• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제26권3호
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• pp.41-47
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• 1998

Some white-rot fungi, screened at the Laboratory of Forest Products Microbiological Chemistry, Chungbuk National University were cultured and added the inducer of laccase enzyme, 2,5-xylidine. The fungi named by CB-13, CB-20, CB-99, CB-100 and CB-123 strains showed positive results in the decolorization of aromatic compounds, carminic acid and Rhemazol brilliant blue R. Concerned to the inducing effect of 2,5-xylidine on laccase activity, CB-20, CB-100 and CB-123 strains showed very high activity by addition of 2,5-xylidine, whilst CB-13, CB-99 and CB-124 strains produced relatively high laccase enzymes, regardless of inducer addition. There were no any laccase activities on CB-25, CB-64 and CB-139, even in addition of inducer. It is confirmed that some screened fungi have decolorizing ability on aromatic compounds, carminic acid and Rhemazol brilliant blue R. Also, the addition of inducer, 2,5-xylidine, has increased the activity of laccase enzyme which is secreted from some white-rot fungi.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제11권2호
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• pp.96-99
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• 2006

In this study, we have attempted to determine the optimum concentration of inducers responsible for efficient laccase production by the white-rot fungus, Trametes sp. Variations in laccase activity were investigated with changing concentrations of 2,5-xylidine, syringaldazine, ABTS, and guaiacol. Enhancement of peak laccase activity was achieved via the combination of 2,5-xylidine with ABTS, syringaldazine, or guaiacol, resulting in increases of up to 359, 313, and 340%, respectively, as compared to control values. Among the tested inducers, the addition of 0.1mM of ABTS coupled with 1.0mM of 2,5-xylidine in the medium after 24 h of cultivation proved optimal with regard to laccase enzyme production.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제34권4호
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• pp.46-53
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• 2006

본 연구는 Remazol Brilliant Blue R (RBBR) 염료의 탈색능을 이용, 리그닌분해능이 강한 백색부후균을 선발하고, 이들 균주들의 리그닌분해효소의 활성에 미치는 inducer, 2,5-xylidine 첨가효과를 검토하였다. 20종의 공시균주 가운데 9종이 RBBR의 탈색, glucose-1 oxidase (GOD), laccase (LAC) 및 Mn-peroxidase (MnP) 등 4가지의 활성을 모두 가지고 있었으며, 비교적 활성이 높은 5종의 균주는 Phlebia radiata, Trametes versicolor, Abortiporus biennis, Gleophyllum odoratum 및 Cerrena unicolor 등으로 확인되었다. 이들 균주 가운데 LAC 활성이 매우 높은 T. versicolor, G. odoratum 및 C. unicolor에 대한 최적 생육온도, 최적 pH 및 LAC 활성에 미치는 inducer 첨가효과를 조사한 결과, T. versicolor가 $28^{\circ}C$에서, G. odoratum 및 C. unicolor는 $25^{\circ}C$에서 가장 좋은 생장을 보였으며, 모든 균주의 배양 최적 pH는 5.5로 나타났다. 공시균주 모두 2,5-xylidine 첨가에 의하여 LAC 활성의 증가를 보였는데, T. versicolor는 $22,700nkat/{\ell}$로 대조구에 대하여 11.3배, G. odoratum은 최대 활성이 $15,400nkat/{\ell}$로 9배, C. unicolor는 $17,330nkat/{\ell}$로 5.5배의 활성증가를 나타냈다.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제33권5호통권133호
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• pp.76-85
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• 2005

The degradation of pentachlorophenol (PCP) by lignin degrading fungi was performed. Several fungi, Abortiporus biennis, Cerrena unicolor and Trametes versicolor, were tested to evaluate the inhibitory effect of PCP on their growth. At the extremal concentration of PCP $(500\;{\mu}M)$, only C. unicolor showed relatively fast growth (60% within 14 days) in the comparison to the control culture. In the case of A. biennis and C. unicolor, when initial PCP concentration was $50\;{\mu}M$, about 88.2% and 79.5% of PCP degradation were achieved within 3 days, respectively. When 2,5-xylidine (0.2 mM) was added to the C. unicolor culture, as high as 98% of PCP degradation was achieved within just an hour after its addition. A. biennis removed 44% of PCP at the same condition. PCP was completely disappeared when laccase activities reached to maximum.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제35권4호
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• pp.61-66
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• 2007

