Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.5
no.1
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pp.63-69
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1997
The role of L-glutamic acid, a precursor of $C_5$ ALA biosynthetic pathway, on the production of 5-aminolevulinic acid (ALA) has been described in cells of Rhodospirillum rubrum N-1. To the Lascelles basal medium the addition of both 30 mM L-glutamicacid and 20 mM levulinic acid (LA) provided to increase the extracellular ALA yield up to 40 fold (76 mg/l). By the addition of both 60 mM glycine and succinic acid, precursorsof $C_4$ ALA biosynthetic pathway, at middle log phase of cell growth ALA yield was increased 27 fold (52 mg/l) although the celt growth was inhibited to a certain extent.
Solution conformation of cyclo-($Gln^1-Trp^2-Phe^3-{\beta}Ala^4-Leu^5-Met^6$), new NK-2 antagonist in dimethyl sulfoxide solution, has been determined by the use of two-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy combined with simulated annealing calculations. The peptide exhibited converged structures with the atomic root-mean-square difference for the backbone atoms ($N,\;C^{\alpha},\;C'$) of all residues being 0.02${\AA}$ in the 25 annealed structures. The analysis of the structures indicated that the cyclic peptide has three intramolecular hydrogen bonds between $Met^6NH$ and ${\beta}Ala^4CO$, ${\beta}Ala^4NH$ and $Met^6CO$, $Phe^3NH$ and $Met^6CO$, and contain a type-I ${\beta}$-turn with Gln and Trp and ${\gamma}$-turn with Leu. The addition of an extra methylene group to Gly, i.e. P-Ala residue, may relax some unfavorable restraints in the cyclic backbone structure, hence enabling an additional hydrogen bond, which results in stabilizing one conformation.
Effects of dietary ${\delta}$-aminolevulinic acid (ALA) supplementation on serum iron status, blood characteristics, egg production and quality were examined in laying hens in an 8-week feeding trail. Two hundred and forty (Hy-line brown, 40-week-old) layers were randomly assigned to four dietary treatments with ten replications (six layers in adjacent three cages). Dietary treatments included: 1) CON (basal diet), 2) ALA1 (CON+ALA 5 ppm), 3) ALA2 (CON+ALA 10 ppm) and 4) ALA3 (CON+ALA 15 ppm). All nutrient levels of diets were formulated to meet or exceed NRC (1994) recommendations for laying hens. During the entire experimental period, differences of serum iron concentration and total iron binding capacity (TIBC) were significantly increased in ALA1 supplemented treatment (quadratic effect, p<0.05). The difference of total protein between 8 and 0 weeks was significantly higher in ALA2 treatment than CON treatment (quadratic effect, p<0.05). No significant effects were observed on hemoglobin, WBC, RBC, lymphocyte and albumin concentrations. Egg production and egg weight were not influenced by the ALA supplementation. Egg yolk index was also significantly higher in ALA3 treatment than CON treatment at the end of 4 and 8 weeks (linear effect, p<0.05). Haugh unit was increased in ALA3 treatment compared to CON and ALA1 treatments at the end of 8 weeks (linear effect, p<0.05). However, egg shell thickness, breaking strength and yolk color unit were not affected by the ALA supplementation. In conclusion, dietary ALA supplementation at a level of 5 ppm can affect iron concentration in serum while higher levels (10 or 15 ppm) have some beneficial influences on blood profiles and egg quality.
5-Aminolevulinic acid (ALA) can be used as a photodynamic herbicide / insecticide and also applied to photodynamic therapy for malignant skin tumor. In this study we developed recombinant E. coli system for the high productivity of ALA and for the on-line monitoring of fusion protein (EGFP::ALAS) by a fluorescence sensor.
Effect of light intensity on ALA production was, investigated. The culture condition and medium optimization were also examined for the biosynthesis of ALA using Rhodobacter sphaeroides, non-sulfur bacteria, and investigated for enhancement of the production of ALA. In the dark condition, extracellular ALA formation and cell growth were not observed. Optimum light intensity for cell growth and ALA production were 4 kLux and 5 kLux, respectively.
The Rhodopseudomonas palustris KUGB306 hemA gene codes for 5-aminolevulinic acid (ALA) synthase. This enzyme catalyzes the condensation of glycine and succinyl-CoA to yield ALA in the presence of the cofactor pyridoxal 5'-phosphate. The R. palustris KUGB306 hemA gene in the pGEX-KG vector system was transformed into Escherichia coli BL21. The effects of physiological factors on the extracellular production of ALA by the recombinant E. coli were studied. Terrific Broth (TB) medium resulted in significantly higher cell growth and ALA production than did Luria-Bertani (LB) medium. ALA production was significantly enhanced by the addition of succinate together with glycine in the medium. Maximal ALA production (2.5 g/l) was observed upon the addition of D-glucose as an ALA dehydratase inhibitor in the late-log culture phase. Based on the results obtained from the shake-flask cultures, fermentation was carried out using the recombinant E. coli in TB medium, with the initial addition of 90 mM glycine and 120 mM succinate, and the addition of 45 mM D-glucose in the late-log phase. The extracellular production of ALA was also influenced by the pH of the culture broth. We maintained a pH of 6.5 in the fermenter throughout the culture process, achieving the maximal levels of extracellular ALA production (5.15 g/l, 39.3 mM).
