돼지의 장에서 분리된 Lαb. acidophilus GP4A가 생산하는 박테리오신은 typsin과 pepsin에 민감한 단백질성 물질이며 조사되어진 총 17종의균주들 중 Lactobacillus, Acinetobacter, Bacillus, Klebsiella, Streptococcus, Staphylococcus, Yersinia 속 등에 대하여 항균작용을 나타내었다. 또한 넓은 pH 조건에서도 안정하였으며 $65^{\circ}C$에서 20분가열시에는 어떠한 활성의 변화도 보이지 않았고 특히 $121^{\circ}C$에서 60분 가열시에도 완전하게 활성이 소실되지 않았다. 최대 활성의 박테리오신을 생산하기 위하여 적정 배양온도와 배지 pH를 조사한 결과 $37^{\circ}C$ 및 $40^{\circ}C$에서 그리고 MRS 배지 pH가 6.5${\sim}$7.5 사이 인 경우, 가장 높은 활성의 박테리오신이 생산되었다. 또한 Lab. delbrueckiisubsp. lactis 4797이 접종된 배지에 접종 초기와 2시간 후에 5% 농도로 cell free spent broth를 첨가시 18시간까지 성장을 억제할 수 있었으며$2{\times}10^8$ CFU/ml로 지시균이 접종된 배지에 5%와 10%로 첨가시에는 4시간 후 지시균의 생균수가 각각 약 10배 및 100배 정도 감소됨을 알 수 있었다. 그리고, 박테리오신은 cell free spent broth에서 냉장온도에 저장시 약 30일까지 활성이 유지 되었으며 (p<0.05) ammonium sulfate를 50%농도로 처리하고 침전물을 회수하여 Octyl sepharose CL-4B column chromatography를 실시한 결과 21.7%의 활성 회수율과 13.6배의 정제도를 보여주었다.
Xanthomonas campestris pv. glycines 8ra causes bacterial pustule disease on susceptible soybean leaves and produces a bacteriocin, named glycinecin, against related bacteria such as Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. The antimicrobial activity of the glycinecin was effective to most tested Xanthomonas species. X. c. pv. glycines 8ra was able to produce the glycinecin in liquid media as well as solid media. Maximal productivity of glycinecin was obtained at 3$0^{\circ}C$ in the early stationary phase of growth of the X. c. pv. glycines 8ra. The production of glycinecin was not dependent on the initial inoculum level but on cell density. Glycinecin was very sensitive to proteolytic enzymes such as trypsin and proteinase K but resistant to DNase and RNase. The culture supernatant of X. c. pv. glycines 8ra retained some of its antimicrobial activity after 15 min at 6$0^{\circ}C$. It is stable at wide range of pH. The glycinecin showed the bactericidal activity after the adsorption of the glycinecin to the sensitive bacterial cell.
본 연구에서는 묵은지로부터 분리된 박테리오신을 생산하는 이상발효 유산균 및 내산성 효모가 사워도우의 저장 기간 연장과 품질 개선에 미치는 영향을 조사하였다. 유전자 염기서열 분석 결과 빵 부패세균인 Bacillus 속에 대한 항균활성을 나타낸 이상발효 유산균은 Leuconostoc mesenteroides LAS112, Lactobacillus brevis LAS129 및 L. mesenteroides subsp. dextranicum LAB137으로 동정되었고, 산성 pH 하에서 증식 가능한 효모는 Pichia membranifaciens YS05, Pichia fermentans YS19 및 Pichia anomala YS26으로 확인되었다. 사워도우 발효에 사용된 L. brevis LAS129는 L. mesenteroides LAS112 및 L. mesenteroides subsp. dextranicum LAS 137 보다 더많은 양의 초산과 박테리오신 활성을 나타내었으나, LAS112는 가장 많은 양의 유산을 생산하였다. Bacillus subtilis ATCC 35421에 대한 최대의 박테리오신 활성(640 AU/g)은 L. brevis LAS129와 P. membranifaciens YS05 혹은 P. anomala YS26으로 혼합 발효시킨 사워도우 내에서 관찰되었다. $30^{\circ}C$에서 24시간 발효 후 사워도우 내 LAS129의 균수($10^9CFU/g$)는 YS05 혹은 YS26의 효모 균수($10^7CFU/g$)보다 높게 검출되었다. 한편, 이들 균주들을 이용하여 발효시킨 사워도우 내에 존재하는 빵 부패균의 균수는 대조구 보다 유의하게(P < 0.05) 낮은 수준으로 나타났다.