본 연구에서는 trametes versicolor에서 분비하는 laccase를 분리 정제하고, 그 효소특성을 조사하였다. 공시균의 배지로는 PDB배지를 사용하였으며, 이 효소를 유도하기 위하여 공시균 접종 5일 후 inducer로 2,5-xylidine (0.2 mM)을 첨가하였다. Inducer 첨가 2일 후 laccase를 수확하여 Glass filter (GF/C)를 이용하여 균사체를 제거한 후 laccase 여과액의 정제시간을 단축시키고, 쉽게 단백질을 농축시키기 위하여 ultramicrofilter (Viva flow 50, GE Healthcare Bioscience, USA)를 사용하여 농축하였다. 이렇게 농축된 laccase 여과액은 Hitrap Q FF column으로 부분 정제하여 활성이 검출된 peak를 확인할 수 있었다. 효소의 특성을 조사한 결과 효소의 활성이 가장 높은 pH는 5.0이었으며 최적 온도는 $60^{\circ}C$였고, specific activity는 syringaldazine을 substrate로 사용하여 확인한 결과 crude한 상태에서는 약 32 U/mg였고, 농축한 후에는 약 409 U/mg였으며 Hitrap Q FF column으로 분리한 후에는 약 1.243 U/mg였다. 그리고 SDS-PAGE gel 사진으로 확인한 결과 단백질의 크기는 약 53 kDa이었다.

• 농업과학연구
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• 제18권2호
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• pp.157-163
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• 1991

백색 부후균 Coriolus versicolor CV3 균주를 공시하여 laccase 생성을 위한 배양 조건을 검토하였다. 감자, 양파 또는 맥아의 추출물을 주재로 한 각종 백색 부후균용의 배지를 비교한 결과, 공시 균주의 laccase 생성은 potato-malt extract 배지에서 가장 높아서 배양 11일 후 배양액당 $1.50unit/m{\ell}$, 균체 건물 중당 119.5 unit/g 수준의 laccase 활성도에 도달하였다. potato-malt extract 배지에 각종 유기 및 무기 질소원 중 yeast extract 또는 $KNO_3$를 0.2% 첨가하였을때 laccase의 생성 수준이 높았으며, inducer로서 2.5-xylidine을 $4{\times}10^{-4}M$ 첨가한 경우 대조구에 비하여 3.1배 수준으로 laccase 생성이 유도 되었다. Laccase 생성을 위한 배양 최적 pH는 4~4.5 이었다.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제24권4호
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• pp.74-81
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• 1996

리그닌분해능(分解能)이 높은 균주(菌株)로 선발(選拔)된 Coriolus versicolor-13 (CV-13), LKY-7 및 LKY-12세 균주(菌株)에 대하여 균체외(菌體外) laccase 생산(生産)을 검토(檢討)하였다. Glucose-peptone broth에서 균체외(菌體外) laccase활성(活性)은 CV-13의 경우 3일 이상배양후(以上培養後)에 나타났고 LKY-7과 LKY-12균주(菌株)의 laccase 활성(活性)은 배양(培養) 2일째에 검출(檢出)되었다. 탄소원(炭素源)으로서는 maltose가 glucose와 비슷한 laccase 생산효과(生産效果)를 나타냈고 질소원(窒素源)으로서는 유기태질소(有機態窒素)가 무기태(無機態) 질소(窒素)보다 효과적(效果的)이었다. Laccase 유도물질(誘導物質)로서는 2,5-Xylidine이 가장 우수하였으며 1mM 이하(以下)의 농도(濃度)에서는 유도효과(誘導效果)가 크게 나타났으나 1.5mM 이상(以上)의 농도(濃度)에서는 laccase생산(生産)이 억제(抑制)되었고, 균사생장(菌絲生長) 초기(初期)에 첨가(添加)하는 것이 효과적(效果的)으로 나타났다. SDS-PAGE 후, CV-13 균주(菌株)의 균체외(菌體外) 단백질(蛋白質)에서는 약 69, 66, 25, 23, 19kDa 크기의 laccase band가 5개 나타났고 LKY-7 균주(菌株)에서는 27kDa과 19kDa 크기의 2개 band가, LKY-12 균주(菌株)에서는 22, 20, 17kDa 크기의 laccase band가 3개 나타났다.

