본 연구에서는 제주도에서 자생하는 30여 종의 식물추출물에 대한 항비만 효능을 조사하였다. 항비만 효능은 in vitro oil red-O staining 방법을 이용하여 지방전구세포 3T3-L1에서 분화억제력을 측정하였다. 그 결과, 30여 종의 식물 중에서 약도라지, 호장근, 유근피 등을 포함한 6종의 식물이 지방전구세포 3T3-L1의 분화를 억제하였다. 지방전구세포의 분화를 억제하는 물질 중 유근피, 약쑥, 호장근, 후박 4종은 우수한 항산화 효능도 동시에 가지고 있음을 확인하였다. 이러한 결과를 통해, 본 실험에서 확보된 추출물이 항비만 물질로 사용될 수 있는 가능성을 확인하였다.
Objectives The purpose of this study is to investigate the effects of Crataegi Fructus Pharmacopuncture(CFP) on the adipogenesis in 3T3-L1 cells, lipolysis in rat epididymal adipocytes and histological changes in porcine adipose tissue. Methods Inhibiton of preadipocyte differentiation and/or stimulation of lipolysis play important roles in reducing obesity. 3T3-L1 preadipocytes were differentiated with adipogenic reagents by incubating for 3days in the absence or presence of CFP ranging from 0.01 to 1mg/mL. The effect of CFP on adipogenesis was examined by measuring GPDH activity and by Oil Red O staining. Mature adipocytes from rat epididymal fat pad was incubated with CFP ranging from 0.01 to 1mg/mL for 3 hrs. The effect of CFP on lipolysis was examined by measuring free glycerol released. Fat tissue from pig skin was injected with CFP ranging from 0.1 to 10mg/mL to examine the effect of CFP on histological changes under light microscopy. Results The following results were obtained from present study on adipogenesis of preadipocytes, lipolysis of adipocytes and histological changes in fat tissue. 1. Crataegi Fructus Pharmacopuncture inhibited adipogenic differentiation at the concentration of 1.0mg/mL. 2. Crataegi Fructus Pharmacopuncture decreased the activity of glycerol-3-phosphate dehydrogenase(GPDH) at the concentration of 0.1mg/mL. 3. Crataegi Fructus Pharmacopuncture ok. lipolysis at the concentration of 0.1mg/ml. 4. Crataegi Fructus Pharmacopuncture ranging 0.1 to 10mg/mL failed to exert lysis of cell membrane in porcine fat tissue. Conclusions These results suggest that Crataegi Fructus Pharmacopuncture at relatively high concentration inhibited adipogenesis and increased lipolysis of adipocytes. However, Crataegi Fructus Pharmacopuncture didn't exert any effect on lysis of cell membrane in fat tissue.
민간요법 중에서 비만 치료에 사용되는 4종의 식물인 지유, 옥발, 적하수오 및 삼백초를 동량으로 혼합하여 10배의 물을 사용하여 가열추출 후 감압농축 하여 HEM을 조제하였고, 이렇게 조제된 HEM을 사용하여 $0{\sim}100{\mu}g$/mL 농도로 3T3-L1의 지방축적 억제율을 측정한 결과 농도가 증가함에 따라 유의적으로 증가하였으며, 동일 농도에서 세포독성은 없었다. 또한 지방 축적에 관여하는 효소인 GPDH의 활성을 억제함으로써 세포내 지방이 축적되는 것을 억제하였다. 5주간의 동물실험 결과 대조군과 비교하여 HEM1과 HEM2군 모두 체중 변화와 식이효율이 줄어드는 것으로 나타났으며, 혈액 분석에서 HEM군은 혈중 중성지방과 총콜레스테롤에 효과를 보이지 않았다. 해부학적인 측면에서 부고환 및 신장 주위의 지방무게와 간 무게 또한 낮았다. 이러한 결과를 통해, 본 실험에서 사용한 생약복합물은 항비만 소재로써 체지방 축적억제에 효과성이 있음을 확인하였다.
