흰점박이꽃무지는 약용으로서 매우 유용하고 중요한 곤충종이다. 선행연구를 통해 전사체 분석결과를 바탕으로 인실리코(in silico) 분석을 실시하여 전사체유래 항균 펩타이드를 스크리닝하고 선발하여 항균활성 및 용혈활성을 확인하였다. 그 결과 선발된 항균 펩타이드들은 박테리아와 칸디다 진균에 강한 항균활성을 나타낸 반면 적혈구에 대한 용혈활성은 전혀 없었다. 선발한 펩타이드들 중 프로테티아마이신 2로 명명한 양이온 항균 펩타이드를 이용하여 항균활성뿐만 아니라 마우스의 대식세포 Raw264.7 세포주를 이용하여 프로테티아마이신 2의 항염증활성을 확인하였다. 그 결과 프로테티아마이신 2는 LPS로 유도된 Raw264.7 세포들의 산화질소 생성을 감소시키는 결과를 보여주었다. 또한 프로테티아마이신 2가 산화질소 합성효소(iNOS), 고리형 산소화 효소-2(COX-2)의 발현을 감소시킨다는 것을 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(qRT-PCR) 방법과 웨스턴 블랏(western blot)을 통해 확인하였다. 더욱이 Raw264.7 세포에서 전염증성 사이토카인($TNF-{\alpha}$, IL-6, $IL-1{\beta}$)의 발현이 MAPKs와 $NF-{\kappa}B$ 신호전달과정을 통해 약화되어짐을 알 수 있었다. 게다가 프로테티아마이신 2가 LPS와 상호작용을 통해 결합한다는 것을 확인하였다. 종합하여 보면 프로테티아마이신 2는 항균활성과 함께 LPS로 유도된 Raw264.7 세포에서 항염증활성도 가지고 있음을 나타내었다.
Purpose : The purpose of this research was to investigate the effects of Saurui Herba Seu Rhizoma(SHSR) on Anti-inflammatory properties in Raw264.7 cell line and murine models of inflammation. Methods : To investigate the effects of Saurui Herba Seu Rhizoma(SHSR) on anti-inflammation, we study cytotoxicity effects of SHSR on Mouse Lung Fibroblast Cells and Peritoneal Macrophages, Inhibitory effects of SHSR on the nitric oxide (NO) release, the ROS production, and the interleukin-6 production. Results : The cytotoxicity of SHSR on mouse lung fibroblast Cells and Raw264.7 cell line was not observed. SHSR in RAW264.7 cell line inhibited $IL-1{\beta}$, IL-6 mRNA gene expression depending upon the concentrations of extract and inhibited IL-18 mRNA gene expression at 100 ${\mu}g/ml$ of extract. SHSR in RAW264.7 cell line inhibit COX-2 mRNA gene expression at 100, 10 ${\mu}g/ml$ of extract. SHSR in RAW264.7 cell line inhibited NOS-II mRNA gene expression depending upon the concentrations of extract. SHSR in RAW264.7 cell line didn't inhibit $TNF-{\alpha}$ mRNA gene expression. SHSR in RAW264.7 cell line decreased IL-6 production depending upon the concentrations of extract. SHSR in RAW264.7 cell line decreased $ITNF-{\alpha}$ production according to the concentrations of extract. SHSR in RAW264.7 cell line inhibited NO release specially SHSR 100, 10 ${\mu}g/ml$ concentrations of extract. SHSR inhibit ROS production depending upon the concentrations of extract. Conclusion : These results suggest that SHSR can be used treating a lot of women disease caused by inflammation.
