본 연구는 구절초 꽃 추출물이 기능성 화장품 소재로서의 개발 가능성을 관찰하기 위하여 항산화 활성과 피부세포에 대한 세포독성, 항염증, 멜라닌 생합성 억제능에 미치는 영향을 관찰하였다. 본 연구 결과 구절초 꽃 추출물에서 폴리페놀과 플라보노이드의 높은 함량과 뛰어난 DPPH radical 소거작용을 확인하였고, Raw 264.7세포와 B16F10세포에 대해 유의한 세포독성을 나타나지 않았으며, Raw 264.7세포에서 LPS에 의해 유도된 NO 생성을 유의하게 억제함으로써 항염증 효과를 확인하였다. 구절초 꽃 추출물이 B16F10세포에 ${\alpha}$-MSH로 멜라닌 생성을 유도한 후 멜라닌 생합성 억제능을 측정한 결과 멜라닌의 생성 증가를 농도 의존적으로 억제되는 것을 확인하였다. 이와 같은 결과로 보아 구절초 꽃 추출물은 세포에 대한 독성이 낮고, 높은 항산화 활성과 항염증, 미백효과를 가진 기능성 화장품소재로써의 활용 가능성이 있을 것으로 사료된다.
To examine the potential of Terminalia chebula as a whitening agent, we measured antioxidant activity using DPPH$\cdot$, ABTS${\cdot}^+$ assays and ferric-reducing antioxidant power (FRAP) assays, and depigmenting activity using B16F10 melanoma cells. The intracellular reactive oxygen species (ROS) level was monitored by $H_2DCFDA$ fluorescence labeling, and melanin contents in B16F10 melanoma cells by 960 $J/m^2$ dose of UVA-induced oxidative stress. The radical-scavenging activities of T. chebula extract (TCE) were measured in terms of $EC_{50}$ values using DPPH$\cdot$, ABTS${\cdot}^+$ assays and FRAP value were 280.0 ${\mu}g/mL$, 42.2 ${\mu}g/mL$ and 113.1 ${\mu}mol$$FeSO_4{\cdot}7H_2O/g$, respectively. We found that ROS and melanin concentrations were reduced by TCE treatments of 25 ${\mu}g/mL$ under UVA-induced oxidative stress. Tyrosinase activity and melanin contents in $\alpha$-melanocyte stimulating hormone (MSH)-induced melanoma cells both decreased dose-dependently in the treatment groups. TCE similarly reduced melanogenesis in B16F10 melanoma cells stimulated by $\alpha$-MSH as compared to arbutin as a positive control. T. chebula may prove to be a useful therapeutic agent for hyperpigmentation and an effective component in skin whitening and.or lightening cosmetics.
The aim of this study was to determine the relationship between the coat color appearance of Korean brindle cattle and the changes of relevant hormone levels that may affect the hair pigmentation during different stages of growth and maturation. In mature cattle, levels of both ACTH and DHEA in Korean brindle cattle with brown color were significantly higher than those with black color (p<0.05). Levels of ${\alpha}$-MSH in Korean brindle cattle with whole brindle ($${\geq_-}50%$$) color were significantly higher than those with brown color (p<0.05). In calves of Korean brindle cattle at 2 to 6 months, the concentration of estradiol was significantly higher in calves with whole brindle color than those with part brindle color (p<0.05), when the coat color was confirmed. After 6 month of coat color confirmation, levels of testosterone and ACTH increased in calves with part brindle color and were significantly higher than those with whole brindle color (p<0.05). In calves of Korean brindle cattle at 1 or 2 months, there were no significant differences in hormone levels of estradiol, ACTH, DHEA and ${\alpha}$-MSH between the calves with brindle color and brown color, except estradiol before brindle color appearance. Changes of relevant hormone levels at different stage of growth and maturation may affect the pigmentation of coat during the development of cattle. In addition to the current study correlating the different coat colors with relevant hormone levels, investigation of the coat color associated genes expressed in Korean brindle cattle may further clarify the mechanisms of coat color changes during their development.
