• 제목/요약/키워드: Assay validation

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Analysis of Zirconium and Nickel Based Alloys and Zirconium Oxides by Relative and Internal Monostandard Neutron Activation Analysis Methods

  • Shinde, Amol D.;Acharya, Raghunath;Reddy, Annareddy V.R.
    • Nuclear Engineering and Technology
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    • 제49권3호
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    • pp.562-568
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    • 2017
  • Background: The chemical characterization of metallic alloys and oxides is conventionally carried out by wet chemical analytical methods and/or instrumental methods. Instrumental neutron activation analysis (INAA) is capable of analyzing samples nondestructively. As a part of a chemical quality control exercise, Zircaloys 2 and 4, nimonic alloy, and zirconium oxide samples were analyzed by two INAA methods. The samples of alloys and oxides were also analyzed by inductively coupled plasma optical emission spectroscopy (ICP-OES) and direct current Arc OES methods, respectively, for quality assurance purposes. The samples are important in various fields including nuclear technology. Methods: Samples were neutron irradiated using nuclear reactors, and the radioactive assay was carried out using high-resolution gamma-ray spectrometry. Major to trace mass fractions were determined using both relative and internal monostandard (IM) NAA methods as well as OES methods. Results: In the case of alloys, compositional analyses as well as concentrations of some trace elements were determined, whereas in the case of zirconium oxides, six trace elements were determined. For method validation, British Chemical Standard (BCS)-certified reference material 310/1 (a nimonic alloy) was analyzed using both relative INAA and IM-NAA methods. Conclusion: The results showed that IM-NAA and relative INAA methods can be used for nondestructive chemical quality control of alloys and oxide samples.

Anti-Oxidant Effects of Highly Bioavailable Curcumin Powder in High-Fat Diet Fed- and Streptozotocin-Induced Type 2 Diabetic Rats

  • Paik, Jean Kyung;Yeo, Hee Kyung;Yun, Jee Hye;Park, Hyun-Ji;Jang, Se-Eun
    • 한국식품영양학회지
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    • 제32권2호
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    • pp.133-137
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    • 2019
  • Curcumin is a hydrophobic polyphenol extracted from turmeric that exhibits a variety of biological functions has albeit with limited efficacy as a functional food material owing to its low absorption when administered orally. The newly developed curcumin powder formulation exhibits improved absorption rate in vivo. This study evaluates the anti-oxidant effects of $Theracurmin^{(R)}$ (TC), which is highly bio-available in curcumin powder. The antioxidant activity of TC was investigated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) scavenging activity, ferrous reducing antioxidant power (FRAP) assays, NO radical, superoxide radical, $H_2O_2$ scavenging activity, and total antioxidant capacity (TAC). Additionally, we evaluated the antioxidant activity of TC in high-fat diet (HFD)-fed streptozotocin (STZ)-induced Type 2 diabetic rats. As a result of oral administration of TC for 13 weeks in type 2 diabetic rats, the group administration of 2,000 mg/kg significantly increased FRAP, superoxide dismutase (SOD), and reduced the level of glutathione (GSH) in liver tissue 1.9, 1.2, and 1.2-times, respectively. Furthermore, serum TAC levels increased by 1.3-fold after the rats were administered with a dose of 500 mg/kg. These results were consistent with the in vitro assay results. In conclusion, TC exhibited its potential as a functional food material through its antioxidant properties.

