• 대한의생명과학회지
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• 제4권1호
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• pp.73-76
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• 1998

저자들은 호르텐스극구흡충의 항원 단백질과 일부 특이 항원을 알아보기 위해 다음과 같이 실험을 실시하였다. 호르텐스극구흡충 충체를 추출하여 제조한 조항원을 재료로 SDS-PAGE를 실시하여 항원 단백질을 분석하였다. 그리고 흰쥐 (rat)에게 호르텐스극구흡충 피낭유충을 감염시켜 얻은 혈청 항체와, 호르텐스극구흡충 조항원과 면역증강보조제를 함께 투여하여 얻은 혈청 항체를 재료로 하여 EITB를 실시하여, 일부 특이 항원을 규명하였으며 성적은 다음과 같다. 즉, 조항원으로 SDS-PAGE를 실시한 결과는 200.2-8.2kDa까지 46개의 분획이 관찰되었고, 이중에서 특히 강하게 관찰된 단백분획은 200.2, 107.9, 86.8, 75, 69.8, 46.8, 43.5, 34.5, 20.9, 13.6, 12.6, 11.7, 8.2 kDa이었다. 그리고 EITB룰 실시하여 분석한 특이 IgG항체는 198-13.7 kDa까지 17개의 분획을 보였고, 특히 면역염색이 강하게 나타난 분획은 198, 123.4, 100.8, 91.1, 88.1, 62.8, 34.2, 32, 29.9, 18, 15.7, 13.7 kDa이었다.

• 한국축산식품학회지
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• 제25권2호
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• pp.232-237
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• 2005

락토페린은 트랜스페린 패밀리에 속하며, 철 결합성 당단백질로 대부분 포유동물의 젖에서 발견되고 있다 락토페린의 생리학적 기능으로는 항균활성, 항바이러스활성, 항염증반응, 항암효과, 세포의 성장과 항산화 효과 등이 알려져 있다. 본 연구는 PTip vector를 이용한 Rhodococcus erythropolis(R. erythropolis) 숙주로부터 재조합 젖소 락토페린과 락토페린 N-lobe의 생산을 시도하였다. 이들 단백질의 발현은 다양한 온도 범위에서 발현시켰다. 그리고 R. erythropolis의 숙주 내에서 이들 단백질의 발현은 낮은 온도 내에서도 가능함을 보여주었다. 생산된 재조합 단백질들은 Ni-NTA 정제 담체를 이용하여 정제하였다. 정제의 방법은 비변성 조건과 변성조건으로 수행하였다. 그리고 정제된 재조합 젖소 락토페린과 락토페린 N-lobe는 SDS-전기영동과 Western blot분석을 통하여 확인하였다. 생산된 재조합 젖소 락토페린은 분자량 80kDa, 그리고 락토페린 N-lobe가 43kDa의 분자량을 나타내었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제43권4호
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• pp.231-235
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• 2000

담배 배양 세포의 성장과정 중의 칼모듈린 농도변화 및 칼모듈린 결합 단백질의 종류에 대하여 조사하고 이들 단백질들 중 글루탐산 탈탄산효소를 immunodetection과 활성측정으로 확인하였다. 담배세포는 유도기(초기 $1{\sim}2$일간), 대수증식기($3{\sim}5$일), 정지기 등의 전형적인 성장 패턴을 보였다. 칼모듈린의 농도는 비록 대수증식기에 약간 감소하는 경향을 보이다 정지기에 이르면서 유도기의 수준을 회복하는 것으로 나타났지만 전체적으로는 성장단계에 관계없이 유사한 수준을 유지하는 것으로 나타났다. 주요 칼슘-의존형 칼모듈린 결합단백질은 56, 46, 36, 32-kDa의 4종류인 것으로 조사되었고, 모노클로날 항체를 이용하여 immunodetection을 실시해 본 결과 56-kDa 단백질이 담배 글루탐산 탈탄산효소로 확인되었다. 56-kDa의 글루탐산 탈탄산효소는 대수증식기에 수확한 세포에서 가장 많이 검출되었고, 이와같은 패턴은 효소활성 측정에서도 확인되었다. 이러한 결과들은 담배세포의 성장과정 중에 칼슘/칼모듈린-의존형 글루탐산 탈탄산효소 농도가 조절되고 있음을 제안해 주는 것이다.

• Journal of Microbiology
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• 제43권1호
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• pp.34-37
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• 2005

In the present study, the xylA gene encoding a thermostable xylose (glucose) isomerase was cloned from Streptomyces chibaensis J-59. The open reading frame of xylA (1167 bp) encoded a protein of 388 amino acids with a calculated molecular mass of about 43 kDa. The XylA showed high sequence homology (92% identity) with that of S. olivochromogenes. The xylose (glucose) isomerase was expressed in Escherichia coli and purified. The purified recombinant XylA had an apparent molecular mass of 45 kDa, which corresponds to the molecular mass calculated from the deduced amino acid and that of the purified wild-type enzyme. The N-terminal sequences (14 amino acid residues) of the purified protein revealed that the sequences were identical to that deduced from the DNA sequence of the xylA gene. The optimum temperature of the purified enzyme was $85^{\circ}C$ and the enzyme exhibited a high level of heat stability.