Objective: Cells have increased susceptibility to activation of apoptosis when suffering heat stress (HS). An effective supplementation strategy to mimic heat-induced apoptosis of bovine mammary epithelial cells (MECs) is necessary to maintain optimal milk production. This study aimed to investigate possible protective effects of the anti-apoptotic activity of 5-aminolevulinic acid (5-ALA) against HS-induced damage of bovine MECs. Methods: Bovine MECs were pretreated with or without 5-ALA at concentrations of 10, 100, and 500 µM for 24 h followed by HS (42.5℃ for 24 h and 48 h). Cell viability was measured with 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assays. Real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blotting were used to explore the regulation of genes associated with apoptosis, oxidative stress, and endoplasmic reticulum (ER) stress genes. Results: We found that 5-ALA induces cytoprotection via inhibition of apoptosis markers after HS-induced damage. Pretreatment of bovine MECs with 5-ALA resulted in dramatic upregulation of mRNA for nuclear factor erythroid-derived 2-like factor 2, heme oxygenase-1, and NAD(P)H quinone oxidoreductase 1, all of which are antioxidant stress genes. Moreover, 5-ALA pretreatment significantly suppressed HS-induced ER stress-associated markers, glucose-regulated protein 78, and C/EBP homologous protein expression levels. Conclusion: 5-ALA can ameliorate the ER stress in heat stressed bovine MEC via enhancing the expression of antioxidant gene.
Objective: Photodynamic therapy (PDT ) is a promising modality for the treatment of various tumors. In order to assist in optimizing treatment, we applied 5-ALA/PDT in combination with low-dose cisplatin to evaluate cytotoxicity in Hela cells. Methods: Antiproliferative effects of 5-ALA/PDT and cisplatin, alone and in combination, were assessed using MTT assay. To examine levels of apoptosis, Hela cells treated with 5-ALA/PDT, and combination treatment were assessed with Annexin-V/PI by flow cytometry. To investigate the molecular mechanisms underlying alterations in cell proliferation and apoptosis, Western blot analysis was conducted to determine the expression of p53, p21, Bax and Bcl-2 proteins. Results: MTT assays indicated that combination treatment obviously decreased the viability of Hela cells compared to individual drug treatment. In addition, it was confirmed that exposure of Hela cells to 5-ALA/PDT in combination with low-dose cisplatin resulted in more apoptosis in vitro. Synergistic anticancer activity was related to upregulation p53 expression and alteration in expression of p21, Bcl-2 and Bax. Conclusion: Our findings suggest that administration of 5-ALA/PDT in combination with the low-dose cisplatin may be an effective and feasible therapy for cervical cancer.
A novel system has been developed to produce ${\delta}-aminolevulinic$ acid (ALA) using the intact cells of late logarithmic phase of Rhodocyclus gelatinosus KUP-74. The system was shown optimum yield of extracellular ALA under a condition of anaerobic light irradiation (4 Klux) at $30^{\circ}C$ with no variation in cell mass. The rate of extracellular ALA formation was stimulated by low doses of either $C_4\;or\;C_5$ ALA biosynthetic precursors, where 5 mM ($C_4) and 3 mM ($C_5) of each precursors were appeared to generate the maximum rates of 3.3 and 4.0 nmoles of ALA per 0.35 mg cells per hr, respectively. Half-life of the system was 10 hr in a sense of an ability of portage transport of L-glutamate, and sequential dose of this compound was resulted in promising recovery of the ALA.
This study evaluates the improved effect of photodynamic therapy (PDT) by subjecting pathogenic bacteria to a combination of 630 nm light-emitting diode (LED) and 5-aminolevulinic acid (ALA). Bacterial suspensions of 1.5×104 cells/mL were diluted and exposed to ALA concentrations of 10, 5, 2.5, 1.25, and 0.625 mg/mL, incubated for 30 minutes, followed by irradiation with 630 nm LED (18 J/cm2 ). The non-irradiated P. aeruginosa group and the group administered only LED light averaged 415 and 245 colonies, respectively. Conversely, the PDT group showed an average of 109, 225, 297, and 285 colonies at concentrations of 10, 5, 2.5, and 1.25 mg/mL of ALA. Evaluating the effect on E. faecalis revealed an average of 8,750 and 8,000 colonies in the group that did not receive the control photosensitizer and the group exposed to light alone, respectively. However, an average of 0, 2350, 4825, and 7475 colonies at concentrations of 5, 2.5, 1.25, and 0.625 mg/mL ALA were determined for the PDT groups. In conclusion, better inhibitory effects were observed for E. faecalis than for P. aeruginosa. Moreover, our results validate the possibility of improved PDT efficacy using a combination of ALA and 630 nm LED.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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