고추장의 품질 향상과 전통 고추장과 유사한 관능적 특성을 갖는 고추장을 만들기 위해 재래식 전통 고추장에서 분리한 Bacillus licheniformis 균주와 공장에서 대량 생산을 위해 개량해온 Aspergillus oryzae와 비교적 호염성이며 알코올 발효 능력이 우수한 Saccharomyces rouxii를 혼용하여 고추장을 담근 후 180일까지의 숙성 기간 중 고추장의 품질 변화를 조사하였다. 고추장 숙성 중 유리당의 함량은 효모 첨가구가 다른 시험구에 비해 약간 적었으며 가장 많이 함유된 유리당은 glucose였다. 알코올 함량에 있어서는 ethanol이 현저하게 많았으며 아미노산성 질소는 A. oryzae 단용구보다 B. licheniformis와의 혼용구에서 높은 함량을 보였으며 숙성 30일에서 60일 사이에 급격히 증가하였고 90일 이후에는 감소하였다. 고추장 매운 맛의 주성분인 capsaicin 함량은 숙성기간이 경과해도 거의 변화가 없는 것으로 나타났다. 90일 및 180일 숙성된 고추장의 관능 검사 결과 A. oryzae와 B. licheniformis 및 S. rouxii를 혼용하여 제조한 고추장이 맛과 향에서 가장 좋은 것으로 평가되었다. 따라서 전통고추장과 유사한 관능적 품질을 갖는 고추장을 제조하기 위해서는 고초균과 효모를 혼용하여 koji를 제조하고 숙성시키는 것이 바람직한 방법이라 하겠다.
Bacillus licheniformis N1, previously developed as a biofungicide formulation N1E to control gray mold disease of plants, was investigated to study the bacterial traits that may be involved in its biological control activity. Two N1E based formulations, bacterial cell based formulation PN1E and culture supernatant based formulation SN1E, were evaluated for disease control activity against gray mold disease of tomato and strawberry plants. Neither PN1E nor SN1E was as effective as the original formulation N1E. Fractionation of antifungal compounds from the bacterial culture supernatant of B. licheniformis N1 indicated that two different cyclic lipopeptides were responsible for the antimicrobial activity of the N1 strain. These two purified compounds were identified as iturin A and surfactin by HPLC and LCMS. The purified lipopeptides were evaluated for plant disease control activity against seven plant diseases. Crude extracts and purified compounds applied at 500 ${\mu}g/ml$ concentration controlled tomato gray mold, tomato late blight and pepper anthracnose effectively with over 70% disease control value. While iturin showed broad spectrum activity against all tested plant diseases, the control activity by surfactin was limited to tomato gray mold, tomato late blight, and pepper anthracnose. Although antifungal compounds from B. licheniformis N1 exhibited disease control activity, our results suggested that bacterial cells present in the N1E formulation also contribute to the disease control activity together with the antifungal compounds.
역미셀을 이용하여 박테리아 (Bacillus licheniformis)의 발효액으로부터 알카리성 단백질 분해효소를 분리할 때 여러가지 인자들, 즉 이온강도, pH, 계면활성제의 농도 등이 분리효율에 미치는 영향에 대하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 이온강도를 높여 주기 위하여 KCI을 사용하여 조절하였으며, 발효액의 이온강도를 높여줄수록 추출되는 효소의 양은 감소하였으며, 역추출 용액의 이온강도를 높여줄수록 역추출되는 효소의 양은 증가하였다. 계면활성제로는 sodium-di-2-ethylhexyt sulfosuce-inate (Aerosol-OT또는 AOT)를 사용하였으며, 유기상내의 계면활성제 농도를 높여줄수록 더 많은 양의 효소가 추출됨을 알 수 있다. pH는 IN HCI과 0.1N NaOH를 사용하여 조절하였고, 발효액의 pH가 5.3이었을 때 가장 많은 양의 변성되지 않은 효소가 추출되었으며, 역추출 용액의 pH가 7.5일 때 가장 많은 양의 변성되지 않은 효소가 역추출됨을 알 수 있다.
Tripti, Kumari;Sayantan, D.;Shardendu, Shardendu;Singh, Durgesh Narain;Tripathi, Anil K.