Development of a UPLC-MS/MS method for the therapeutic monitoring of L-asparaginase

  • Jeong, Hyeon-Cheol;Kim, Therasa;Yang, Deok-Hwan;Shin, Kwang-Hee
    • Translational and Clinical Pharmacology
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    • 제26권3호
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    • pp.134-140
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    • 2018
  • This study aimed to develop a UPLC-MS/MS method for determining plasma levels of L-aspartic acid and L-asparagine and the activity of L-asparaginase. L-aspartic acid, L-asparagine, and L-aspartic acid-2,3,3-$d_3$ were extracted from human plasma by protein precipitation with sulfosalicylic acid (30%, v/v). The plasma samples were analyzed using an Imtakt Intrada amino acid analysis column with 25 mM ammonium formate and 0.5% formic acid in acetonitrile as the mobile phase with step gradient method at a flow rate of 0.5 mL/min. The injection volume was $5{\mu}L$, and the total run time was 15 min. Inter- and intra-batch accuracies (%) ranged from 96.62-106.0% for L-aspartic acid and 89.85-104.8%, for L-asparagine, and the coefficient of variation (CV%) did not exceed 7%. The validation results for L-aspartic acid and L-asparagine satisfied the specified criterion, however, the results for L-asparaginase activity assay showed a borderline validity. This study could be a foundation for further development of therapeutic drug monitoring systems using UPLC-MS/MS.

Development and Validation of a Perfect KASP Marker for Fusarium Head Blight Resistance Gene Fhb1 in Wheat

  • Singh, Lovepreet;Anderson, James A;Chen, Jianli;Gill, Bikram S;Tiwari, Vijay K;Rawat, Nidhi
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제35권3호
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    • pp.200-207
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    • 2019
  • Fusarium head blight (FHB) is a devastating wheat disease with a significant economic impact. Fhb1 is the most important large effect and stable QTL for FHB resistance. A pore-forming toxin-like (PFT) gene was recently identified as an underlying gene for Fhb1 resistance. In this study, we developed and validated a PFT-based Kompetitive allele specific PCR (KASP) marker for Fhb1. The KASP marker, PFT_KASP, was used to screen 298 diverse wheat breeding lines and cultivars. The KASP clustering results were compared with gelbased gene specific markers and the widely used linked STS marker, UMN10. Eight disagreements were found between PFT_KASP and UMN10 assays among the tested lines. Based on the genotyping and sequencing of genes in the Fhb1 region, these genotypes were found to be common with a previously characterized susceptible haplotype. Therefore, our results indicate that PFT_KASP is a perfect diagnostic marker for Fhb1 and would be a valuable tool for introgression and pyramiding of FHB resistance in wheat cultivars.

세프록사딘 캡슐 시험에 사용되는 유해시약인 사염화탄소 대체 공정시험법 개발 (Development of alternative assay method without hazardous reagent, carbon tetrachloride, for cefroxadine capsules in Korean Pharmaceutical Codex)

  • 서나래;강여울;박영신;이종민;정명진;전상설;안재형;김경호
    • 분석과학
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    • 제27권3호
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    • pp.161-166
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    • 2014
  • 국가공정서 중 하나인 대한민국약전외의약품기준에는 세프록사딘 캡슐의 정량법으로 유해시약인 사염화탄소를 사용하는 산화환원분석법이 수재되어 있다. 세프록사딘 캡슐의 환경 친화적인 대체 시험법으로 보다 안전하고 효율적인 친환경용매를 사용하는 HPLC 분석법을 개발하고, 이를 검증하였다. 직선성은 상관계수($r^2$)가 0.999이상으로 우수하였다. 일내 정밀도는 상대표준편차 0.30~0.69%, 일간 정밀도는 0.47~0.82%로, 회수율은 100.20~100.56%로 나타났다. 개발한 시험법을 이용하여 시중 유통 중인 세프록사딘 캡슐 중 세프록사딘의 함량측정에 응용하였다. 개발된 시험법은 대한민국약전외의약품기준의 개정에 기여가 될 것이다.