• Journal of Microbiology
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• 제39권3호
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• pp.162-167
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• 2001

Methylovorus sp. strain SS1 DSM 11726 was found to grow continuously when it was transferred from 30$\^{C}$ to 40$\^{C}$ and 43$\^{C}$. A shift in growth temperature from 30$\^{C}$ to 45$\^{C}$, 47$\^{C}$ and 50$\^{C}$ reduced the viability of the cell population by more than 10$^2$, 10$^3$and 10$\^$5/ folds, respectively, after 1h cultivation. Cells transferred to 47$\^{C}$ and 50$\^{C}$ after preincubation for 15 min at 43$\^{C}$, however, exhibited 10-fold increase in viability. It was found that incubation for 15 min at 40$\^{C}$ of Methylovorus sp. strain SSl grown at 30$\^{C}$ was sufficient to accelerate the synthesis of a specific subset of proteins. The major heat shock proteins had apparent molecular masses of 90, 70, 66, 60, and 58 kDA. The 60 and 58 kDa proteins were found to cross-react with the antiserum raised against GroEL protein. The heat shock response persisted for over 1h. The shock proteins were stable for 90 min in the cell. Exposure of the cells to methanol induced proteins identical to the heat shock proteins. Addition of ethanol induced a unique protein with a molecular mass of about 40 kDa in addition to the heat-induced proteins. The proteins induced in paraquat-treated cells were different from the heat shock proteins, except the 70 and 60 kDa proteins.

• 한국동물학회지
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• 제33권1호
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• pp.108-118
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• 1990

혈청을 비롯해서 extracellular matrix에 존재하는 당단백질인 fibronectin은 근세포의 융합과 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구실에서는 최근에 근세포가 분화하는 동안에 fibronectin의 수준이 감소되며, 이러한 감소는 fibronectin의 28 kDa fragment에 대한 수용체으 유용성이 감소하는 결과로 밝혀낸 바 있다. 본 연구에서는 근세포으 융합을 억제하는 물질로 알려진 EGTA를 이용하여 근세포의 융합과 28 kDa fragmen receptor의 관계를 검토하여 보았다.EGTA를 처리한 경우 EGTA를 처리하지 않은 근세포에 비해서 fibronectin의 수준과 28 kDa fragmen binding이 훨씬 적게 감소하였으며, 융합이 봉쇄된 근세포에서 EGTA를 제거하여 융합을 재개시키면 fibronectin의 수준과 28 kDa fragmen의 binding이 정상 근세포 수준으로 환원되었다. 이상의 실험 결과로 볼 때 28 kDa fragmen에 대한 수용체의 감소 또는 변화가 근세포의 분화과정에서 일어나는 fibronectin 수준의 감소와 연관성이 있음을 알 수 있다. 한편, 배양액 내에 trypsin을 처리한 경우에는 처리하지 않은 경우에 비해서 28 kDa fragmen의 binding이 현저하게 감소되었고, gangliosides를 처리한 상태에서는 gangliosides의 농도에 정비례해서 28 kDa fragmen의 binding이 감소되었다. 이 밖에 gel overlay technique을 이용하여 28 kDa fragmen가 SDS-PAGE gel에서 분자량이 약 43kDa인 단백질 및 gangliosides와 binding하는 사실을 알 수 있었다. 이러한 실험 결과를 종합하여 볼 때, 근세포의 융합은 28 kDa fragmen에 대한 receptor의 감소와 관계가 있으며, 그 수용체는 gangliosides와 비슷한 당을 가지고 있는 당단백질일 것으로 추정된다.

• 한국균학회지
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• 제40권2호
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• pp.109-113
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• 2012

식용버섯으로부터 항보체 활성물질을 탐색하여 새로운 소재화 연구의 일환으로 상황버섯(Phellinus linteus) 균사체로부터 항보체 활성 물질을 분리, 정제를 하였으며 화학적 특성을 검토하였다. 정제는 상황버섯의 열수추출한 후, 열수추출물(PL-0)를 한외여과하여 분자량별로 5개의 획분을 얻었다. 이 중, 300kDa 이상의 획분(PL-5)을 DEAE-Sepharose FF 이온교환 크로마토그래피, Sepharose CL-4B 겔여과 크로마토그래피를 실시하여 PL-5-IIIa 획분을 얻었다. PL-5-IIIa 획분을 HPLC를 행한 결과 단일 피크로 나타났으며 정제다당 PL-5-IIIa의 분자량은 800,000Da으로 측정되었다. 정제다당 PL-5IIIa는 64.2%의 당과 29.6%의 단백질로 구성되었으며 구성당은 galactose가 43.1%, mannose가 40.6%, fucose가 15.8%로 나타났다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제29권3호
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• pp.187-191
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• 2005

