We fused the promoter region of an H3.2 chicken histone gene, whose expression is dependent on the cell cycle, to the 5' coding region of an H3.3 chicken histone gene, which is expressed constitutively at a low level throughout the cell cycle. This fusion gene showed a cell cycle-regulated pattern of expression, but in a different manner. The mRNA level of the fusion gene increase during the S phase of the cell cycle by about 3.7-fold at 6 h and 2.7-fold at 12 h after the serum stimulation. The mRNA level of the intact H3.2 gene, however, increased by an average of 3.6-fold at 6 h and 8.7-fold at 12 h. This different expression pattern might be due to the differences in their 3' end region that is responsible for mRNA stability. The 3' end of the H3.2 mRNA contains a stem-loop structure, instead of a poly(A) tail present in the H3.3 mRNA. We also constructed a similar fusion gene using a H3.3 histone gene whose introns had been eliminated to rule out the possibility of involvement of the introns in cell cycle-regulated expression. The expression of this fusion gene was almost identical to the fusion gene made previously. These results indicate that the promoter region of the H3.2 gene is only partially responsible for its expression during the S phase of the cell cycle.
BACKGROUND: Collagen organization within tissues has a critical role in wound regeneration. Collagen fibril diameter, arrangements and maturity between connective tissue growth factor (CTGF) small interfering RNA (siRNA) and mismatch scrambled siRNA-treated wound were compared to evaluate the efficacy of CTGF siRNA as a future implement for scar preventive medicine. METHODS: Nanocomplexes of CTGF small interfering RNA (CTGF siRNA) with cell penetrating peptides (KALA and $MPG^{{\Delta}NLS}$) were formulated and their effects on CTGF downregulation, collagen fibril diameter and arrangement were investigated. Various ratios of CTGF siRNA and peptide complexes were prepared and down-regulation were evaluated by immunoblot analysis. Control and CTGF siRNA modified cells-populated collagen lattices were prepared and rates of contraction measured. Collagen organization in rabbit ear 8 mm biopsy punch wound at 1 day to 8 wks post injury time were investigated by transmission electron microscopy and histology was investigated with Olympus System and TS-Auto software. CONCLUSION: CTGF expression was down-regulated to 40% of control by CTGF siRNA/KALA (1:24) complexes (p<0.01) and collagen lattice contraction was inhibited. However, down-regulated of CTGF by CTGF $siRNA/MPG^{{\Delta}NLS}$ complexes was not statistically significant. CTGF KALA-treated wound appeared with well formed-basket weave pattern of collagen fibrils with mean diameter of $128{\pm}22nm$ (n = 821). Mismatch siRNA/KALA-treated wound showed a high frequency of parallel small diameter fibrils (mean $90{\pm}20nm$, n = 563). CONCLUSION: Controlling over-expression of CTGF by peptide-mediated siRNA delivery could improve the collagen orientation and tissue remodeling in full thickness rabbit ear wound.
목적: 우리 나라 소아에 감염된 H. pylori에서 PCR RFLP를 이용하여 clarithromycin 내성의 원인으로 알려진 23S rRNA의 돌연변이를 찾아내고, cagA, vacA 유전형과 clarithromycin 내성 돌연변이 사이에 연관이 있는지 알아보고자 하였다. 방법: 서울대학교병원 소아과에서 위내시경검사를 통해 H. pylori 위염으로 진단 받은 환아 27명의 내시경 생검 조직에서 H. pylori cagA, vacA 유전자를 증폭하여 유전형을 조사하였다. H. pylori의 23 rRNA V domain을 조사하기 위해 증폭한 후, PCR 산물은 BsaI과 MboII 제한효소로 처리하여 PCR RFLP를 이용하여 돌연변이 여부를 판정하였다. 결과: A2143G 돌연변이가 1명에서, A2144G 돌연변이가 4명에서 발견되어 18.5%가 clarithromycin 내성으로 관찰되었다. cagA 양성이 25명(93%)이었고, vacA s1a/m1이 6명(22%), s1a/m2가 3명(11%), s1c/m1이 16명(59%), s1c/m2가 1명(4%)이었다. clarithromycin 내성 돌연변이를 보이는 경우는 모두 cagA 양성이었고 s1a/m1이 2명, s1c/m1이 2명으로 특정 유전형이 clarithromycin 내성 돌연변이와 연관성을 보이지 않았다. 결론: 위점막 조직에서 PCR-RFLP를 이용한 H. pylori의 clarithromycin 내성 검사는 항생제를 선택하는데 유용하다고 생각된다. Clarithromycin 내성 돌연변이는 cagA, vacA 유전형과 연관성이 없었다.