육회와 육사시미에 접종된 Salmonella Typhimurium와 Listeria monocytogenes 검출을 위한 Loop-mediated isothermal amplification와 식품공전의 배지 시험법, real-time PCR의 검출 성능 비교 (Comparison of Loop-mediated Isothermal Amplification and Korea Standard Food Codex (KFSC) Method for Detection of Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes Artificially Inoculated in Yuk-hwe and Yuk-sashimi)

  • 곽승해;이소영;김진희;오세욱
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제34권3호
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    • pp.277-282
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    • 2019
  • 본 연구에서는 한국 전통 식품에서 Salmonella Typhimurium와 Listeria monocytogenes의 검출에 대하여 LAMP에 기반한 3M Molecular Detection Assay 2 (3M MDA 2)와 식품공전에 등재된 분리배지, real-time PCR의 검출 성능을 비교하고자 하였다. 육회와 육사시미에 $10^0-10^4CFU/25g$의 수준으로 S. Typhimurium와 L. monocytogenes을 각각 접종하였다. Citrobacter freundii와 Listeria innocua는 S. Typhimurium와 L. monocytogene의 검출에 영향을 주는 균으로 사용하였다. S. Typhimurium와 L. monocytogenes만 $10^0-10^4CFU/25g$ 수준으로 접종한 모든 시료에서는 분리배지, real-time PCR과 LAMP에서 양성으로 검출되었다. C. freundii와 L. innocua를 같이 접종한 경우에서 부분적으로 양성이 나타났다. 육회와 육사시미에 대하여 real-time PCR 보다 3M MDA 2가 더 검출효율이 높음을 알 수 있었다. 분리배지가 가장 검출효율이 높았지만 3M MDA 2와 큰 차이가 없었다. 배지를 사용하는 방법은 최소 일주일의 시간이 소요되고 PCR의 경우 inhibitor의 영향을 많이 받아 정확한 검출이 어려운 점이 있다. 그러나 LAMP에 기반한 3M MDA 2는 enrichment 후 다음 날 간단한 protocol을 통해 25분 이내로 샘플의 양성 반응을 확인할 수 있어 식중독균에 대해 신속하고 정확한 검출이 가능한 것으로 판단되었다.

면역방사계수측정법의 민감도 향상을 위한 변법의 평가 (Evaluation of Variation Method to Improve the Sensitivity of Immunoradiometric Assay)

  • 권원현;강미지;김나경;박지솔;김정인;이경재
    • 핵의학기술
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    • 제27권1호
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    • pp.29-35
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    • 2023
  • Purpose The concentration of PSA (Prostate Specific Antigen) after radical prostatectomy in prostate cancer patients is a predictor of biochemical recurrence, and the AUA (American Urological Association) is defined as biochemical recurrence when the concentration of PSA is measured at 0.2 ng/mL or more, and when the concentration is measured at 0.2 ng/mL or more at the retest. This standard is also applied our hospital. In this laboratory, the PSA reagent using IRMA (Immunoradiometric Assay) is used, and the sensitivity at a very low value was not as good as the reagent used in the department of laboratory medicine. This study aims to increase the reliability of the results by improving the precision and sensitivity of very low values. Materials and Methods As a reagent for the study, PSA reagent using IRMA was used. As a method to improve the precision and sensitivity of very low values, a variation method on the serum volume(25 uL, 50 uL, 100 uL, 200 uL) was studied, and variation usefulness evaluation was conducted. The evaluation items were compared the results of precision, analytical sensitivity, recovery rate, dilution test, high-dose hook effect test, parallel test and very low concentration values(n = 20). Results The validation results were displayed in the order of 25 uL, 50 uL, 100 uL, 200 uL. As the serum volume increased, it was confirmed that CV (Coefficient of Variation)(%) improved. Analytical sensitivity(ng/mL) was 0.038, 0.041, 0.017, 0.015 and recovery rate(%) was 101±3, 101±3, 99±2, 97±4. very low concentration values(ng/mL) between each volume(n=20) were 0.135±0.068, 0.076±0.050, 0.048±0.034, 0.046±0.034. and high dose hook effect appeared as the serum volume increased. Conclusion Through the variation usefulness evaluation, it was confirmed that as the serum volume increased, the precision and sensitivity improved at very low concentration values. However, it is necessary to pay special attention to the occurrence of high-dose hook effect as the serum volume increases. In the case of tests that requires very low concentration values, it is thought that the reliability of the result will be increased if the variation method is properly used after the variation usefulness evaluation.

