본 연구에서는 천연 항균물질의 개발 이용을 위해 황기 종자로부터 인체에 무해한 천연 항균 단백질을 ion exchange chromatography 및 gel filteration을 이용하여, 순수 분리하고 특성을 조사하였다. 황기종자로부터 추출한 천연 항균 단백질은 Aspergillus ocraceus, Penicillium expensum, P. digitatum, Botrytis cineria의 포자 발아 및 효모인 Candida albicans의 생육을 현저하게 저해하였으며 ammonium sulfate 포화도가 0.4일 때 단백질의 침전량이 122.6 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 가장 많았고 항균력도 15.2 mm로 가장 높게 나타났다. 강력한 cation exchange chromatography인 Mono-S를 이용하여 FPLC에서 단백질을 분획하였을때 첫번째 peak에서 분획된 단백질군이 항균력을 보였으며 Superose 12HR gel filteration column을 이용하여 2차 분획 하였을 때 분자량이 19 kDa되는 단일 단백질만을 순수분리 할 수 있었다. 전기 영동한 polyacrylamide gel위에 곰팡이 포자를 중층하는 bio autography로 19 kDa 단백질 band의 항균력을 직접 확인하였으며 분리된 항균 단백질의 아미노 말단의 아미 노산 22잔기를 sequencing하고 thaumatin 및 zeamatin 유사 단백질들과 상동성을 측정한 결과 50%내외의 homology를 나타내었다. 분리된 항균 단백질은 곰팡이 균사가 성장하는 선단부위에 가장 먼저 침투하여 channel을 형성함으로 osmolysis를 일으켜 곰팡이의 생육을 억제하는 것으로 추측할 수 있었다.
황백으로부터 n-BuOH 추출물에서 약 50%의 hyaluronidase 저해효과가 있음이 확인되었다. n-BuOH 분획 농축물을 Sephadex LH-20 및 MCI gel CHP-20 column chromatography로 정제한 결과 저해활성을 가지는 Jatrorrhizine을 분리, 동정하였다. 황백추출물과 Jatrorrhizine은 모두 농도 의존적으로 NO 발현을 억제하였고, 100 ${\mu}g/mL$의 농도에서 60% 이상의 억제 효과를 나타내었다. 황백추출물과 Jatrorrhizine의 iNOS와 COX-2의 억제력을 살펴본 결과, 100 ${\mu}g/mL$의 농도에서 45% 및 29%의 저해효과를 나타내었다. 따라서 황백추출물 및 Jatrorrhizine은 LPS로 유도되어진 대식세포주인 Raw264.7 세포에서의 염증반응의 억제효과를 기대할 수 있었다.
황백 추출물의 tyrosinase 억제효과를 검토한 결과 60% 에탄올추출물에서 25% 정도의 억제효과를 나타내었으며, melanoma세포(B16F10)에서의 멜라닌 생합성을 측정한 결과 31.2%의 저해활성을 나타내어 멜라닌생성억제효과가 있음을 알 수 있었다. 황백추출물에서 tyrosinase저해 활성물질을 정제하고자 Sephadex LH-20과 MCI-gel CHP-20 open column을 이용하여 용출한 결과 순수하게 정제된 활성물질을 얻을 수 있었으며, 정제물질을 구조 동정한 결과 미백물질은 obacunone으로 동정되었다. 정제된 obacunone은 35.1%의 저해활성을 나타내어 미백 활성이 비교적 우수함을 확인할 수 있었으며, 황백추출물로부터 분리한 미백물질을 이용한 미백 화장품을 제조하여 관능평가를 한 결과 우수한 평가를 받았다. 미백화장품의 안정성 검사를 위해 pH, 점도 및 복소탄성률의 변화를 측정하였으나 저장기간 60일 동안 큰 변화를 나타내지 않았다. 또한 온도변화, 인공 및 자연광에 의한 변화, 온도순환에 의한 변화 및 냉 해동순환(Freeze & Thaw cycling)에 따른 변화들 살펴본 결과 저장 60일 동안 모든 조건에서 상의 분리와 변색, 변취 등의 변화 없이 안정성을 나타내었다.
