Here, we show that an endophytic bacterial strain, Enterobacter asburiae B1 exhibits the ability to elicit ISR in cucumber, tobacco and Arabidopsis thaliana. This indicates that strain B1 has a widespread ability to elicit ISR on various host plants. In this study, E. asburiae strain B1 did not show antifungal activity against tested major fungal pathogens, Colletotrichum orbiculare, Botrytis cinerea, Phytophthora capsici, Rhizoctonia solani, and Fusarium oxysporum. Moreover, the siderophore production by E. asburiae strain B1 was observed under in vitro condition. In greenhouse experiments, the root treatment of strain B1 significantly reduced disease severity of cucumber anthracnose caused by fungal pathogen C. orbiculare compared to nontreated control plants. By root treatment of strain B1 more than 50% disease control against anthracnose on cucumber was observed in all greenhouse experiments. Simultaneously, under the greenhouse condition, the soil drench of strain B1 and a chemical inducer benzothiadiazole (BTH) to tobacco plants induced GUS activity which is linked with activation of PR promoter gene. Furthermore, in Arabidopsis thaliana plants the soil drench of strain B1 induced the defense gene expression of PR1 and PDF1.2 related to salicylic acid and jasmonic acid/ethylene signaling pathways, respectively. In this study, for the main focus on root colonization by strain B1 associated with defense responses, bacterial cells of strain B1 was tagged with the gfp gene encoding the green fluorescent protein in order to determine the colonization pattern of strain B1 in cucumber. The gfp-tagged B1 cells were found on root surface and internal colonization in root, stem, and leaf. In addition to this, the scanning electron microscopy observation showed that E. asburiae strain B1 was able to colonized cucumber root surface.
The survival of Colletotrichum acutatum was investigated in soil, infected fruits, and infected fruit debris incorporated into soil at several temperatures with different soil moisture levels. Samples were examined at 2-week intervals for 18 weeks to determine the survival of the pathogen based on the number of colony forming unit (CFU) of C. acutatum recovered on a semi-selective medium. C. acutatum conidia survived in both sterile and non-sterile soil at 4 and $10^{\circ}C$ for 18 weeks. If infected pepper fruits were completely dried, C. acutatum survived for 18 weeks at temperature from 4 to $20^{\circ}C$. Soil temperature and moisture affected the survival of C. acutatum in infected fruit debris incorporated into soil after air-drying. The effect of soil moisture on survival was weaker at low temperatures than at high temperatures. For up to 16 weeks, conidia were recovered from fruit debris in soil that had been kept at 4 to $20^{\circ}C$ and below 6% soil moisture. Conidia were recovered from fields until approximately 6 months after pepper fruits were harvested. Using PCR with species-specific primers and a pathogenicity test, we identified conidia recovered from soil and infected fruit from both the laboratory and field as C. acutatum and as the primary inoculum causing pepper anthracnose.
Genes expressed during conidial germination of the pepper anthracnose fungus Colletotrichum acutatum were identified by sequencing the 5' end of unidirectional cDNA clones prepared from the conidial germination stage. A total of 983 expressed sequence tags (ESTs) corresponding to 464 genes, 197 contigs and 267 singletons, were generated. The deduced protein sequences from half of the 464 genes showed significant matches (e value less than 10-5) to proteins in public databases. The genes with known homologs were assigned to known functional categories. The most abundantly expressed genes belonged to those encoding the elongation factor, histone protein, ATP synthease, 14-3-3 protein, and clock controlled protein. A number of genes encoding proteins such as the GTP-binding protein, MAP kinase, transaldolase, and ABC transporter were detected. These genes are thought to be involved in the development of fungal cells. A putative pathogenicity function could be assigned for the genes of ATP citrate lyase, CAP20 and manganese-superoxide dismutase.
