V8 juice agar (V8A) has been the most popular and commonly used medium for growth and reproduction of Phytophthora. However, frequently V8 vegetable juice is not available or difficult to obtain in Korea. We therefore developed widely accessible medium to substitute for V8A using domestically available five juices; two carrot (KCJA), two tomato (KTJA) and a vegetable-mix (KVMA). To prepare 10% juice medium, each vegetable juice 100 ml, DW 900 ml, agar 17 g and Ca CO3 0.5∼1.0g were supplemented to adjust pH ca. 6.0 Mycelial growth of P. cactorum and P. capsici on KTJA and KVMA was equally effective as V8A for the growth of P. cactorum, P. capsici, P. drechsleri and P. nicotianae under light. Sporangial production of P cactorum, P. capsici and P. nicotianae on KTJA and KVMA was as good as V8A and slightly better than CKJA, but the difference was insignificant by P. cactorum and P. nicotianae. The four fungi successfully formed oospores on all the media although the numbers were varied among species and media. While KTJA was the best for P. cactorum and P. capsici, V8A was the best for P. capsici and P. drechsleri. However, KCJA stimulated highest number of oopspores of P. nicotianae. Overall results showed that domestically available vegetable juices were highly effective on growth and reproduction of Phytophthora and comparable to V8 juice. Therefore, the domestic juice medium can be successfully replaced V8A in Phytophthora study.
Application of polyacrylamide gel (PAG) instead of agar to solid cultures of Streptomyces spp. was studied. The improved media were prepared by 1) gelling 20 ml of 5% acrylamide in a glass petri dish at room temperature, 2) washing by running water for more than 8 hr to remove residual reaction reagents, 3) drying at 5$0^{\circ}C$ for 12 hr to make a gel film, 4) autoclaving at 121$^{\circ}C$ for 15 min, and 5) swelling gel for about 4 hr by adding sterile liquid medium. In PAG media there were no differences from the observation of morphological characteristics showing during the cellular differentiation on agar media, whereas the ability to utilize carbohydrates differed somewhat from agar media. Agar media thus were little favorable for biochemical tests which the growth was determined depending on the formation of colony, but washed PAG was superior to serve as a solidifying agent.
Insoluble phosphate-solubilizing bacteria are routinely screened by a plate assay method using Pikovskaya agar and a modified Pikovskaya medium. A modified Pikovskaya medium to improve the clarity of the yellow-colored halo has not necessarity improved the plate assay. Colonies of phosphate-solubilizing bacteria tested could be redily selected after 48 h of incubation by green-colored colony formation on plate in which bromcresol green(BCG) was included. Among them, two bacterial strains did not produce distinct yellow halos after 48 h of incubation. We suggest that the green colony formation on plate medium containing BCG is advantageous ofr rapid isolating phosphate-solubilizing bacteria directly from soil.
The present study has been perromed to investigate the optimal conditions for protoplast formation and regeneration of oleandomycin-producing Streptomyces antibioticus (S. antibioticus) KCTC 1081. Mycelia were grown in YME medium containing 0.2% (w/v) glycine and converted into the protoplast by incubating at 35.deg.C for 60 minutes in protoplast buffer (P buffer) containing 4 mg/ml lysozyme. The reversion of protoplasts to the normal filamentous state was examined by the growth on various synthetic agar media. A high reversion rate was obtained by incubating the protoplasts on a hypertonic agar medium containing 20 mM $Mg^{++}$, 5 mM $Ca^{++}$ and 0.3 M sucrose at 28.deg.C for 5 days. From these experiments, we established the improved regeneration medium and a protocol which supports higher and more consistent levels of regeneration of S. antibioticus protoplasts. The regenerant showed an increased antimicrobial activity compared with that of the initial strain.n.n.
Phage utilizing medium and BL agar supplemented with antibiotic Tc(tetracycline) were developed as selective media for the isolation and counting of bifidobacteria in dairy products. The former was based on the host specificity of phage. When bifidobacteria and Lactobacillus casei HY 2782 were mixed together in dairy product, L. casei HY 2782 was laysed by J1 phage which has host specificity to L. casei HY 2782 whereas bifidobacteria grew well on the selective medium added wIth J1 phage. The latter was found to inhibit the growth of S. salivarius subsp. thermophilus, L. acidophilus, and L. casei, but commercial bifidobacteria grew well in Tc-containing BL agar.
본 연구는 '녹색 꽃잎 도라지'의 기내배양 시 배지구성물질의 적정농도 구명에 의한 대량번식을 목적으로 실시하였다. '녹색 꽃잎 도라지'의 절을 배양재료로 배양조건은 MS배지의 여러가지 구성물질의 농도를 달리한 결과, 1/4MS 배지에서 가장 양호한 부정근의 형성을 보였으나 생장은 1/2MS배지에서 좋았다. Sucrose첨가는 농도가 높을수록 신초와 부정근의 형성 및 생장이 좋았다. 활성탄은 무첨가구에서 가장 많은 부정근의 형성과 양호한 생장을 보였다. 배지의 pH는 4.8로 조절된 배지에서 가장 많은 부정근을 형성하였으며, pH가 높아질수록 그 형성은 낮아지는 경향을 보였고, 부정근과 신초의 생장 또한 pH 4.8에서 가장 왕성하였다. Agar 농도별 실험에서 부정근의 형성과 생장은 그 농도가 낮아질수록 양호한 경향을 보여 가장 낮은 첨가구인 0.4% 농도구에서 가장 많은 부정근의 형성과 왕성한 생장을 보였다. 생장조절제를 혼용 첨가한 경우 신초의 형성은 BA와 IAA의 혼용구가 kinetin과 IAA 또는 NAA 혼용구에 비해 효과적이었으며, BA 0.1 mg/L와 IAA 0.5 mg/L 혼용구에서 절편체당 3.9개로 가장 많은 신초가 형성되었다.