최근 미세먼지, 내분비장애, 환경 호르몬등에 의해 피부 염증 질환 환자들이 증가함에 따라 화장품 소재 개발 연구는 스테로이드, 항히스타민제 등의 피부염 치료 합성화합물 보다 이를 대체할 수 있는 천연물 기반의 보다 안전한 소재 발굴에 관심이 더 증가되고 있다. 따라서 본 연구에서는 여러 가지 천연 약재 스크리닝을 거쳐 피부 효능 효과가 검증된 두충, 익지인, 백강잠의 한방추출물(Mix)을 선정하고, 이들의 새로운 피부효능을 규명하여 천연 화장품 소재를 개발하고자 하였다. 우선 한방추출물(Mix)의 항산화 효능을 검증하기 위해 DPPH assay를 수행한 결과 $400{\mu}g/mL$ 농도 조건에서 약 98.8% DPPH radical 소거 활성을 확인하였다. 한방추출물(Mix)의 미백효능을 확인하기 위해 B16F10 세포주를 활용하여 한방추출물에 의한 멜라닌 합성량을 측정하였다. $400{\mu}g/mL$ 농도 조건에서 ${\alpha}-MSH$ 처리군 대비 27.1% 수준까지 멜라닌 합성량이 감소하여 미백효능 활성에 대해 유의성 있는 결과를 확인하였다. 또한 한방추출물(Mix)의 항염증 효능을 확인하기 위해 LPS 자극으로 활성화된 RAW264.7 대식세포에서 NO(nitric oxide) 합성 및 iNOS, COX-2의 유전자 발현을 관찰한 결과 모두 유의적으로 감소되는 것을 확인하였다. 염증성 사이토카인으로 알려진 $IL-1{\alpha}$, $IL-1{\beta}$, IL-6, $TNF-{\alpha}$의 mRNA 발현을 분석한 결과에서도 한방추출물에 의해 효과적으로 억제되는 것을 확인하였다. 마지막으로 피부장벽 기능 강화를 확인하기 위해 인간 각질형성세포인 HaCaT을 이용해 tight junction 구성 단백질인 claudin 1 유전자의 발현 변화를 관찰한 결과 한방추출물에 의해 mRNA 발현이 농도 의존적으로 증가되는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구를 통해 우리는 두충, 익지인, 백강잠을 함유한 한방추출물(Mix)이 항산화, 항염, 미백, 그리고 피부장벽 강화 등에 유효한 소재임을 확인하였고, 향후 피부 임상시험 등이 이뤄진다면 피부염 환자에 효과적인 천연 화장품 소재로 개발될 수 있을 것이다.
황칠나무는 한국의 남부 해안 및 제주도 등에서 자생하는 식물이다. 본 연구에서는 황칠나무 잎 추출물의 미백 활성의 원인을 규명하고자 연구를 수행하였다. ${\alpha}$-MSH로 자극된 B16 melanoma 세포에 대한 추출물의 멜라닌 생합성 저해 활성을 측정하였다. 추출물은 25 및 $50{\mu}g/mL$ 농도에서 유의적으로 멜라닌 함량을 감소시켰으며, 세포 내의 tyrosinase 활성뿐만 아니라 tyrosinase와 TRP-2의 단백질 발현도 상당히 저해하였다. 결과적으로, 황칠나무 잎 추출물은 세포 내의 tyrosinase활성과 멜라닌 생합성에 직접적으로 관련된 효소의 발현을 저해함으로써 미백효과를 나타내었다. 본 연구 결과는 황칠나무 잎 추출물이 새로운 미백 화장품의 원료로써 이용 가능함을 시사한다.
본 연구에서는 천연 미백소재 개발을 위하여 제주도 연안에 서식하는 해조류 중 홍조류의 일종인 새발 추출물의 멜라닌 생성에 연관된 생리활성을 분석하였다. 그 결과, 새발 추출물의 폴리페놀 함량은 2.0 % 이하였고, 라디칼 소거활성(DPPH)은 $IC_{50}$값이 $2,000{\mu}g/mL$ 이상이었으며, 세포독성은 관찰되지 않았다. 그리고 생쥐의 B16/F10 흑색종 세포에서 멜라닌 생합성에 관련된 효소의 저해효과를 알아본 결과, 알파-멜라노사이트 자극 호르몬에 의해 유도된 extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK 1/2)의 활성화를 억제함으로써 티로시나제와 티로시나제 연관 단백질 1을 저해하는 것으로 확인되었다. 따라서 새발 추출물은 멜라닌 생합성에 필수적인 효소인 티로시나제의 저해활성과 티로시나제 연관 단백질 1의 발현억제 효과가 뛰어난 것으로 분석되었다. 그러므로 홍조류인 새발(Acanthopeltis japonica)의 추출물은 멜라닌 생성 자극제로 유도된 신호전달경로를 저해하는 미백 기능성 화장품 소재로서의 활용 가능성이 높을 것으로 사료된다.
