ was partially inhibited by pretreatment of cells with a cell-permeable calpain inhibitor, calpeptin. In contrast, E. histolytica did not induce cleavage of caspase-3 in Caco-2 cells. Furthermore, pretreatment of Caco-2 cells with a calpain inhibitor, calpeptin (but not the pan-caspase inhibitor, z-VAD-fmk) or m-calpain siRNA partially reduced Entamoeba-induced DNA fragmentation in Caco-2 cells. These results suggest that calpain plays an important role in E. histolytica-induced degradation of NF-${\kappa}B$ and STATs in colonic epithelial cells, which ultimately accelerates cell death.
Arellano, Karina;Park, Haryung;Kim, Bobae;Yeo, Subin;Jo, Hyunjoo;Kim, Jin-Hak;Ji, Yosep;Holzapfel, Wilhelm H.
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.49
no.2
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pp.157-166
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2021
The probiotic market is constantly continuing to grow, concomitantly with a widening in the range and diversity of probiotic products. Probiotics are defined as live microorganisms that provide a benefit to the host when consumed at a proper dose; the viability of a probiotic is therefore of crucial importance for its efficacy. Many products undergo lyophilization for maintaining their shelf-life. Unfortunately, this procedure may damage the integrity of the cells due to stress conditions during both the freezing and (vacuum-) drying process, thereby impacting their functionality. We propose a lysine-based mixture for rehydration of freeze-dried probiotics for improving their viability during in vitro simulated gastric and duodenum stress conditions. Measurement of the zeta potential served as an indicator of cell integrity and efficacy of this mixture, while functionality was estimated by adhesion to a human enterocyte-like Caco-2 cell-line. The freeze-dried bacteria exhibited a significantly different zeta potential compared to fresh cultures; however, this condition could be restored by rehydration with the lysine mixture. Recovery of the surface charge was found to influence adhesion ability to the Caco-2 cell-line. The optimum lysine concentration of the formulation, designated "Zeta-bio", was found to be 0.03 M for improving the viability of Lactiplantibacillus plantarum Lp-115 by up to 13.86% and a 7-strain mixture (400B) to 41.99% compared to the control rehydrated with distilled water. In addition, the lysine Zeta-bio formulation notably increased the adherence ability of lyophilized Lp-115 to the Caco-2 cell-line after subjected to the in vitro stress conditions of the simulated gastrointestinal tract passage.
Strain NK181 was isolated for probiotic use from jeotkal and based on results of API 50 CHL kit and 16S rDNA sequencing was tentatively named Lactobacillus plantarum NK181. L. plantarum NK181 was highly resistant to artificial gastric juice (pH 2.5) and bile acid and demonstrated strong adherence to Caco-2 cells. In test using API ZYM kit, eight enzymes were produced. Supernatant of L. plantarum NK181 exhibited about 30% 1,1-diphenyl-2-picyryl hedrazyl (DPPH) radical-scavenging activity and reduced cholesterol by 70%. These results demonstrate potential use of L. plantarum NK181 as health-promoting probiotic.
In order to develop probiotic strain for pigs, Lactobacillus spp. (527 isolates), Streptococcus spp. (95 isolates) and Bifidobacterium spp. (25 isolates) were isolated from the feces of 35 pigs. These isolates were tested through in vitro experiment such as acid tolerance at pH 2.0 (Lactobacillus spp. and Streptococcus spp.) or pH 3.0 (Bifidobacterium spp.), bile tolerance in MRS broth containing 0.3% (w/v) Oxgall, heat resistance at $70^{\circ}C$ and $80^{\circ}C$ for 5 min, antibiotic resistance, antimicrobial activity against pathogenic bacteria and Caco-2 cell adherence assay. Finally ten most superior strain (5 Lactobacillus spp. strain, 3 Bifidobacterium spp. strain and 2 Streptococcus spp. strain) were selected as potential candidate for probiotic use in pig industry. It could be used as an alternative to antibiotics in feed additives.
