경남 남해군에서 전통방식으로 제조한 식초에서 초산균들을 분리하였다. 분리균주들은 그램 음성, 비운동성, 단간균으로 이중 선발된 3 균주는 16S rRNA 유전자 염기서열 분석 결과 Acetobacter pasteurianus 혹은 Acetobacter aceti로 동정되었다. A. pasteurianus NH2와 A. pasteurianus NH6는 ethanol, glycerol, D-fructose, D-glucose, D-mannitol, D-sorbitol, L-glutamic acid, 그리고 Na-acetate를이용하였다. A. aceti NH12는 ethanol, n-propanol, glycerol, D-mannitol과 Na-acetate를이용하였다. 이들은 30℃, 초기 pH 3.4에서가장 잘 자랐고 초기 초산농도 3% (v/v)까지는 생육하였다. 초산 생산을 위한 최적 조건은 30℃, pH 3.4, 초기 ethanol 농도 5%로 이 경우 초산을 7.3−7.7% 생성하였다.
플라스크 실험과 fermentor 발효실험으로 분리균주인 Acetobacter aceti B20 균주의 초산발효를 위한 몇가지 조건을 최적화하였다. 통기교반 조건이 제한된 flask 실험에서 B20 균주의 생육은 에탄올 농도에 민감하게 반응하여 4%의 에탄올 농도에서는 거의 생육이 되지 않았으며, 초산 생성량도 미미하였다. Flask 배양에서 B20 균주의 생육은 포도당 농도가 3%일 때 가장 좋았으나 농도가 증가할 수록 생육이 저해되었다. ${27^{\circ}C}$와 ${30^{\circ}C}$의 온도에서 A. aceti B20 균주의 생육과 초산생성은 유사하였으며, 이보다 낮거나 높은 온도에서는 생육과 초산 생성이 모두 저하되었다. B20 균주의 최적 발효온도는 $27{\pm}3^{\circ}C$ 범위로 생각된다. Fermentor의 교반속도가 높아질수록 B20 균주의 생육도와 초산생성량이 증가하여 500 rpm일 때 초산농도 5.34%, 발효수율은 57.2%이었다. Batch식 발효에서 초기 에탄올 농도가 7%일 때 발효 120시간째 산도가 5.34%로 가장 높았으며, 이 때의 발효수율은 56.1%로 가장 양호하였다. Fedbatch식 발효에서 초산농도는 2회 feeding할 때 144시간째 8.76%로 최고에 도달하였으며, 이 때 발효수율은 50.6%로 feeding 횟수가 증가할수록 낮게 나타났다.
초산발효능이 강하고 강호기성균인 Acetobacter aceti균의 초산발효에 있어서 교반과 통기속도를 달리했을 때의 발효에 미치는 경향을 요약하면 다음과 같다. 1) 교반 및 통기를 달리했을 때에 균의 증식, 산생성 및 기질소비는 상당한 차이가 있었으며 배양 48시간에 균체는 정체기에 도달하였다. 2) Acetobacter aceti균의 산 발효경향은 증식관 연형이었다. 3) 통기속도는 1v/v/M일 때, 교반속도 700, 500 및 300rpm에서의 최대비증식원도는 각각 $3.97\times10^{-2},\;3.82\times10^{-2}$ 및 $2.04\times10^{-2}\;hr^{-1}$이었으며, saturation constant(Ks)는 61.4, 64.6 및 69.4mg/ml, 그리고 효소이동용량계수는 각각 0.9337, 0.4468 및 $0.1701min^{-1}$이었다. 4) 교반속도 500rpm일 때, 통기속도 1.25, 1.00 및 0.75v/v/M에서의 최대비증식속도는 각각 $3.90\times10^{-2},\;3.82\times10^{-2}$ 및 $2.37\times10^{-2}\;hr{-1}$ saturation constant(Ks)는 63.4, 64.6 및 64.9mg/ml, 산소이동용량계수는 각각 0.4923, 0.4468 및$0.3509min^{-1}$다.