본 연구는 한우 난포란이 체외성숙된 환경의 변화를 단백질 측면으로부터 검토하기 위하여 체외성숙 배지와 세포질내 단백질 변화와 종류를 검토하였다. 그 결과 배지 내의 단백질 발현량은 배양 4.5시간째까지 감소하였고, 배양 13.5시간째까지는 변화가 없었다. 그러나 배양 $13.5\~18$시간 사이에 증가한 후 배양 18시간 이후에 다시 감소하는 경향이었다. 세포질내의 단백질 발현량은 배양 4.5시간째까지 증가하였고 배양 9시간째까지 급격히 감소하였다. 배양 9시간째부터 18시간째 까지는 단백질 발현량이 유사한 경향이었으나 배양 18시간째부터 24시간째까지 다시 증가하였다. 한편 체외성숙한 배지와 세포질을 2차원 전기영동하여 각각 298개 및 35개의 단백질 spot을 확인하였고, 그 중 배지에서는 28개, 세포질에서는 5개의 spot이 유의적인 변화를 확인하였다. 이들 spot 대한MALDI-TOP분석으로 배지와 세포질에서 각각 8개 및 1개의 단백질을 동정하였다. 그 종류는 aldose reductase, alpha enolase, apolipoprotein A-1 precursor, 43M1a collectin precursor, heat shock 27kDa protein, plasminogen activator inhibitor-1 precursor, thrombospondin 1 transitional endoplasmic reticulum ATPase 및 $\beta$-tubulin이었다.

• Animal cells and systems
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• 제3권2호
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• pp.221-228
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• 1999

In order to find a biochemical marker for late Iysosomes, we characterized two cDNAs which were cloned by using a monoclonal antibody (mAb) against Iysosomes in Amoeba proteus as a probe. The two cDNAs, a 1.3-kb cDNA in pBSK-Iys45 and a 1.6-kb cDNA in pBSK-Iys60, were found to encode proteins homologous to pepstatin-insensitive carboxyl proteinases (PICPs). E. coli transformed with pBSK-Iys45 produced two immunopositive polypeptides (45 and 43 kDa) and the cDNA in 1274 bases encoded a 44,733-Da protein (Lys45) of 420 amino acids containing one site for a core oligosaccharide. On the other hand, E. coli transformed with pBSK-Iys60 produced several polypeptides (64, 54, 45, 41, and 37 kDa) reacting with the mAb. The cDNA contained 1629 bases and encoded a 59,231-Da protein (Lys60) of 530 amino acids containing two sites for asparagine-linked core oligosaccharides. These two cDNAs showed identities of 60.3% in nucleotide sequences and 23.6% in amino acid sequences. Lys45 and Lys60 appeared to share XXEFQK as a common antigenic domain. The amino acid sequence of the Lys45 protein showed 17.4% identity and 40.9% similarity to that of PICP from Pseudomonas sp. 101. On the other hand, Lys60 showed a 24.3% identity and 51.9% similarity with human Iysosomal PICP in the amino acid sequence. A putative active center for serine protease, GTS＊xxxxxFxG, was found to be conserved among PICP homologues. The two PICPs are the first reported enzymatic markers for late Iysosomes.

• BMB Reports
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• 제32권4호
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• pp.363-369
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• 1999

The orf8(chlD) gene cloned from Streptomyces antibioticus T$\"{u}$99 was overexpressed using an E. coli system to confirm its biological function. Induction of the E. coli strain transformed with recombinant plasmid pRFJ 1031 containing orf8 resulted in the production of a 43,000 dalton protein. Glucose-1-phosphate thymidylyltransferase activity of the cell extract obtained from the transformed strain was 4-5 times higher than that of the control strain. The expressed protein was purified 18-fold from E. coli cell lysate using three chromatographic steps with a 17% overall recovery to near homogeneity. The N-terminal amino acid sequence of the purified protein agrees with the nucleotide sequence predicted from the orf8 gene. The SDS-PAGE estimated subunit mass of 43,000 dalton agrees well with that calculated from the amino acid composition deduced from the nucleotide sequence of the orf8 gene (43,000 Da). Also, the native enzyme has a monomeric structure with a molecular mass of 43,000 dalton. The purified protein showed glucose-1-phosphate thymidylyltransferase activity catalyzing a reversible bimolecular group transfer reaction, and was highly specific for dTTP and ${\alpha}$-D-glucose 1-phosphate as substrates in the forward reaction, and for dTDP-D-glucose and pyrophosphate in the reverse reaction.