한국미생물·생명공학회지
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제42권3호
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pp.238-248
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2014
The metalloid arsenic (Z = 33) is considered to be a significant potential threat to human health due to its ubiquity and toxicity, even in rural regions. In this study a rural region contaminated with arsenic, located at longitude $85^{\circ}$ 32'E and latitude $25^{\circ}$ 11'N, was initially examined. Arsenic tolerant bacteria from the rhizosphere of Amaranthas viridis were found and identified as Bacillus licheniformis through 16S rRNA gene sequencing. The potential for the uptake and removal of arsenic at 3, 6 and 9 mM [As(V)], and 2, 4 and 6 mM [As(III)], and for the reduction of the above concentrations of As(V) to As(III) by the Bacillus licheniformis were then assessed. The minimal inhibitory concentrations (MIC) for As(V) and As(III) was determined to be 10 and 7 mM, respectively. At 3 mM 100% As(V) was uptaken by the bacteria with the liberation of 42% As(III) into the medium, whereas at 6 mM As(V), 76% AS(V) was removed from the media and 56% was reduced to As(III). At 2 mM As(III), the bacteria consumed 100%, whereas at 6 mM, the As(III) consumption was only 40%. The role of pH was significant for the speciation, availability and toxicity of the arsenic, which was measured as the variation in growth, uptake and content of cell protein. Both As(V) and As(III) were most toxic at around a neutral pH, whereas both acidic and basic pH favored growth, but at variable levels. Contrary to many reports, the total cell protein content in the bacteria was enhanced by both As(V) and As(III) stress.
Three kinds of xylanases, X-C, X-I, and X-II, were separated from culture filtrate of an alkalophilic bacteria, Bocillus licheniformis OR-1. Their molecular weights were estimated to be 29, 000, 50, 000, and 34, 000, respectively. They were most active at pH 6.0-6.5, and at temperature of 5$0^{\circ}C$. Mercurc ion and p-chloromercurybenzoate inhibited the xylanase activity of X-C and X-II remarkably, whereas X-I was not affected. Xylanase X-I hydrolyzed barley straw xylan liberating xylose, xylobiose, and arabinose, while X-C and X-II produced only xylobiose and xylotriose.
본 연구는 우리나라 장수지역에서 제조된 전통된장을 수거하여 식중독세균 오염도와 미생물 군집 현황을 분석하고, 분리된 미생물 군집의 Bacillus cereus 길항 효과를 평가함으로써 전통된장의 미생물학적 안전성을 평가하고자 하였다. 전통된장의 미생물학적 안전성을 평가하기 위해 일반세균, 대장균군, 식중독세균을 실험한 결과 일반세균수는 $10^6{\sim}10^9CFU/g$의 분포를 나타내었고 대장균군은 불검출 되었다. 식중독세균 중 B. cereus는 전통된장 10개 중 7개에서 검출되었으나 기타 식중독균은 불검출 되었다. 실험 결과 장수지역 전통된장에 가장 문제가 되는 미생물은 B. cereus로 나타나 전통된장의 안전성 확보를 위해 B. cereus 제어가 중요한 것으로 판단되었다. 전통된장의 미생물 군집 분석결과 Bacillus subtilis가 155균주(47.4%)로 가장 높은 분포를 나타내었으며, B. licheniformis 68균주(20.8%), B. amyloliquefaciens 46균주(14.1%)로 높은 분포를 나타내는 등 총 327균주가 동정되었다. B. cereus에 대한 길항 효과를 평가한 결과 분리균주 327균주 중 20균주(6.1%)에서 9~12 mm 생육저지환이 관찰되었으며, B. subtilis가 12균주로 가장 많았고, B. amyloliquefaciens 5균주, B. licheniformis 3균주 순으로 분포하였다. 전통된장의 경우 B. cereus 오염도가 식품공장 제조 된장에 비해 높지만 B. cereus 길항효과를 나타내는 균주가 많은 것으로 판단되었다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 전통된장에 오염된 B. cereus 위험성은 기존의 생각보다 낮을 것으로 판단되며, 향후 다수의 전통된장을 대상으로 한 B. cereus 길항 효과 실험이 필요한 것으로 판단되었다.