본 연구에서는 히스타민을 생성하는 유산균과 이에 항균 활성을 나타내는 프로바이오틱 유산균을 혼합 접종하여 제조한 렌넷 커드 내 항균물질과 히스타민 생산에 영향을 미치는 인자를 조사하였다. 프로바이오틱 유산균인 Lactobacillus plantarum FIL20과 Lactobacillus sakei PIL52는 히스타민 생성균인 Lactobacillus brevis LAS129, Enterococcus faecium SBP12 및 Enterococcus faecalis SBP58에 대해 강력한 항균 물질을 생산하였고, 프로바이오틱균이 생산한 유산과 박테리오신의 항균 활성은 농도의존적이었다. 렌넷 커드 제조를 위해 접종한 프로바이오틱 유산균의 균수가 많을수록 항균 물질 생성량이 증가되어 히스타민 생성균에 대한 항균 활성도 높아졌다. 프로바이오틱 유산균과 히스타민 생성균은 NaCl 10% 첨가에 의해 증식이 억제됨으로써 렌넷 커드 내에 항균 물질과 히스타민의 함량은 대조구보다 유의하게 낮았다(P < 0.05). 한편, 프로바이오틱 유산균과 히스타민 생성균을 혼합하여 제조한 렌넷 커드를 $25^{\circ}C$에서 5일간 저장 했을 때 히스타민의 함량은 유의하게 증가되지 않았으나, $20^{\circ}C$에서 20일간 저장한 경우에는 프로바이오틱 유산균이 생산한 항균 물질의 활성이 감소됨에 따라 렌넷 커드 내에 히스타민의 함량이 유의하게 증가되었다(P < 0.05).
젓갈에서 분리된 Lactococcus lactis SA72균주로부터 유용 박테리오신인 lacticin SA72의 생산을 최적화하기 위해 배양용 배지 및 배양조건을 검토하였다. 유산균의 대표적인 배양 배지인 BHI, MRS, Ml7배지에 대해서 검토한 결과, 이중 MRS배지가 최적 배지로 결정되었다. 이 MRS배지에 0.5% glucose를 첨가한 경우, 더 높은 활성을 얻을 수 있었다. pH의 영향을 검토하였을 때는, 초기 pH에서는 pH 7이었고, 발효조에서의 배양기간 동안 pH 6으로 조절할 때가 높은 활성을 보였다. 배양온도는 $32^{\circ}C$로 유지할 때가 활성이 우수하였다. 회분식 배양에서는 최대 3,200AU/m1을 얻을 수 있었으며, 유가식 배양으로 10g/1 glucose를 주기적으로 공급하였을 때 , 약 6,400 AU/ml로 가장 높은 활성을 얻을 수 있었다.
25 종류의 신선 과채류로부터 MRS 한천 고체배지에서 생육하는 1,250주의 유산균을 분리한 후 식중독 세균인 Escherichia coli 0157:H7, Listeria monocytogenes, Bacillus cereus와 유산균인 Lactobacillus plantarum, L. casei, Lactococcus lactis subsp. lactis에 대한 생육저해활성을 조사하였다. 조사한 1,250 균주 중에서 23 종류의 과채류에 존재하는 607 균주(총 조사균주의 49%)가 E. coli 0157:H7, L. monocytogenes 또는 B. cereus에 대한 항균활성을 나타내었다. 이 균주들의 L. plantarum, L. casei, Lactococcus lactis subsp. lactis에 대한 항균활성을 측정한 결과, 7 종류의 과채류에 존재하는 24 균주(총 균주의 3%)가 박테리오신 유사활성을 나타내었으며, 이 균주들의 생리적 형태학적 특징을 조사한 결과 전형적인 유산균의 특징을 지니고 있었다. 24 균주 중에서 3 균주는 nisin을 생산하는 것으로 판단되었으며, RAPD-PCR 분석을 통하여 동일한 과채류에 존재하는 균주들은 유사한 분류학적 특징을 지니고 있는 것으로 확인되었다.