This study was conducted to measure the total protein, DNA, and RNA contents of corpus luteum(CL) in various stages of estrous cycle and pregnancy. CLs were collected from a local slaughterhouse and stages of the estrous cycle of CL were classified as CL1~2, days 1 to 10; CL3(with/without central cavity), days 11 to 17; CL4, days 18 to 20 by method of Ireland et. al(1980) and stages of the pregnancy of CL were classified as P1~3, months 11~3: P4~6, months 4~6; P7~9, months 7~9 of pregnancy. CL3 with/without central cavity(CC) was identified as described by Kastelic et. al.(1990)-CL with CC, more than 2mm in diameter; CL without CC, less than 2mm in diameter. In total protein content, CL3 with CC was significantly lower than P7~9(p<.05). The total DNA content was lower in CL3 with CC than CL3 without CC and CL4(p<.05). In protein : DNA ratio, CL3 with CC was significantly lower than CL4(p<.05), CL3 without CC was significantly lower than P7~9(p<.05), CL4 was significantly lower than CL3 with CC, P1~3 and P7~9(p<.05). No differences were observed in RNA content, protein:RNA ratio, RNA/DNA of CLs in stages of estrous cycle and pregnancy.
Transducin-like enhancer protein 1(TLE-1) is protein associated with cell proliferation. This study analyzed change of TLE-1 mRNA expression during in vivo and in vitro maturation in porcine oocytes. Oocytes and granulose cells were collected from follicles of <2 mm, 2~6 mm and >6 mm in diameter in slaughtered pig's ovaries. Oocytes collected from follicles of 2~6 mm in diameter were used after in vitro maturation for 0, 10, 20 and 44 h. Cumulus cells and granulose cells were collected after treatment with hyaluronidase. In results, TLE-1 mRNA expression in oocytes collected from follicle >6 mm in diameter is increased, TLE-1 RNA expression in cumulus cells and granulosa cells from follicles <2 mm, 2 mm 6 mm and >6 mm in diameter. However, there is no significant difference. On the other hand, TLE-1 mRNA expression from oocytes cultured for 10 hand 44 h is increased, TLE-1 mRNA in cumulus cells cultured for 10 h is significant increased(p<0.05) than other culture periods. In conclusion, these results show that TLE-1 is expressed in all cell types of oocytes, cumulus cells and granulose cells, and associated with oocyte maturation.
대식세포는 IL-1, IL-6, $TNF-{\alpha},\;IFN-{\gamma}$의 중요한 근원이고, 전염성의 병원체와 종양 세포에 대해 저항하는 주요한 effector 세포이다. 이것은 cytokine signal에 의해 세포파괴가 되도록 활성화 된다. 이번 연구에서 우리는 산더덕의 물 추출물이 cytokine, nitric oxide와 같은 effector 분자를 유도하기 위해 대식세포를 활성화하는지를 알아보기 위하여 실험하였다. 산더덕 추출물에 의한 대식세포의 NO 생성은 농도 의존적이고, 시간 의존적이었다. iNOS는 시간이 지날수록 발현이 유도되었다. 산더덕 추출물에 의한 IL-1과 IL-6 mRNA 유도는 시간 의존적으로 증가 되었고, 처리 후 24시간에 최고점에 도달하였다. 이것은 활성화된 대식세포가 종양세포를 죽일 수 있음을 말한다. $TNF-{\alpha}\;mRNA$의 양은 시간이 지나도 일정하였고, $IFN-{\gamma}\;mRNA$의 양은 산더덕 추출물의 처리 1시간 후에 빠르게 강화되었다. 이러한 결과로부터 산더덕은 효과적인 면역조절자이고 대식세포의 항종양활성을 강화함을 알 수 있다.
유전적 조절, 유전자 발현 그리고 환경적 단서, 화학적 신호에 대응하는 표현형 변이에서 세포 RNA는 ubiquitous 역할 이외에도 세포 외 RNA(exRNA)라 하는 새로운 형태의 RNA는 추후 연구의 방향을 제시한다. exRNA는 membrane vesicles 또는 세포 외 소포체(EV)로 알려진 membrane blebs를 통해 세포 외부로 운반된다. EV의 형성은 원핵생물, 진핵생물, 고세균을 포함한 모든 미생물군에 우세하게 보존되어있다. 본 리뷰는 세균 유래 exRNA에 관해 세가지 주제에 초점을 두었다. exRNA의 발견과 박테리아 유전자 배열에 대한 외부 RNA의 영향, b. exRNA의 분비기작을 통한 방출, c. 다른 그람음성 및 그람양성균에 의해 분비되는 exRNA로 고안될 수 있는 응용 가능분야이다. 본 리뷰에서 장내 미생물군의 probiotics 및 후성유전학적 규제에서 본 exRNA와 exRNA마커와 같은 EV파생 응용프로그램에 대한 의견을 제공할 것이다.