Objectives : The objective of this study was to evaluate the gastric protective effect of Curcuma Longae Rhizoma (CLR) in 150 mM HCl/60% ethanol induced gastric ulcer (GU) in mice. Methods : Forty ICR mice were divided into five groups (n=8/Group): Nor group; Normal, Veh group; GU control, SC group; GU + sucralfate 10 mg/kg, CL; GU + CLR 30% ethanol extract 100 mg/kg, CH group; GU + CLR 30% ethanol extract 200 mg/kg. Then, mice were orally administered with 150 mM HCl/60% ethanol and caused GU. After 1 hr, mice were sacrificed, and blood and stomach tissue were collected. Results : CLR showed significance scavenging effects in 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2'-azinobis-3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) radical scavenging activities (DPPH IC50; 78.18 ± 0.60 ㎍/㎖, ABTS IC50; 55.91 ± 1.86 ㎍/㎖). CLR significance reduce inflammatory-related factors such as cyclooxygenase-2 (COX-2), inducible nitric oxide synthase (iNOS), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 1 beta (IL-1β), and interleukin-6 (IL-6) via nuclear factor kappa B (NF-κB) inactivation. In addition, the activation of nuclear factor erythroid2-related factor 2 (Nrf2) significantly led to up-regulation of anti-oxidant enzymes including factors heme oxygenase-1 (HO-1), super oxide dismutase (SOD), and glutathione peroxidase-1/2 (GPx-1/2). Conclusions : Our discovery provides that CLR possesses anti-oxidant and anti-inflammatory effects. Hence, CLR may ameliorate the development of gastric ulcer though the inhibition of NF-κB inflammatory pathway and the elevation of Nrf2 anti-oxidant pathway.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Citrus and its peels have been used in Asian folk medicine due to abundant flavonoids and usage of citrus peels, which are byproducts from juice and/or jam processing, may be a good strategy. Therefore, the aim of this study was to examine antioxidant and anti-inflammatory effects of bioconversion of Jeju Hallabong tangor (Citrus kiyomi ${\times}$ ponkan; CKP) peels with cytolase (CKP-C) in RAW 264.7 cells. MATERIALS/METHODS: Glycosides of CKP were converted into aglycosides with cytolase treatment. RAW 264.7 cells were pre-treated with 0, 100, or $200{\mu}g/ml$ of citrus peel extracts for 4 h, followed by stimulation with $1{\mu}g/ml$ lipopolysaccharide (LPS) for 8 h. Cell viability, DPPH radical scavenging activity, nitric oxide (NO), and prostagladin $E_2$ ($PGE_2$) production were examined. Real time-PCR and western immunoblotting assay were performed for detection of mRNA and/or protein expression of pro-inflammatory mediators and cytokines, respectively. RESULTS: HPLC analysis showed that treatment of CKP with cytolase resulted in decreased flavanone rutinoside forms (narirutin and hesperidin) and increased flavanone aglycoside forms (naringenin and hesperetin). DPPH scavenging activities were observed in a dose-dependent manner for all of the citrus peel extracts and CKP-C was more potent than intact CKP. All of the citrus peel extracts decreased NO production by inducible nitric oxide synthase (iNOS) activity and $PGE_2$ production by COX-2. Higher dose of CKP and all CKP-C groups significantly decreased mRNA and protein expression of LPS-stimulated iNOS. Only $200{\mu}g/ml$ of CKP-C markedly decreased mRNA and protein expression of cyclooxygenase-2 in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Both 100 and $200{\mu}g/ml$ of CKP-C notably inhibited mRNA levels of $interleukin-1{\beta}$ ($IL-1{\beta}$) and IL-6, whereas $200{\mu}g/ml$ CKP-C significantly inhibited mRNA levels of $TNF-{\alpha}$. CONCLUSIONS: This result suggests that bioconversion of citrus peels with cytolase may enrich aglycoside flavanones of citrus peels and provide more potent functional food materials for prevention of chronic diseases attributable to oxidation and inflammation by increasing radical scavenging activity and suppressing pro-inflammatory mediators and cytokines.
잣나무 잎 추출물에 대해 염증인자인 hyaluronidase 저해효과를 측정한 결과 ethanol 추출물에서 물추출물에 비해 상대적으로 더 높은 HAase 저해효과를 보여주었으며, $50-200{\mu}g/mL$ phenolic 농도에서 13.2-29.5%의 저해효과를 나타내었다. 잣나무잎 추출물을 Raw 264.7 cell에 농도별로 처리하여 생성되는 NO량을 측정한 결과 LPS처리군은 LPS 무처리군에 비하여 3배에 가까운 NO발현을 나타내었으며, 농도 의존적으로 NO발현을 억제하였다. LPS에 의해서 생성된 $PGE_2$의 생성억제 효과를 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 처리농도에서 ethanol 추출물이 26.2%의 저해율을 나타내었다. NO 생성 억제기작에 관한 iNOS 단백질의 발현량을 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 농도에서 40%의 높은 억제효과를 나타내었으며, 농도 의존적으로 감소하는 경향을 관찰 할 수 있었다. LPS 처리시 또 다른 염증인자인 COX-2의 단백질 발현을 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 처리 농도에서 64%의 저해효과를 나타내었다. 잣나무잎 추출물이 Raw 264.7 세포에서 LPS에 의해서 생성되는 $TNF-{\cdot}$, IL-6의 생성억제 효과를 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 처리농도에서 각각 61.7, 62%의 저해 효과를 나타내었다. 따라서 잣나무잎 추출물은 염증억제를 위한 천연 기능성 소재로 활용이 가능할 것으로 판단되었다.