This study was conducted to confirm the availability of lactic acid bacteria as probiotics haying inhibitory effects to cancer cell line. Five lactic acid bacteria showing anti-cancer activity were compared by acid tolerance, bile tolerance, antibiotics resistance, milk fermentation, stability, and cell adherence activity to colon epithelial cell. The results obtained are as follows : In acid tolerance, all strains did not have a resistance below pH 3.0 and 3.5 except Lactobacillus plantarum KCTC3099. In antibiotics resistance, Lactococcus lactis and L. plantarum KCTC3099 were resistant to cotrimoxazol (128 mg/1), and Bifidobacterium adolescentis Maeil-K8 and B. infantis Maeil-K9 were resistant to doxycylin and gentamycin (4 mg/1). In case of cell adherence ability to Caco-2 cell, B. infantis Maeil-K9 was found to be superior to others as 3.1%, while the others were less than 0.5%. When the strains were cultured to milk base, viable counts of the strains tested increased more 1 log cycle than inoculation, but acid production was very low except L. plantarum KCTC3099. Also, L. plantarum KCTC3099, B. adolescentis Maeil-K8, and B. infantis Maeil-K9 were stable in fermented milk base during storage. In conclusion, L. plantarum KCTC3099 and B. infantis Maeil-K9 were confirmed to be superior for the availability as probiotics.
Kim, Eun-Ji;Jo, Seung-Wha;Kim, Jin-Kyeong;Jeong, Do-Youn
Journal of Life Science
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v.29
no.6
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pp.697-704
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2019
This study performed to investigate the probiotic properties of lactic acid bacteria 200 strains isolated from traditional fermented foods. Based on being higher tolerance to bile salts and showing higher acid resistance, 4 LAB Strains were selected in the screening experiment; Lactobacillus plantarum SRCM 102224, Lb. plantarum SRCM102227, Lb. paracasei SRCM102329, Lb. paracasei SRCM102343. Antibacterial activity against various pathogens, acid and bile salt tolerance, hemolytic phenomenon, cell surface hydrophobicity, and antibiotic resistance were examined. Among the tested strains, SRCM 102343 (95.9%) was highly observed hydrophobicity compared to Lb. rhmanosus GG (13.4%) as control. In this study, the in vitro adhesion properties of 4 strains of LAB was investigated using human intestinal caco-2 cell cultures. SRCM102329 and SRCM102343showed higher adherence to caco-2 cells than Lb. rhamnosus GG. The antibacterial activities of 4 strains LAB were investigated. the 3 strains showing strongly antimicrobial activity against Escherichia coli ATCC10798, Staphylococcus aureus KCCM11593, Listeria invanovii KCTC3444, Bacillus cereus ATCC11778 and S. enterica serovar. Typhi KCTC1926. These results suggest that selected strains have good probiotic potential for application in functional foods.
Choi, Hye Jung;Lim, Bo Ram;Kim, Dong Wan;Kwon, Gi-Seok;Joo, Woo Hong
Journal of Life Science
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v.24
no.11
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pp.1231-1237
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2014
The objective of this study was to evaluate the safety and functional properties of four potential probiotic strains isolated from Kimchi, traditional Korean fermented vegetables. Based on being higher tolerance to bile salts and showing higher acid resistance or hydrophobic properties, one Lactobacillus arizonensis strain (BCNU 9032) and three L. brevis strains (BCNU 9037, BCNU 9098 and BCNU 9101) were selected in the screening experiment. All strains can survived up to 99% after 3h culture in pH 2.5 and resistant to 1% bile salts. These strains also showed good antimicrobial activities against a number of food borne pathogens, especially against Escherichia coli and Shigella sonnei. The ability to lower cholesterol levels of L. arizonensis BCNU 9032 and L. brevis 9037 were demonstrated by bile salt hydrolytic activity and cholesterol assimilation tests. Moreover, L. brevis BCNU 9098 and BCNU 9101 showed higher adherence to Caco-2 cells (12.76 and 11.86%, respectively) than Lactobacillus rhamnosus GG, a commercial probiotic strain used worldwide. The results suggest that these strains could be used as probiotics.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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