Huang, Long Shuang;Sok, Dai-Eun;Kim, Hyoung-Chin;Yoon, Won-Kee;Kim, Hwan-Mook;Kim, Mee-Ree
Preventive Nutrition and Food Science
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제11권1호
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pp.67-72
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2006
To determine the amount of phytate in rice grains from various cultivars, two methods were employed and compared in respect of the accuracy and conveniency. Phytate in rice samples was extracted with HCl, and then the extracts were subjected to an anion-exchange column. Finally, the phytate in eluate was quantitated using two methods: one method is based on the complex formation between ferric ion and sulfosalicylic acid in the presence of phytate, and the other is the prior acid digestion of phytate sample, followed by the colorimetric determination of liberated phosphorus. Although two methods showed similar values of phytate in rice samples, the former method is simpler and more precise than the latter. Moreover, the former is more reliable for the samples with lower phytate levels. Especially, the dilution condition of rice sample before anion exchange column separation was important for the recovery of phytate in rice samples. Based on the former method, the amount of phytate in rice of various cultivars was estimated to range from 7.3 mg/g to 12.4 mg/g rice. This method would be useful for the determination of phytate in crop samples with a lower level of phytate, one of anti-nutrients in some agricultural plants.
Lipomyces starkeyi ATCC 74054를 UV로 돌연변이하여 선발한 JLC26의 효소적인 특성을 알아보았다. 효소는 70% ammonium sulfate로 침전시키고, CM-Sepharose column chromatography로 부분 정제하였다. 이때 얻어진 각 효소 specific activity는 amylase 활성의 경우는 5367 unit/mg이었고 dextranase 활성의 경우는 3045 unit/mg이었다. 효소의 최적 pH와 온도는 5.5와 37$^{\circ}C$였으며, pH 2.5-5.5와 4-55$^{\circ}C$에서 안정성을 보였다. 부분 정제된 효소는 amylase와 dextranase 활성을 동시에 보이는 100 KDa의 크기를 가지는 하나의 단백질이었다. 이 효소는 maltotriose 기질과 반응할 때 disproportionation reaction 현상을 보여 가지구조를 지닌 panose와 ${\alpha}(1{\rightarrow}6)$glucosylmaltotriose을 생산하였다. 이 균은 starch 배지에서 키워 amylase와 dextranase 활성을 동시에 지니는 효소를 생산함으로써 dextran과 mutan은 구성된 치태를 분해하는 효소재료로의 이용성이 기대된다.
Recently, due to molecular biology and engineering technology, DNA microarray makes people watch thousands of genes and the state of variation from the tissue samples of living body. With DNA Microarray, it is possible to construct a genetic group that has similar expression patterns and grasp the progress and variation of gene. This paper practices Cluster Analysis which purposes the discovery of biological subgroup or class by using gene expression information. Hence, the purpose of this paper is to predict a new class which is unknown, open leukaemia data are used for the experiment, and MCL (Markov CLustering) algorithm is applied as an analysis method. The MCL algorithm is based on probability and graph flow theory. MCL simulates random walks on a graph using Markov matrices to determine the transition probabilities among nodes of the graph. If you look at closely to the method, first, MCL algorithm should be applied after getting the distance by using Euclidean distance, then inflation and diagonal factors which are tuning modulus should be tuned, and finally the threshold using the average of each column should be gotten to distinguish one class from another class. Our method has improved the accuracy through using the threshold, namely the average of each column. Our experimental result shows about 70% of accuracy in average compared to the class that is known before. Also, for the comparison evaluation to other algorithm, the proposed method compared to and analyzed SOM (Self-Organizing Map) clustering algorithm which is divided into neural network and hierarchical clustering. The method shows the better result when compared to hierarchical clustering. In further study, it should be studied whether there will be a similar result when the parameter of inflation gotten from our experiment is applied to other gene expression data. We are also trying to make a systematic method to improve the accuracy by regulating the factors mentioned above.