10%의 sucrose를 첨가한 홍차추출물에 tea fungus를 접종하여 (30^{\circ.)$에서 정치배양하여 발효하였다. 14일 동안의 발효에 의해 배양액의 전표면에 7~8mm의 두꺼운 피막이 생겼으며, 배양액의 pH가 2.5 부근으로 저하되었다. 발효 과정 중 아래쪽의 배양액에서는 효모(Saccharomyces cerevisiae and Eeniella sp.)와 여러종류의 세균(Bacillus subtilis, Kurthia zopfli, Gluconobacter oxydans와 Deinococcus sp.)이 분리되었다. 반면에 피막 부위에서는 Acetobacter aceti의 단일균주가 분리되었으며 이 세균은 통상의 Acetobacter와는 달리 점질상의 덩어리로 성장하였다. 발효음료는 달고 새콤한 맛과 약간의 달콤한 과일향을 나타내었다. 이상의 결과로부터 tea fungus에 의한 홍차발효는 다양한 미생물이 공동으로 작용하여 진행되는 symbiotic acetate발효로서, 발효음료는 생물학적으로 안전할 뿐만아니라 적당한 발효조건에 의해 좋은 향미를 갖춘 유망한 음료로 판단되었다.
쌀을 이용한 식초제조에서 증자 공정과 무증자 공정으로 제조된 쌀과 해당화를 혼합한 조성물을 사용하여 식초를 제조하였다. 1단계로 ethanol 발효를 $25^{\circ}C$에서 12일 동안 진행하고, ethanol 함량을 6%로 조정한 후 $Acetobacter$$aceti$균을 접종하여 $30^{\circ}C$에서 9일 동안 초산 발효하였다. 식초 발효전에 초산을 첨가하는 공정은 발효의 성공여부를 결정하는 요인으로 나타났으며, 첨가되는 초산의 농도에 의존적으로 최종 식초 제품의 유기산 함량이 증가하였다. 무증자법으로 식초를 제조시 유리 아미노산과 GABA 함량이 높게 나타났으며, 주요 아미노산으로는 glutamic acid, arginine 등으로 나타났다. 본 연구결과는 해당화-쌀 식초 제조시 쌀의 열처리 공정여부가 식초의 품질에 큰 영향을 준다는 것을 보여준다.
The objective of this study was to develop a functional vinegar beverage using yacon roots, and examine the components' changes during fermentation. The alcohol fermentation was conducted by inoculation of Saccharomyces cerevisiae into yacon root juice with sugars. After 10 days of fermentation at $27^{\circ}C$, yacon wine contained 13% alcohol and $7.8^{\circ}Brix$ sugar contents. The yacon wine at 5% alcohol was fermented by Acetobacter aceti(KCTC1010) with 250 rpm agitation rate at $29^{\circ}C$ for 12 days. The acidity of yacon vinegar reached 4.4% after 12 days' fermentation. Statistically (p<0.05), the amount of Acetobacter aceti, pH, alcohol, with total polyphenol content of samples decreased with acidity, whereas individual sugar contents increased. Furthermore organic acids, total sugar, phenolic acids content, total antioxidant capacity, and color were not different among the five samples. The yacon vinegar beverage was prepared with high fructose syrup through the dilution of yacon vinegar. After making the yacon vinegar beverage, the pH, acidity, total sugar, and total microbial content were examined every week over 4 weeks' storage. There were no changes in the samples during that time.
클로버꽃 식초(食醋)게서 분리(分離)한 초산균에 대한 생리학적(生理學的) 연구(硏究)를수행하여 다음 결과(結果)를 얻었다. 1. 공시균주(供試菌株)는 No. 1, 3, 5균주(菌株)로 그 생화학적(生化學的) 제성질(諸性質)로 보아 Acetobacter aceti에 속하는 균(菌)으로 볼 수 있으며, 특히 No. 3균(菌)이 초관생성능(生成能)이 우수하였다. 2. $3^{\circ}Bx$ Koji extract 에 yeast extract. 0.15%를 첨가(添加)한 배지(培地)에다 $7^{\circ}Bx$ Koji extract에서 전배양(前培養)한 균(菌)을 접종 배양(培養)했을때 산생성(酸生成) 및 과산화(過酸化) 현상(現象)이 현저하였다. 3. $3^{\circ}Bx$ Koji extract 에 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$를 0.005-0.01% 첨가(添加)하였을때 산도(酸度)가 높은 수준으로 유지 되었다. 4. 배지(培地)의 초발최적 pH는 6.0이었다. 5. 단기간(短期間)에 초산의 생성(生成) 및 과산화를 일으키는 ethanol 농도(濃度)로서 는 2-4%가 적합(適合)하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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