한국 전통 발효식품의 숙성에 절대 혐기성 세균이 관여하는지를 보기 위해 김치류와 장류 14종의 시료를 복합 BL 배지 혹은 bifidus 세균 선택 배지인 BS agar에 접종하여 절대 혐기적으로 배양한 결과 복합 BL 배지에서 $10^7$ ~ $10^8$/g 시료의 세균이 생장하였으며, BS agar에서는 $10^3$ ~ $10^6$/g 시료의 colony가 형성되었다. 이들은 모두 호기성 조건에서도 생장 할 수 잇었으며, BS 배지에서 생장하는 세균은 fructose-6-phosphate phosphoketolase를 합성하지 않는 것으로 나타났다. 또한 표준 Bifidobacterium속 세균은 3% NaCl을 함유하는 배지에서는 생장할 수 없었다. 이상의 결과로부터 김치류와 장류 등 염 농도가 높은 발표식품에는 bifidus균은 생장할 수 없다고 판단된다.
이분지털곰팡이(Syzygites megalocarpus)는 송이, 껄껄이그물버섯, 노란분말그물버섯, 냄새무당버섯, 암회색광대버섯아재비에서 출현하고 있었다. 이분지털곰팡이는 Malt Extract Agar, Mueller Hinton Medium, Potato Dextrose Agar에서 잘 자랐으며, 생육 최적온도는 $23^{\circ}C$ 내외, 최적 pH는 6.0 이었다. PDA배지에서 이분지털곰팡이는 2일째에 NaCl이 포함되지 않은 대조구에 비하여 5% NaCl에서는 생장이 36.5% 억제되었고 8% 이상 NaCl에서는 생장이 거의 없었다. 그러나 5일째에는 10% NaCl에서도 1.1cm 생장을 하는 것으로 관찰되었다. 송이균은 NaCl의 농도가 증가할수록 생장이 감소되어 2.5%에는 거의 생장하지 않았다. 따라서 이분지털곰팡이는 고농도의 NaCl에서도 생육이 가능하므로 송이 버섯에서 발생한 이분지털곰팡이를 NaCl 처리로 방제하기는 어려울 것으로 판단되었다.
사과 M.9 자근대목의 효과적인 기내 급속 대량 번식법을 구명하기 위하여 본 연구를 수행한 결과, 신초 증식에 적합한 배지는 $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA, $0.1mg{\cdot}L^{-1}$ IAA, $30g{\cdot}L^{-1}$ sucrose, $8g{\cdot}L^{-1}$ agar가 첨가된 MS 배지이며, 치상방법은 신초 정단부를 제거한 후 수평치상하는 것이 효과적이었다. 발근에 적합한 배지는 $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ IBA, $20g{\cdot}L^{-1}$ sucrose, $8g{\cdot}L^{-1}$ agar가 첨가된 1/2 MS 배지였다.
나비목 유충에 독성이 강한 균으로 알려진 Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki HD73 을 ethidium bromide(0.02$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)처리와 자연적 curing에 의한 내독소 유전자의 위치를 확인하여 변이주간 내독소 생성능을 간이 선별할 수 있는 배지를 선발한 다음 국내 토양에서 분리한 KBS722 균주에 적응하여 그 내독소 단백질 유전자의 위치를 확인한 결과를 요약하면 다음과 같다. HD73-NRRL과 Dul-mage박사로 분양 받은 균주는 약 7.4, 7.1, 8.1, 11. 3, 75kb 및 크기가 75kb와 비슷하고 copy수가 적은 또 하나의 plasmid로 전부 6개의 plasmid를 보유하고 있었으며 IPL 균주는 약 4.0과 70kb plasmid를 더 보유하는 것으로 나타났다. 상기 HD 73 균주들의 내독소 단백질 크기는 모두 133KD 정도였고 HD73의 내독소 유전자는 변이주간 내독소의 현미경 검경과, immunoblotting plasmid DNA 의 전기영동결과 75kb상에 있는 것으로 나타났다. 이들 변이주들을 potato dextrose agar, starch agar, spizizen casamino acid glucose 와 nutrient agar 평판배지에 접종하여 균형태를 관찰하였을 때 내독소 비형성균(Cry-)은 starch agar 배지에서만 반투명하고 균 군락의 색깔이 엷은 회색을 띄었다. 한편 국내 분리균 KBS722를 novobiocin(3$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)으로 plasmid를 curing시켜 상기 4가지 배지에 도달했을때 nutrient agar배지에서만 Cry 변이주가 반투명하고 엷은 회색을 나타내었다. KBS722의 내독소유전자는 약 225kb의 plasmid상에 있는 것으로 나타났으며 in vitro에서 쉽게 Cry$^+$주와 Cry$^-$주의 판별이 가능하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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