본 연구에서는 경기(용인, 안성, 광주) 및 강원지역(오대산)에서 재래식 방법으로 제조된 청국장을 수집하여 지역별 발효 균주들의 동정과 특성분석 및 당 발효능을 조사하였다. 수집된 청국장에서 22종류의 균주를 분리하였고, 16S rDNA의 서열을 분석한 결과 이들은 대부분 Bacillus subtilis, B. licheniformis로 동정되었다. 경기지역의 주요 발효 균주는 B. subtilis와 B. licheniformis, 강원 지역은 B. licheniformis로 동정되었으며, 일반적인 생장 특성은 $5{\sim}7$시간의 유도기를 지나 $23{\sim}40$시간 이후에 휴지기로 접어들었다. 휴지기에 접어든 분리 균주들의 최대 생장 총 균수는 $1{\times}10^6\;CFU/ml$과 $5{\times}10^7\;CFU/ml$ 사이에 있었다. 균주들 간 당 발효능의 차이에 있어서 용인 지역은 D-xylose, xylitol, D-tagatose, Methyl-$\alpha$-D-mannopyranoside가, 안성은 D-lactose, D-tagatose, D-xylose, Methyl-$\alpha$-D-mannopyranoside, amygdalin, arbutin, esculin, 2-keto-gluconate가, 광주는 L-rhamnose, inositol, D-mannitol, D-sorbitol, celibiose, gluconate가, 그리고 오대산은 D-lactose에서 좋은 당 발효능을 보였다.
본 연구의 목적은 3년 이상 숙성된 재래식 된장으로부터 아민 산화 효소를 생산하는 프로바이오틱 바실러스균을 분리 동정하는 것이다. 시료로부터 분리된 바이오제닉 아민(biogenic amines, BA) 생성균은 Bacillus sp. TS09, Bacillus licheniformis TS17, Bacillus subtilis TS19, Bacillus cereus TS23, Bacillus sp. TS30, Bacillus megaterium TS31, B. subtilis TS44, Bacillus coagulans TS46 및 Bacillus amyloliquefaciens TS59 등으로 동정되었다. 한편 동일한 시료로부터 분리된 B. subtilis TS04와 TS50은 인공 위액 및 담즙액에 대한 저항성, 장내 상피세포에 대한 부착능 및 BA 생성균(Bacillus sp. TS30 및 B. subtilis TS44)에 대한 박테리오신 생산 등의 프로바이오틱 활성을 나타내었다. 게다가 B. subtilis TS04와 TS50 균주가 생산한 아민 산화 효소에 의하여 카다베린, 푸트레신 및 티라민의 생성량을 감소시킬 수 있었으므로 이들은 BA 중독 위험을 낮출 수 있는 프로바이오틱스 소재로서의 활용 가치가 높을 것으로 판단된다.
볏짚으로부터 200 bacilli 균주들이 분리되었고 이중 3 균주는 Bacillus cereus ATCC1457를 강력히 저해하였다. 분자생물학적 방법들을 사용하여 이들을 동정한 결과 RSC15는 B. licheniforms로 RSC26과 RSC42는 B. amyloliquefaciens들로 확인되었다. 항균물질들은 내열성을 지녀서 $100^{\circ}C$ 20분 처리 후에도 활성의 절반이 유지되었다. 배양상등액의 SDS-PAGE 분석결과 2종의 다른 항세균물질들이 확인 되었고 이들은 3.5 kDa 이하였다. 컬럼크로마토그래피 방법들을 사용하여 B. licheniformis RSC15가 만드는 항세균물질들을 부분정제한 결과 비활성은 955.0 AU/mg에서 6,400 AU/mg으로 증가하였다.
In the present study, the stabilizing effect of four different biological osmolytes on Bacillus licheniformis ${\gamma}$-glutamyl transpeptidase (BlGGT) was investigated. BlGGT appeared to be stable under temperatures below $40^{\circ}C$, but the enzyme retained less than 10% of its activity at $60^{\circ}C$. The tested osmolytes exhibited different degrees of effectiveness against temperature inactivation of BlGGT, and sucrose was found to be the most effective among these. The use of circular dichroism spectroscopy for studying the secondary structure of BlGGT revealed that the temperature-induced conformational change of the protein molecule could be prevented by the osmolytes. Consistently, the molecular structure of the enzyme was essentially conserved by the osmolytes at elevated temperatures as monitored by fluorescence spectroscopy. Sucrose was further observed to counteract guanidine hydrochloride (GdnHCl)-and urea-induced denaturation of BlGGT. Taken together, we observed evidently that some well-known biological osmolytes, especially sucrose, make a dominant contribution to the structural stabilization of BlGTT.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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