Shinhwa Kim;Soo Yeon Choi;Hyunjung Chung;Nak Jung Choi;Bo Yoon Seo;Sang-Min Kim
The Korean Journal of Mycology
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v.52
no.1
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pp.55-60
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2024
In August 2023, leaf spot disease was observed in peanuts in Cheongju-si, Korea. Leaf spots occurred at the leaf margins and the lesions gradually expanded. Diseased leaf areas were light or dark brown and irregular in shape. A fungal isolate was obtained from symptomatic leaf and cultured on potato dextrose agar (PDA) medium at 25℃. An isolate was identified as Colletotrichum sojae based on morphological characteristics and sequences of the internal transcribed spacers, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, chitin synthase-1, actin, and 𝛽-tubulin genes. Pathogenicity tests were performed on peanut seedlings in a conidial suspension (1×106 conidia/mL). Lesions were observed on the peanut leaf 5 d after inoculation. The pathogen was re-isolated from the lesions of the inoculated leaves. To the best of our knowledge, this is the first report of anthracnose on peanut caused by C. sojae in Korea.
Four to $17\%$ of the seeds of ginseng (Panax ginseng Meyer) collected from seemingly healthy plants carried Colletotrichum panacicola Nakata et Takimoto whereas the seeds from the plants with anthracnose sympotoms carried $42\%$ of the same fungus. Prevalent organisms isolated other than C. panacicola from seeds of both kinds of plants were Fusarium, Alternaria, Phoma, Trichoderma and others, ana in that order on acidified potato sucrose agar. C. panacicola also was isolated from 18 months old herbarium specimens. The fungus in the infected tissues also survived during the Korean winter months either on the soil surface or in the soil at 10 and 30 em in depth. When conidial suspensions of C. panacicola were inoculated on detached ginseng leaves, anthracnose symptoms occurred from 25 to $35^{\circ}C$. No symptoms occurred at temperatures below $17^{\circ}C$. Direct sunlight increased significantly the number of anthracnose lesions over those obtained in leaves inoculated in darkness or in 400 lux of fluorescent light. The lesions decreased as age of the leaves increased or as the number of conidia applied decreased. Optimum temperature for mycelial growth and conidial formation of C. panacicola was $25^{\circ}C$. Optimum pH for the mycelial growth was at $pH\;2.8\~4.6$ while the most conidial formation occurred at $pH\;5.2\~5.8.$. When fungicides were applied in the field to ginseng plants with a conidial suspension of C. panacicola, the most effective control of the anthracnose disease was by spraying with difolatan, and followed by maneb, zineb, captan and phaltan; Bordeaux mixture and ferbam were significantly less effective but significantly better than the inoculated control plants.
Lee, Yong Yoon;Lee, Younmi;Kim, Young Soo;Kim, Hyun Sup;Jeon, Yongho
Research in Plant Disease
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v.26
no.1
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pp.8-18
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2020
Red pepper, one of the major economic crops in Korea, is being affected by anthracnose disease caused by Colletotrichum acutatum. To control this disease, an antagonistic bacterial strain, Bacillus subtilis YGB36 identified by 16S rDNA sequencing, physiological and biochemical analyses is used as a biological control agent. In vitro screening revealed that the strain YGB36 possess strong antifungal activity against the pathogen Cylindrocarpon destructans. The strain exhibited cellulase, protease, amylase, siderophore production and phosphate solubility. In vitro conidial germination of C. acutatum was most drastically inhibited by YGB36 cell suspensions (106 cfu/ml) or culture filtrate. Development of anthracnose symptoms was reduced on detached immature green pepper fruits by treatment with cell suspensions, and its control value was recorded as 65.7%. The YGB36 bacterial suspension treatment enhanced the germination rate of red pepper seeds and promoted root development and growth under greenhouse conditions. The in vitro screening of fungicide and insecticide sensitivity test against YGB36 revealed that the bacterial growth was not affected by any of the insecticides, and 11 fungicides out of 21 used. Collectively, our results clearly suggest that the strain YGB36 is considered as one of the potential biocontrol agents against anthracnose disease in red pepper.
Antifungal activity of Korean and Chinese lichen-forming fungi (LFF) was evaluated against plant pathogenic fungus of Colletotrichum acutatum, causal agent of anthracnose on hot pepper. This is the first attempt to evaluate antifungal activity of LFF, instead of lichen thalli, against C. acutatum. Total 100 LFF were isolated from the lichens with discharged spore method or tissue culture method. Among the 100 isolates, 8 LFF showed more than 50% of inhibition rates of mycelial growth of the target pathogen. Especially, Lecanora argentata was highly effective in inhibition of mycelial growth of C. accutatum at the rate of 68%. Antifungal activity of other LFF was in the order of Cetrelia japonica (61.4%), Ramalina conduplicans (59.5%), Umbilicaria esculenta (59.5%), Ramalina litoralis (56.7%), Cetrelia braunsiana (56.5%), Nephromopsis pallescensn (56.1%), and Parmelia simplicior (53.8%). Among the tested LFF, 61 isolates of LFF exhibited moderate antifungal activity against the target pathogen at the inhibition rates from 30 to 50%. Antifungal activity of the LFF against C. acutatum was variable at the species level rather than genus level of LFF. This study suggests that LFF can be served as a promising bioresource to develop novel biofungicides.