일차 섬모(primary cilia)는 세포에서 안테나처럼 돌출되어 나온 기관인데, 외부 자극에 반응할 수 있는 각종 수용체와 채널, 신호 전달 인자들을 가지고 있다. 피부는 자외선, 온도, 습도, 중력, 장력 등 외부 환경에 반응하여 멜라닌이나 콜라겐을 만들고 피부 장벽을 형성한다. 피부에서는 일차 섬모가 없으면 헤어의 생성이나 각질의 분화가 억제된다는 보고가 있다. 또한 피부 색소 생성과 관련하여서는 일차 섬모가 sonic hedgehog-smoothened-GLI2 신호 전달에 의해 활성화되면 멜라닌 생성이 억제된다는 것이 알려져 있다. 피부가 자외선을 받으면 멜라닌 생성 호르몬의 양이 증가하고 멜라닌 생성 호르몬은 멜라닌 생성 세포 내 cAMP의 양을 증가시켜 멜라닌 생성 효소의 발현을 높인다. 이에 멜라닌 생성 호르몬과 세포 내 cAMP의 양을 증가시키는 물질을 처리하여 멜라닌 생성을 높였을 때 일차 섬모의 변화를 확인한 결과 일차 섬모가 감소하는 것을 확인하였다. 또한 기존 미백 원료인 유용성 감초 추출물(an ethanol extract of Glycyrrhiza glabra (EGG) root)과 Melasolv (3,4,5-trimethoxy cinnamate thymol ester (TCTE))가 일차 섬모의 발현을 증가시키고 멜라닌 생성 효소인 tyrosinase의 발현을 억제함을 확인할 수 있었다. 따라서 일차 섬모를 조절할 수 있다면 피부 색소 침착을 효과적으로 조절할 수 있을 것이다.
본 연구는 새로운 항산화 및 미백 기능성 화장품 성분을 개발하기 위해 기존의 항산화와 미백 기능성 성분으로 알려진 두 가지 성분을 혼합한 새로운 조성을 개발하고, 이를 이용해 항산화 및 미백효과를 알아보고자 하였다. 두 가지 성분은 항산화와 멜라닌 생성억제 기능이 알려진 sulforaphane과 멜라닌 생성 억제 효과가 알려진 PF-3758309이다. 각 성분 및 혼합 조성에 대한 세포독성을 조사하여 세포독성이 나타나지 않는 농도를 결정하였다. 단독 처리 시 sulforaphane는 $10{\mu}M$까지, PF-3758309는 100 nM까지 세포독성이 없다는 것을 확인하였다. 두 화합물 $10{\mu}M$ sulforaphane과 1 nM PF-3758309를 병합 처리 시 세포독성은 없었다. LPS 자극에 의해 생성된 일산화질소는 sulforaphane과 PF-3758309의 병합 처리시 현저히 감소되었다. ${\alpha}$-MSH에 의한 멜라닌 생성 역시 병합 처리에 의해 억제되었다. 화장품 소재로 사용 가능성을 확인하기 위해 혼합 조성시료에 대한 인체적용시험을 실시하였다. 혼합조성 시료는 피부첩포에 의한 안전성 평가는 무자극으로 판정되었고, 피부밝기 증가효과와 피부 멜라닌 침착을 억제함을 확인하였다. 이러한 결과들로 혼합 조성물이 항산화와 미백 기능이 있는 새로운 기능성 화장품 조성으로 개발될 가능성을 확인할 수 있었다.
Objectives : In this study, various biological effects of Curcuma longa L. have been studied, however, beneficial effect of Curcuma longa L. in skin health remain still unclear. In this study, Curcuma longa L. water extract (CLE) was prepared. Inhibitory effect of CLE on melanin accumulation of B16F10 cells and expression levels of skin fibril-related proteins of human skin fibroblasts (HSF) were evaluated. Methods : The cytotoxic effect of CLE in B16F10 cells and HSF were examined by MTT assay. Inhibitory effect of CLE on the ${\alpha}-MSH-$ and IBMX-induced melanin accumulation and tyrosinase activity were evaluated in B16F10 cells. The expression levels of connective tissue growth factor (CCN2), Smad2, procollagen $1{\alpha}2$, collagen $1{\alpha}2$, and fibronectin in CLE-treated HSF were analyzed by western blotting. Results : The CLE treatment (concentrations 10 to $400{\mu}g/ml$) for 72 h did not affect to the B16F10 viability. However, 200 and $400{\mu}g/ml$ of CLE treatment for 24 h showed cytotoxic effect in HSF. Therefore, the concentrations 10, 50, and $100{\mu}g/ml$ of CLE were chosen in this study. The CLE treatment for 72 h dose dependently and significantly suppressed melanin accumulation and tyrosinase activity of B16F10 cells. In addition, the CLE treatment up-regulated expression levels of skin fibril-related proteins such as CCN2, Smad2, procollagen $1{\alpha}2$, collagen $1{\alpha}2$, and fibronectin. Conclusions : In conclusion, these results suggest that the CLE could be used as a natural material for skin health.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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