김치 조직의 연화에 관여하는 효소인 polygalacturonase(PG)를 배추에서 추출하여 황산암모늄 분획, 이온교환크로마토그래피 및 FPLC를 이용하여 D-PG, C-1, C-2 PG 세 분획으로 분리 정제하여 특성을 조사하였다. 분리된 세 분획의 활성 최적 온도는 $65^{\circ}C$, 최적 pH가 5.2였으며 pH$4.5{\sim}8.0$ 범위에서 안정하였다. NaCl에 의한 영향은 0.3M NaCl에서 최대의 활성을 보였으나 0.6M 이상에서는 저해를 받았으며 $CaCl_2$의 경우 $0{\sim}0.5mM$ 농도에서는 활성이 크게 영향을 받지 않았으나 0.8mM에서는 저해를 받았다. 열불활성화 특성은 isozyme간에 큰 차이가 없었으며 1차 반응을 따랐다. 이 효소 isozyme의 z값은 $8.4{\sim}9.3^{\circ}C,\;80^{\circ}C$에세 D값은 $102{\sim}126$초였다. 이 호소의 불활성화 값을 이용하여 retort pouch 김치 살균공정에 적용하고 역가의 잔존 가능성에 대하여 고찰하였다.
BACKGROUND: Heavy metal adsorptionnot only depends on biochar characteristics but also on the nature of the metals involved and on their competitive behavior for biochar adsorption sites. The goal of this study was to investigate the competitive absorption characteristics of Cu and Cd in mono-metal and binary-metal forms by biochar derived from Phragmites communis. METHODS AND RESULTS: Batch and column experiments were conducted to evaluate the competitive adsorption characteristics of the biocharfor Cu and Cd. In the batch experiments, the maximum adsorption capacity of Cd(63 mg/g) by biochar was higher than that for Cu (55 mg/g) in the mono-metal adsorption isotherm. On the other hand, the maximum Cu adsorption capacity (40 mg/g) by biochar was higher than that for Cd(25 mg/g) in the binary-metal adsorption isotherm. Cu was the most retained cations. Cd could be easily exchanged and substituted by Cu. The amounts of adsorbed metals in the column experiments were in the order of Cd (121 mg/g) > Cu (96 mg/g) in mono-metal conditions, and Cu (72 mg/g) > Cd (29 mg/g) in binary-metal conditions. CONCLUSION: Overall, the results demonstrated that competitive adsorption among metals increased the mobility of these metals. Particularly, Cd in binary-metal conditions lost its adsorption capacity most significantly.
Gas chromatography를 이용한 profiling과 신속한 동정을 허브류에 존재하는 유기산의 분석에 적용하여 보았다. 흡착제로 Chromosorb P와 용출 용매로 diethyl ether를 사용하는 고체상 추출법을 이용하여 허브추출물로부터 유기산을 분리한 후, tert-butyldimethylsilyl 유도체로 만들어 극성이 다른 DB-5와 DB-17 컬럼으로 동시분석하였다. 두 컬럼에서 분리된 유기산 피크들을 dual capillary column system의 retention index(RI) library 탐색과 RI specta 비교로 신속하고 정확하게 동정할 수 있었으며 이들을 GC-MS로 확인하였다. 허브추출물들의 유기산 분석 결과 fatty acid, dioic acid, hydroxy acid, aromatic acid등 24가지의 유기산이 동정되었고 각 허브의 종류에 따라 특징적인 유기산 GC-profile을 나타내었다. 각 허브추출물의 GC profile의 유기산 조성만을 단순화시킨 RI spectra로 표현한 결과, 각 허브의 유기산 패턴의 분별이 매우 용이하였다.
목이버섯으로부터 항혈전활성과 항혈소판응집활성을 지니는 물질을 추출하여 추출물의 혈행개선활성을 조사하였다. 건조 목이버섯을 0.1 N NaOH, methanol, ethanol 등의 용매를 사용하여 추출하여 각 추출물의 항혈전활성을 activated partial thromboplastin time, thrombin time과 prothrombin time 값으로 측정한 결과 methanol 용해성 분획이 각각 100, 124, 54 s로 조사한 분획 중에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 활성 분획을 DEAE-Sepharose CL6B ion exchange column chromatography와 Sephacryl 400-HR gel permeation column chromatography로 정제하였으며 활성물질은 분자량이 150 kDa 이상인 다당류이며 mannose가 주요 구성당으로 되어 있는 xyloglucomannan의 복합다당체인 것으로 확인되었다. 정제된 다당류의 항혈전활성은 thrombin 활성을 저해하기 때문인 것으로 해석되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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