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Validation of QF-PCR for Rapid Prenatal Diagnosis of Common Chromosomal Aneuploidies in Korea

  • Han, Sung-Hee;Ryu, Jae-Song;An, Jeong-Wook;Park, Ok-Kyoung;Yoon, Hye-Ryoung;Yang, Young-Ho;Lee, Kyoung-Ryul
    • Journal of Genetic Medicine
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    • 제7권1호
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    • pp.59-66
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    • 2010
  • 목 적: QF-PCR법은 흔한 염색체 이수성에 대한 빠른 산전 진단을 가능하게 하는데, 낮은 가격, 빠른 속도, 그리고 자동화가 가능하여 한꺼번에 많은 검체에 대해 적용할 수 있다는 장점들이 있다. 하지만 아직까지 국내에서 QF-PCR법은 산전 염색체 이수성 선별검사로 주로 사용되는 방법이 아니다. 본 연구에서는 한국인에서 빠른 산전 진단을 목적으로 시행하는 짧은 염기서열 반복(short tandem repeats, STR) 표지자를 이용한 QF-PCR법의 수행능을 검증하고자 한다. 대상 및 방법: 2007년에서 2009년까지 산전 염색체 이수성 선별을 목적으로 의뢰된 847개의 양수 검체에 대해 QF-PCR법을 시행하였는데 13번, 18번, 21번, X, Y염색체에 위치한 총 20개의 STR 표지자로 구성된 Elucigene kit (Gen-Probe, Abingdon, UK)를 사용하였다. 총 847개의 양수 검체에 대한QF-PCR 결과는 염색체 검사 결과와 비교하였고, STR 표지자의 정보력을 평가하기 위해서 각 표지자에 대해 이형접합체 지수(heterozygosity index)를 구하였다. 결 과: 총 847개 양수 검체에 대한 QF-PCR 검사 결과 19개(2.2%, 19/847)에서 13, 18, 21번 염색체와 X, Y염색체의 수적 이상이 관찰되었는데 염색체 검사에서도 동일한 결과를 보여100% 양성 예측율을 나타냈다. 하지만 염색체 검사 결과 7개(0.8%, 7/847) 검체에서 5개의 균형전좌와 2개의 불균형 염색체 이상이 관찰되었으나 QF-PCR에서는 진단되지 않았다. STR 표지자의 평균 이형접합체 지수(he-terozygosity index)는 0.76으로 서양인에서 보고된 0.8에 비해 다소 낮았다. 본 연구에서 D13S634표지자의 미세수준의 중복(submicroscopic duplication)이 1.4% (12/847)에서 관찰되었는데 이는 한국인에서 특징적인 소견으로 생각된다. 결 론: 본 기관에서는 산전 염색체 이수성 선별을 위한 QF-PCR법을 검증하였으며 효율적이고 신뢰할 수 있는 방법임이 입증되었다. 하지만 QF-PCR결과를 해석하기 위한 지침을 만들기 위해서 검사실마다 독립적으로 각각의 STR표지자에 대한 검증이 필요하며, 또한 QF-PCR법을 통상적인 염색체 검사 업무흐름에 통합하는 것이 필요하다고 사료된다.