Ribosomal protein (rp) S6 is the substrate of ribosomal protein S6K (S6 kinase) and is involved in protein synthesis by mTOR/S6K/S6 signaling pathway. Some S6 cDNA have been cloned in mammals in recent years but has not been identified in the goat. To facilitate such studies, we cloned the cDNA encoding Cashmere goat (Capra hircus) S6 (GenBank accession GU131122) and then detected mRNA expression in seven tissues by real time PCR and protein expression in testis tissue by immunohistochemisty. Sequence analysis indicated that the obtained goat S6 was a 808 bp product, including a 3' untranslated region of 58 bp and an open reading frame of 750 bp which predicted a protein of 249 amino acids. The predicted amino acid sequence was highly homologous to cattle, human, mouse and rat S6. Expression analysis indicated S6 mRNA was expressed extensively in detected tissues and S6 protein was expressed in testis tissue.
병원균에 대한 정확한 동정은 임상 연구실에서 필수적인 요소의 하나이다. Chyseobacterium indologenes에 대한 동정을 포함한 분자생물학적 분석과 리보솜의 16S rRNA 유전자로 한국에서 추출한 17검체와 GenBank에서 Chyseobacterium속 검색을 통해 이들과 계통관계를 평가하였다. C. indologenes의 배당 서열은 1,176 nucleotides였다. C. indologenes 내의 서열 변이는 주로 염기 치환이었다. 한국의 C. indologenes 검체는 다른 나라의 동 종과 크게 다르지 않았다. 그런데 한국의 C. indologenes의 치환율은 GenBank에 있는 동종보다 높았다. C. indologenes는 C. isbiliense, C. hominis, C. hispanicum, C. molle, C. hungaricum, and C. pallidum과 자매종을 형성하였다.
우리나라 망둑어과 어류 중 말뚝망둥어아과에 속하며 형태학적으로 흡사한 짱뚱어 (B. pectinirostris)와 남방짱뚱어(S. gigas)를 대상으로 12S rRNA, 16S rRNA 및 mitochondria cytochrome b 유전자의 염기서열 분석을 통해, 종내 및 종간의 분자유전학적 특성을 파악하고자 하였다. 짱뚱어 종내 개체간 유전적 차이를 밝히기 위해 mitochondria내에 3가지 유전자를 분석한 결과, 순천지역과 군산지역간의 염기서열은 12S rRNA는 총 434 bp (base pair)의 염기서열을 얻었으며 이를 비교 분석한 결과, 순천지역과 군산지역의 집단 간에는 100% 동일한 염기서열을 보였고, 16S rRNA 유전자는 총 484 bp의 염기서열 중 99.6%의 차이로 단지 2 bp가 치환된 것으로 나타났고, mitochondria cytochrome b 유전자의 경우, 444 bp의 염기서열을 얻었으며 두 지역 간 염기서열은 100%의 일치도를 보였다. 한국산 짱뚱어를 대상으로 한 동일한 종내에서 서식지 (서해, 남해)에 따른 유전적 차이나 지리적 거리의 차이가 있을 것으로 예상하였으나 이상의 3가지 유전자를 비교해 본 결과를 종합해 보면, 종내 개체 변이와 지역별 변이는 일어나지 않은 것으로 밝혀졌다. 또한 짱뚱어와 남방짱뚱어 2종간 비교 (inter-species)에서는 순천지역 짱뚱어와 해남지역 남방짱뚱어를 12S rRNA 유전자와 16S rRNA 유전자 및 mitochondria cytochrome b 유전자 염기서열을 비교 분석한 결과, 각각 96.1% (17 bp), 94.0 (29 bp), 그리고 82.9% (76 bp)로 나타나 두 종의 유전학적 차이는 크게 나타났다. 따라서 본 연구에서 나타난 짱뚱어와 남방짱뚱어 두 종간에 3.9~17.1%를 보여 서로 다른 종으로 볼 수 있을 것으로 사료되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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