본 연구의 목적은 수세기에 걸쳐 발기부전(impotence), 정액루(spermatorrhea), 유뇨증(enuresis), 천식(asthma) 및 알레르기 관련 질병의 치료제로 사용되고 있는 토종 복분자 (R. coreanus)와 외래종 복분자(R. occidentalis)의 항염증활성을 비교, 분석해 보고자 했다. 그 결과 토종 복분자의 에탄올 추출물이 외래종 복분자의 에탄올 추출물에 비교해 LPS 처리에 의한 NO의 생성을 현저히 억제시키는 것을 관찰 할 수 있었으며, NO와 $PGE_{2}$ 생합성효소인 iNOS와 COX-2 단백질의 발현 또한 억제시킴을 확인할 수 있었다. LPS 유도에 의한 $TNF-{\alpha}$와 IL-6의 생성억제 효과도 토종 복분자 에탄올 추출물이 외래종 복분자 추출물에 비해 탁월함이 관찰 되었다. 이러한 연구결과로 볼 때 토종 복분자 에탄올 추출물이 macrophage에 의해 생성되는 염증반응의 매개물질인 NO, $PGE_2$, 염증성 cytokine 등의 생성을 억제함으로 염증반응을 완화시켜 줄 것으로 판단된다. 차후 항염증활성을 갖는 복분자 추출물의 성분을 동정하는 연구가 더욱더 필요할 것으로 사료되며, 토종 복분자가 천연 항염증활성을 갖는 제품 개발에 있어 유용한 식물자원 원료로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
본 연구는 LPS 처리 큰포식 세포에서 옻 추출물, 옻 첨가 된장 및 간장 추출물의 항염증 및 산화방지 효과를 확인하였다. 염증 반응은 자극이 가해지면 히스타민, 세로토닌, 프로스타글란딘과 같은 혈관 활성물질에 의해 혈관 투과성이 증대되어 염증을 유발하고 사이토카인, 활성산소종, lysosomal enzyme 등 다양한 매개 인자가 관여한다. 자극에 의한 큰포식세포의 염증반응은 $TNF-{\alpha}$, IL-6, $IL-1{\beta}$와 같은 pro-inflammatory cytokine의 발현이 유도되고, iNOS와 COX-2에 영향을 받는 유전자의 발현을 자극하게 되어 NO 및 $PGE_2$ 등의 염증 인자가 생성된다. 이에 따라 옻 추출물, 옻 첨가 된장 및 간장 추추물의 염증 및 산화방지시스템 관련 유전자 발현을 분석하였다. 그 결과 옻 추출물은 LPS 자극에 의해 생성된 NO, 염증성 사이토카인 및 $PGE_2$의 생성을 유의적으로 감소시켰다. 옻 추출물은 산화방지관련 핵 내 전사인자인 Nrf2 및 관련 유전자의 발현에 영향을 미치지 않았다. 옻첨가 된장 및 간장 추출물은 NO 및 염증성 사이토카인의 생성을 억제하였지만, 염증 및 산화방지관련 유전자의 발현에 영향을 미치지는 않았다.
The inhibitory effects of 5,6,3',5'-tetramethoxy 7,4'-hydroxyflavone (labeled as p7F) were elucidated on the productions of proinflammatory cytokines as well as inflammatory mediators in human synovial fibroblasts and macrophage cells. p7F inhibited IL-1${\beta}$ or TNF-${\alpha}$ induced expressions of inflammatory mediators (ICAM-1, COX-2, and iNOS). p7F also inhibited LPS-induced productions of nitric oxide and prostaglandin $E_2$ in RAW 264.7 cells. In order to investigate whether p7F would inhibit IL-1 signaling, p7F was added to the D10S Th2 cell line (which is responsive to only IL-1${\beta}$ and thus proliferates), revealing that p7F inhibited IL-1${\beta}$-induced proliferation of D10S Th2 cells in a dose-response manner. A flow cytometric analysis revealed that p7F reduced the intracellular level of free radical oxygen species in RAW 264.7 cells treated with hydrogen peroxide. p7F inhibited IkB degradation and NF-${\kappa}$B activation in macrophage cells treated with LPS, supporting that p7F could inhibit signaling mediated via toll-like receptor. Taken together, p7F has inhibitory effects on LPS-induced productions of inflammatory mediators on human synovial fibroblasts and macrophage cells and thus has the potential to be an anti-inflammatory agent for inhibiting inflammatory responses.