본 연구에서는 3T3-L1 전지방세포를 이용하여 발효 삼정환의 지방 분화 억제 효과를 확인하고자 하였다. 삼정환을 5가지 주요 유산균으로 각각 발효시킨 후, Oil Red O 염색법으로 지방세포 분화 억제 여부를 알아보고, 이의 기전을 알기 위해서 지방생성에 핵심적인 역할을 하는 transcription factor 및 지질 조절 효소의 유전자 발현량을 비교하여 보았다. Oil Red O 염색 분석에서는 Lactobacillus plantarum, Enterococcus faecium으로 발효한 삼정환에서 지방구 수의 감소를 확인할 수 있었다. 또한 transcription factor로 $C/EPB{\alpha}$, $PPAR{\gamma}$, UCP-2 및 콜레스테롤 조절과 관련된 효소인 HMG-CoA reductase의 4가지 유전자 발현 정도를 분석하였는데, 발효시키지 않은 삼정환의 경우 농도가 $100{\mu}L/mL$ 이상일 때 네 가지 항목에서 억제 효과를 나타냈으며, 발효시켰을 때는 유산균의 종류에 따라 효과 억제효과가 있었는데, Lactobacillus plantarum으로 발효한 삼정환이 효과가 가장 좋은 것으로 나타났다. Lactobacillus plantarum으로 발효한 삼정환은 동일 농도의 발효하지 않은 삼정환과 비교했을 때, Oil Red O 실험에서 염색된 지방구 수가 더욱 감소하였으며, $PPAR{\gamma}$, UCP-2, HMG-CoA reductase의 경우 농도가 $200{\mu}L/mL$일 때 각각 35%, 57%, 54%로 5가지 발효 삼정환 중 가장 높은 억제율을 나타내었다. 이에 지방분화 억제 효과를 가진 삼정환을 발효시키면 그 효과가 더욱 증가하는 것으로 나타났는데, 특히 Lactobacillus plantarum으로 발효한 삼정환은 $PPAR{\gamma}$, UCP-2, HMG-CoA reductase의 유전자 발현조절을 통해 지방 분화를 억제시키는 것으로 밝혀져 발효 삼정환은 항비만 혹은 항고지혈증 약물로 개발 가능성이 있는 것으로 사료된다.
지방전구세포가 지방세포로 분화하는 과정에서 아선약 추출물의 영향을 확인하고자 분화유도제를 처리하여 3T3-L1 세포에서 아선약의 세포독성, 지방축적 억제 효과, triglyceride 억제 효능, 지방분화 관련 단백질들의 발현을 확인하였다. 아선약 추출물을 최대 $200{\mu}g/mL$ 농도까지 세포에 처리하여 세포독성을 측정한 결과 아선약 추출물은 $100{\mu}g/mL$ 이하의 농도에서는 세포에 독성을 유발하지 않는 것으로 확인되었다. Oil red-O 염색을 통해 지방축적률을 확인한 결과 아선약 추출물에 의한 농도 의존적인 지방축적의 감소 효과가 있었다. Triglyceride 생성량 역시 농도 의존적인 감소가 확인되었다. 아선약에 의한 지방분화의 감소가 어떠한 기작에 의해 조절되는지 확인하고자 관련 지표단백질인 $PPAR{\gamma}$와 SREBF-1 그리고 $C/EBP{\alpha}$의 발현량 변화를 확인해본 결과 $100{\mu}g/mL$ 농도에서 유의성 있게 감소하였다. 이상의 결과를 종합해볼 때 아선약 추출물은 지방세포의 분화억제와 분화된 지방세포의 지방축적을 저해함으로써 항비만 효과를 유도할 것으로 기대된다.
It has been reported that CLA decreases fat deposition in vivo and in vitro experiments. Among CLA isomers, c9t11 and t10c12 have been shown to exert active biological activities. For example, t10c12 reduces body weight and increases lean body mass, whereas, c9t11 has little effect on body fattness. However, the underlying molecular mechanism for the anti-obesity action of CLA isomers are not well understood. The purpose of this study was to examine the effects of t10c12 and c9t11 on lipid accumulation, cell proliferation, cell death and the expression levels of Ucp genes which are proposed as targets for anti-obesity in 3T3-L1 preadipocytes. Isomers of CLA at 50$\mu$M were added into preadipocyte differentiation medium for 3, 6 and 9days. Control cells received only the vehicle in the differentiation medium. Cytochemical analyses for lipid accumulation, cell proliferation and apotosis were carried out to compare lipidogenesis and cellular activity. RT-PCR analysis of GAPDH, Ucp 2,3 and 4 were also performed to find any modulatory effects of CLA isomers on the metabolic genes. Lipid accumulation indicated by Oil Red-O staining was inhibited in CLA isomers as compared to the control. T10c12 isomer showed less lipidogenesis than c9t11 did. A decrease occurred in CLA isomers as shown by BrdU incorporation. Apotosis has occured at higher level in t10c12 when compared to that of t9c11. Ucp 2, 3 and 4 genes were also upregulated in CLA isomers. T10c12 showed higher level of Ucp gene expressions than the c9t11 did. The biological activities of CLA isomers were also found to be different during differentiation of 3T3-L1 preadipocytes, suggesting that different isomers may be active in certain stage of lipidogenesis. The results indicate that both c9t11 and t10c12 CLA isomers decrease lipidogenesis, inhibit cell proliferation, increase cell death and upregulate in Ucp gene expressions during 3T3-L1 preadipocyte differentiation. T10c12 isomer was more effective than c9t11 in overall anti-obesity activity.
These studies were conducted to investigate the effects of the various aqua-aqupunctures of Hwanggum(Scutellariae Radix) on the proliferation of 3T3-Ll cells. They were tested by means of Sulforhodamin B(SRB) assay. The results were summerized as follows: All tested aqua-aqupunctures inhibited the proliferation of preadipose 3T3-Ll cells. In case of the dilution of Hwanggum aqua-aqupuncture(HG), the results were quite opposite. In 1000 times dilution of HG(${\times}1000$), a low concentration increased the proliferation of preadipose 3T3-Ll cells, but the high($100{\mu}l\;and\;200{\mu}l$) concentration inhibited it. These results suggest that Hwanggum aqua-aqupunctures may be used on the obesity induced by the overgrowth of preadipose 3T3-Ll cells.