A total of 113 Staphylococcus hyicus subsp. hyicus which had been isolated from healthy and diseased pigs were examined for their ability to produce staphylococcins. For selection of staphylococcin indicator strains, 80 strains were randomly selected from 113 strains, and were tested as indicator and as donator. The 8 indicators were chosen and used to type all of the strains. The ability to produce staphylococcin could be demonstrated in 43 strains (38.1%) of 113 Staph hyicus subsp. hyicus. The frequency of activity was higher in diseased pig strains (44.4%) than in healthy pig strains(36.8%). 43 staphylococcin producer strains were differentiated into 10 reaction types. The inhibitory effects of the staphylococcin (N27 and R 3) on other staphylococci differed by the staphylococcal species tested. All the gram-negative species were completely resistant to the three producing strains.
Bacteriocins are classified as proteins which are produced by heterogeneous groups of bacteria, having and antimicrobial effect of the closely related organisms. Recently, bacteriocins derived from lactic acid bacteria and other food-related organisms have been the subject of much research on potential food biopreservatives. The goal of this study was to screen and characterize the bacteriocinogenic lactic acid bacteria from Jeot-gal(commercial fermented fish foods). All bacteriocinogenic isolates were identified as lactic acid bacteria. Isolates NK24, NK34, and SA72 were tentatively identified as Lactobacillus brevis, according to the API 50 CHL kit database. All antimicrobial substances produced from four lactic acid bacteria isolates completely lost their antibacterial activity after being treated with some proteases, indicating to their proteinaceous nature. The bacteriocin produced from isolates NK24, NK34, and SA72 showed a broad spectrum of activity when compared to those produced from isolate SA131. All bacteriocins isolated during the course of this study showed a bactericidal mode of inhibition.
The recombinant DNA pLR5cat_PSAB, in which pediocin PA-1 structural and immunity genes (pedAB) fused with the promoter and deduced signal sequence of an ${\alpha}$-amylase gene from a bifidobacterial strain were inserted in Escherichia coli-lactobacilli shuttle vector pLR5cat, was transferred to Lactobacillus reuteri KCTC 3679 and the transformant presented bacteriocin activity. The recombinant L. reuteri KCTC 3679 transformed with the shortened pLR5cat(S)_PSAB, where a nonessential region for the lactobacilli replicon was removed, also showed bacteriocin activity. The molecular mass of the secreted pediocin PA-1 from the recombinant bacteria was the same as that of native pediocin PA-1 (~4.6 kDa) from Pediococcus acidilactici K10 on a sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) gel. In cocultures with Listeria monocytogenes, the recombinant L. reuteri KCTC 3679 effectively reduced the viable cell count of the pathogenic bacterium by a 3 log scale compared with a control where L. monocytogenes was incubated alone.
숙성된 백김치로부터 얻은 Lactobacillus brevis BK11의 증식과 항균물질 생산에 대한 배양용 배지 종류, 공기 조성, 초기 pH, 배양온도 및 시간과 프리바이오틱스의 영향을 조사하였다. L. brevis BK11의 증식과 항균물질 활성은 BHI와 M17 배지 보다는 MRS 배지 상에서 더 높게 나타났으며, 배지의 초기 pH 6.0에서 생산량이 최대에 이르렀다. 혐기적 조건보다는 호기적 및 미호기적 조건에서 배양했을 때와 $25^{\circ}C$ 보다는 $30^{\circ}C$와 $37^{\circ}C$ 온도에서 배양했을 때 균 성장과 항균물질 생산에 유리하였다. BK11 균주는 배양 24시간 만에 정지기에 도달하였고, 36시간 후부터는 생균수가 감소되었고, 배양상등액과 박테리오신 용액의 항균 활성은 $37^{\circ}C$, 24-30시간 배양했을 때 가장 높았다. 세포수와 유산 및 박테리오신 생산은 프락토올리고당 1-2% 첨가한 경우에 가장 높았으나, 이뉼린과 라피노오스는 균 증식에 별다른 도움을 주지 못했다. 결과적으로 L. brevis BK11의 항균물질 생산은 세포수와 관계 있었으며, 이러한 최적 조건 하에서 배양한 경우 Helicobacter pylori ATCC 43504의 성장을 효과적으로 저해할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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