Objectives : This study was carried out to know the effects of Danggwisayeokgaohsuyusaenggang-tang(hereinafter referred to DST) on arthritis induced by collagen on DBA/1 OlaHsd mice. Methods : For this purpose, DST was orally administered to mouse with arthritis induced by collagen II. Cytotoxicity, high performance liquid chromatograph(HPLC) analysis, arthritis index, value of immunocyte in draining lymph node and paw joint, cytokine were measured in vivo. Results : 1. The cytotoxicity against human fibroblast cells(hFCs) was not measured in any concentration. 2. In HPLC analysis, There are high peak patterns at 8 minute(min), 12 min, 35 min, 45 min. 3. The arthritis index was decreased significantly. 4. The degree of arthritis induced damage of joint of DST group is slight compared with control group in histopathologic observation(Hematoxylin and eosin stain(H&E), Masson's trichrome(M-T) staining). 5. In total cell counts of draining lymph node(DLN) and paw joint, the cells in DLN decreased significantly on DST 200 mg/kg and the cells in paw joint decreased significantly on 200 mg/kg and 50 mg/kg. 6. In DLN, $CD4^+/CD25^+$, $CD3^+/CD69^+$, major histocompatibility complex(MHC), class-II/$CD11c^+$ cells decreased significantly on DST 200 mg/kg and 50 mg/kg $CD3^+/CD8^+$ cells decreased significantly on DST 200 200 mg/kg, $CD4^+$, $CD3^+/CD44^+$ cells decreased. 7. In paw joints, $CD4^+$, $CD11b^+/Gr-1^+$ cells decreased significantly on DST 200 mg/kg and 50 mg/kg. 8. In joints, levels of $IL-1{\beta}$, IL-6, $TNF-{\alpha}$, cyclo-oxygenase-2(COX-2), NOS-II were decreased on DST 200 mg/kg and DST 50 mg/kg. 9. In analysing of cytokine in CD3/CD28 activated spleen, IL-17 was decreased significantly, IL-4 was increased significantly $INF-{\gamma}$ was decreased on DST 200 mg/kg. 10. In analysing of cytokine in collagen activated spleen, IL-17 were decreased significantly, IL-4 was increased significantly. Conclusions : This results demonstrated that DST suppressed the inflammatory progression of collagen-induced arthritis(CIA) mice and supported further studies are required to survey continuously in looking for the effective substance and mechanism in the future.
Objectives : Gamisoyosan (GMS) is a useful prescription for treating insomnia, dysmenorrhea and infertility induced by a stress. Also, GMS has been used traditionally to improve systemic circulation and biological energy production. The purpose of this study was to assess the anti-oxidant activity and anti-inflammatory effects of Gamisoyosan Formulation (Soft extract, GMS-SE). Methods : The biological activities such as anti-oxidant and anti-inflammatory effects were measured through cell line-based in vitro assay. We investigated the anti-oxidant properties of GMS-SE on the 1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl (DPPH) radical, contents of total flavonoid and polyphenol. GMS-SE compared to butyl hydroxy anizole (BHA). Furthermore, based on this result the anti-inflammatory effects of GMS-SE have verified by mechanism from LPS- treated Raw264.7 macrophages. Results : The anti-oxidant activities of GMS-SE increased markedly, in a dose-dependent manner. The GMS-SE showed significant scavenging activity (GMS-SE $500{\mu}g/m{\ell}$ : $32.77{\pm}1.65%$, GMS-SE $1000{\mu}g/m{\ell}$ : $45.06{\pm}1.04%$ and BHA $100{\mu}g/m{\ell}$ : $39.25{\pm}2.41%$ for DPPH assay). and, The total phenolic compound and flavonoids contents of GMS-SE were $73.93{\pm}6.87{\mu}g/mg$ and $698.75{\pm}6.78{\mu}g/mg$. GMS-SE which is LPS has diminished in the LPS-induced release of inflammatory mediators (NO, iNOS, COX2 and PGE2) and pro-inflammatory cytokines (TNF-${\alpha}$, IL-6 and IL-$1{\beta}$) from the RAW264.7 macrophages. Moreover, GMS-SE inhibited the activation of phosphorylation of p38 and ERK MAPKs by induced LPS. Conclusion : The present results indicate that GMS-SE has an anti-oxidant and anti-inflammatory properties, therefore may be beneficial in diseases which related to oxidative stress-mediated inflammatory disorders.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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