딸기 품종별 추출물의 항산화활성 및 지표성분 밸리데이션 (Antioxidant activities and Validation of Analytical Method of Marker compounds in strawberry fruits from various cultivars)

  • 용예슬;이송미;변나영;선상욱;김민정;장서우;장원석;이선이;임순호
    • 한국식품과학회지
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    • 제51권6호
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    • pp.517-523
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    • 2019
  • 본 연구에서는 다양한 품종의 딸기 추출물로부터 천연물을 이용한 천연 항산화제 개발을 위하여 농업기술원에서 시료를 제공받아 항산화 활성을 평가하고, ellagic acid 함량 분석 및 분석법 검증을 위한 밸리데이션을 수행하였다. 총 폴리페놀 함량은 22.77-107.61 mg/100 g FW로 다양하게 나타났으며, 플라보노이드 함량 또한 17.58-44.12 mg/100 g FW으로 다양하게 나타났다. 총 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량 결과 Aiberry와 Elie star에서 가장 많은 총 폴리페놀과 플라보노이드 함량을 나타내었다. DPPH free radical scavenging activity은 1540.6-1124.0 μmol TEAC/100 g FW 범위를 나타내었고, Derunoka가 1.541 μmol TE/100 g FW로 가장 높은 값을 나타내었다. ABTS free radical scavenging activity 실험결과 6352.3-4592.3 μmol TEAC/100 g FW의 범위를 나타내었으며, FA23 추출물이 가장 높은 활성을 보였다. Ellagic acid 표준물질에 대한 검량선의 상관계수(R2)값은 0.9998-1.0000으로 매우 높은 직선성을 보였으며, 딸기 추출물의 ellagic acid 함량은 9.2-22.9 μg/mL을 나타냈으며, 그 중 Asca 추출물이 22.9 μg/mL로 가장 높은 ellagic acid 함량을 나타내었다. 밸리데이션 결과 정확성은 평균 100-101%의 회수율을 나타내었고, 정밀성 또한 농도별로 10 μg/mL에서는 5.31, 5.30%, 50 μg/mL에서는 0.66, 0.88%, 100 μg/mL에서는 0.20, 0.82%의 RSD값을 나타내었다. 본 연구의 결과를 종합하여 보면 다양한 딸기품종 추출물은 높은 항산화 효능을 나타내며, 이는 자유라디칼의 산화를 억제하는 총 폴리페놀 및 플라보노이드의 높은 함량에 기인하는 것으로 사료된다. 또한 천연항산화제 표준화를 위한 지표성분으로서 ellagic acid 정량분석 및 밸리데이션을 수행함으로써 본 실험에서 사용된 딸기추출물의 천연 항산화제로서의 개발 가능성과 함량분석에 대한 기준설정을 위한 기초자료를 시사한다.

동시 다성분 분석법에 의한 농산물 중 펜시쿠론 분석 (Analysis of Pencycuron in Agricultural Products by Simultaneous Determination)

  • 박영혜;한창호;김애경;신재민;이재규;박선희;윤은선;김무상;채영주
    • 농약과학회지
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    • 제17권3호
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    • pp.162-167
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    • 2013
  • GC-NPD를 이용하여 pencycuron의 다종농약다성분 분석법을 확립하고자 본 연구를 수행하였다. 제시된 분석법의 검증을 위해 예비 실험을 거쳐 농약이 검출되지 않은 상추, 시금치, 엇갈이배추, 근대, 아욱, 배추를 대상으로 실험하였다. Pencycuron 표준용액을 0.02-2 mg/kg의 농도로 희석하여 분석한 검량선의 직선성($r^2$ = 0.9999)은 우수하였다. 검출한계는 0.005 mg/kg이고 정량한계는 0.02 mg/kg이며 회수율은 79.6-112.1%, 분석오차는 최대 4.9%미만으로 잔류농약 분석법에서 허용되는 회수율 기준 70-120% 범위와 분석오차 20% 이하의 기준에 적합하였다. 정밀도는 intra-day test에서 1.6-3.0%, inter-day test에서 5.3-11.5%를 나타내어 다종농약다성분 분석법을 통해 pencycuron의 직선성, 검출한계, 정량한계, 회수율과 정밀도를 검증하고 정확성을 증명하였다. 오랜 시간이 걸려 추출, 정제, 유도체화 과정을 거치는 분석법보다 빠르고 간편한 실험법인 다종농약다성분 분석법이 pencycuron의 분석시에 유용한 분석법으로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.