비만은 2 형 당뇨병, 고혈압 및 고지혈증을 포함한 다양한 질병과 관련이 있으며, 산국꽃은 전통적으로 비만과 2형 당뇨병 치료제로 사용되어왔다. 본 연구는 전지방세포(preadipocyte, 3T3-L1)를 사용하여 산국꽃 에센셜오일이 지방세포 분화 및 지방 생합성에 미치는 영향을 확인하였다. 산국꽃 에센셜오일은 $0.1-5{\mu}g/ml$의 농도에서 3T3-L1 세포에 대해 독성을 나타내지 않았다. 산국꽃 에센셜오일은 지방세포 분화 유도물질(MDI)을 처리한 3T3-L1세포에서 농도 의존적으로 지방분화를 억제하였으며, $1{\mu}g/ml$ ($28.94{\pm}2.01%$)농도에서 최대 효과를 나타내었다. 산국꽃 에센셜오일은 MDI에 의해 분화가 유도된 3T3-L1 세포에서 지방생성전사인자인 peroxisome proliferator-activated receptor ${\gamma}$ ($PPAR{\gamma}$), CCATT/enhancer binding protein ${\alpha}$ ($C/EBP{\alpha}$) 그리고 sterol regulatory element binding protein (SREBP-1)의 단백질 발현을 억제하였다. 중성지방 생성 및 지방산합성효소 조절인자인 acetyl-CoA carboxylase (ACC)와 fatty acid synthase (FAS)의 발현 또한 산국꽃 에센셜오일에 의해 억제되었다. 따라서 본 연구를 통해 산국꽃 에센셜오일은 천연 항비만 기능성 소재로써의 사용이 가능할 것으로 사료 된다.
Resveratrol (3,4,5-trihydroxy-trans-stilbene), a phytoalexin found in grape skin, grape products, and peanuts as well as red wine, has been reported to have various biological and pharmacological properties. The purpose of this study was to investigate the anti-obesity effect of resveratrol-amplified grape skin extracts on adipocytes. The anti-obesity effects of grape skin extracts were investigated by measuring proliferation and differentiation in 3T3-L1 cells. The effect of grape skin ethanol extracts on cell proliferation was detected by the MTS assay. The morphological changes and degree of adipogenesis of preadipocyte 3T3-L1 cells were measured by Oil Red-O staining assay. Treatment with extracts of resveratrol-amplified grape skin decreased lipid accumulation and glycerol-3-phosphate dehydrogenase activity without affecting 3T3-L1 cell viability. Grape skin extract treatment resulted in significantly attenuated expression of key adipogenic transcription factors, including peroxisome proliferator-activated receptor, CCAAT/enhancer-binding proteins, and their target genes (FAS, aP2, SCD-1, and LPL). These results indicate that resveratrol-amplified grape skin extracts may be useful for preventing obesity by regulating lipid metabolism.
본 연구에서는 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 조릿대조추출물(SBE)과 에틸아세테이트 분획물(SBEA)의 지방세포 내 중성지방 축적 저해 활성을 확인하고자 하였다. 먼저 SBE의한 지방세포 분화 저해 활성을 확인하기 위해 추출물을 3T3-L1 지방전구세포에 분화를 유도하면서 농도별(10, 50, 100 ${\mu}g/mL$)로 처리하였고, 그 결과 SBE가 지방세포의 분화를 억제시켜 지방세포 내 중성지방 축적을 저해시켰다. 또한 SBE를 용매 극성에 따른 분획한 분획물들의 항분화 효능을 확인하였다. 그중 항분화 효능이 가장 뛰어난 에틸아세테이트 분획물로 지방세포 분화에 따른 세포 내 중성지방축적이 억제 되었다. 그러나, 지방세포 분해를 통한 glycerol release의 증가는 나타나지 않았다. 이 같은 결과를 바탕으로 항분화 효능의 기전을 연구하기 위해 PPAR${\gamma}$, C/EBP${\alpha}$ 등 전사활성과 지방세포 분화에 관여하는 유전자들의 활성을 확인해 보았다. 실험 결과 SBEA는 PPAR${\gamma}$와 C/EBP${\alpha}$의 mRNA 발현을 농도 의존적으로 감소시켰다. 따라서 SBEA 항비만 효과는 지방 생성의 주요 전사인자인 PPAR${\gamma}$와 C/EBP${\alpha}$의 유전자 발현조절을 통해 지방 분화 억제 및 지방 축적을 효과적으로 감소시키는 것으로 보이며, 효과가 있는 농도가 100 ${\mu}g/mL$로 천연물질로써 비교적 낮은 농도에서 우수한 지방 분화억제 활성을 나타내어 경제적이며 효과적인 항비만 기능성식품으로서 개발 가능성이 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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