Anthracnose disease caused by Colletotrichum orbiculare, induces severe damage to cucurbits worldwide. Resistance of 112 commercial cultivars of cucurbits to C. orbiculare was evaluated. Seedlings of each cultivar at 2- to 3-leaf stage were inoculated with C. orbiculare KACC 40809 by spraying spore suspension of the fungus at a concentration of $4.0{\times}10^5$ spores/mL. Among the 36 cultivars of cucumber, 'Asiastrike', 'Tongilbaedadagi', 'Daeseon', 'Cheongrokmatjjang', 'Nokyacheongcheong', and 'Asianogak' were moderately resistant and the others were susceptible. All the tested cultivars of melon (33) and watermelon (4) showed highly susceptible response to C. orbiculare. On the other hand, the squash cultivars (17) represented less susceptibility to the fungus than the other cucurbits. Of the squash cultivars, 'Gammirak' and 'Teotbat' were resistant and 12 cultivars were moderately resistant. Among the rootstocks for cucurbits, ten cultivars including 'JjeuyakaEX', 'Nunbusyeo', 'Union', 'RS111', 'Ganggeuntoza', 'Hwangjaetoza', 'NO.8', 'Shintoza', 'Bulpaetoza', and 'Newtype' showed high resistance to the anthracnose pathogen. From the results, the resistant cultivars could be used as sources of resistance to cucurbits anthracnose (C. orbiculare) in the future breeding programs.
The commercial product "pyto-patch" prepared as nano sized silver particle less than 5 nm, has effective antifungal activity against Collectotrichum gloeosporioides, Botrytis cinerea, Sclerotinia sclerotiorum in vitro. As a fungal growth inhibiton mechanism, it can reduce spore germination rate and mycelial growth. As s promising fungicide, Phyto-patch can control anthracnose effectively. The spore of C. gloeosporioides dipped in 5 ppm phyto-patch dilute suppressed germination rate to 13.2%, and mycelial growth stopped for 15 days at 10 ppm. The spore postinoculated on 10 ppm phyto-path smeared PDA surface could not germinate for 3 days and prohibit pathogen infection effectively. In field test, the anthracnose development of 4 ppm phyto-patch treated plot was less than 7% after 21 days compaired to 40% of it in untreated plot. In heavy rainfall season, pepper anthracnose effectivly contrrolled by regular 10 ppm phytopatch spraying every 7 days. The diseased pepper fruit decreased to 5.8% compaired to 94.6% in untreated plot. During drying period, the diseased pepper fruit havested in phyto-patch treated plot was 24.2%, but pepper fruit havested in untreated plot destroyed to 100% within 3 days. The nano silver particle coated on multching textile prevented late blight of pepper effectively and disease occurance delayed about month.
To develop an effective biopesticide to control pepper anthracnose disease, an isolate which showed strong inhibitory effect on the mycelial growth and conidial germination of Colletotrichum acutatum was selected among the antagonistic bacterial isolates collected from pepper grown soil. The bacterial isolate was identified as Bacillus sp. KBC1004 using 16S rRNA sequence analysis. The liquid culture of KBC1004 was freeze-dried and formulated as a wettable powder(WP). The wettable powder form of KBC1004 required at least 24 hours to activate and to inhibit the conidial germination of C. acutatum. In vitro bioassay using the detached green pepper fruits, biocontrol activity of the WP was not recognizable in simultaneous inoculation, but significant disease suppression was observed pre-treatment (24 hr) of the WP before pathogen inoculation. In field experiment, 4 times foliar applications of the 1/500 diluted wettable powder from the end of June showed great control efficacy similar to that of the chemical fungicide application. These results suggest that the formulated WP product could be an alternative mean to control of pepper anthracnose disease in environmentally friendly farming practices.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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