• 펄프종이기술
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• 제29권4호
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• pp.7-17
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• 1997

균체가 생산하는 laccase 효소가 다방면으로 이용되면서, 이 효소를 균체로부터 대량으로 생산하고 분리.정제하여야 할 필요성이 대두되고 있다. 아울러 이 효소의 활성을 유도하기 위한 inducer 로서 2,5-xylidine 이 주로 사용되고 있는바, 이 xylidine 의 유독성이 인정되면서 사람에게 독성을 주지 않는 환경친화적 inducer의 검색이 필요하게 되었다. 본 연구에서는 백색부후균 Cerrena unicolor가 분비하는 laccase 효소의 유도를 위한 inducer로서 ferulic acid를 사용하였으며, 균체로부터 생산 및 분리된 laccase 효소의 정제특성을 구명코자 하였다. 본효소(constitutive enzyme)로서 I 및 II를, ferulic acid를 inducer로 사용한 경우 inducing 효소 III을 분리.정제하였다. 본 효소 I 및 II의 Michaelis 정수는 각각 737 M, 716 M 이었고, inducing효소 III은 167 M 로서, 기질에 대한 높은 친화성을 보여주고 있다. 분자량도 각각 65 kD, 63 kD 였으며, inducing효소 III은 59 kD 였다. 두효소 모두 15-19%의 당 및 단백질분자당 4M의 동(Cu)을 함유하고 있었다. 정제효율은 효소 I 및 II가 10.1%, 9.4% 였으며, III은 3.2% 였다. 모든 효소의 최적 pH 는 5.5였으며, 최적온도는 비교적 높은 $40^{\circ}C$였다.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제25권3호
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• pp.29-36
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• 1997

목재부후균으로 부터 락케이스 효소의 생산 및 유도를 위하여 여러가지 유도약품(inducer)을 사용하였다. 이들 가운데 ferulic acid, pentachlorophenol 및 2,5-xylidine이 매우 높은 락케이스 활성을 나타나게 하였으며, 거의 동일한 유도효과를 보여주었다. 이들 약품 이외에도 sinapic acid, syringic acid 및 coffeic acid 등도 높은 락케이스 활성을 주었는데, 산의 형태가 알데히드류보다도 높은 유도효과를 나타냈다. 그리고 실험한 48개 균주 가운데 38개 균주가 락케이스를 생산하였으며, 이 가운데 32균주가 ferulic acid에 의해 강한 효소유도 활성을 보였다. 이러한 결과는 지금까지 락케이스 효소의 검출이 어려웠던 Abortiporus biennis 및 Gleophyllum odoratum에서도 높은 락케이스 효소의 유도를 가능하게 하였다. 아울러 가장 높은 효소활성을 나타낸 균주로서는 Cerrena unicolor 였으며, 그 락케이스 효소활성이 무처리 및 inducer 첨가시 각각 40,000 및 60,000 nkat/l 정도였다.

• 한국균학회지
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• 제32권2호
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• pp.112-118
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• 2004

한국산 흰구름버섯(Trametes hirsuta S1)로부터 배지 내로 분비된 laccase를 ultrafiltration과 anion exchange chromatography, adsorption chromatography를 이용하여 분리 정제하고 정제된 효소의 특성을 조사하였다. Laccase는 균주의 일차 대사 과정에서 주로 생산되는 세포의 페놀 산화효소였다. 흰구름버섯을 기본 배지에서 배양하였을 때 생장은 배양 6일까지 급속히 이루어졌고, laccase의 활성은 배양 5일에 최대활성을 나타냈으며 배양액에서 LiP와 VAO의 활성은 측정되지 않았다. Laccase의 생산에 미치는 유도원의 영향을 조사하기 위하여 배양 중인 흰구름버섯에 몇몇 유도원을 첨가한 결과, 2,5-xylidine은 대조구에 비하여 laccase의 생산을 약4배 증가 시켰다. 정제된 laccase는 SDS 젤 전기영동에서 대략 66 kDa의 분자량을 가지는 단일 폴리펩타이드(single polypeptide)였고, 탄수화물 함량은 12%였다. 정제된 laccase의 $K_m$과 $V_{max}$를 ABTS[2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazo line-6-sulfonic acid)]를 기질로 사용하여 조사한 결과 각각 $51.2\;{\mu}M$과 $56.8\;{\mu}mole{\cdot}min^1{\cdot}mg^{-1}$로 측정되었다. Laccase 활성의 최적 pH는 3.0이며, 이 효소는 $50^{\circ}C$ 미만에서 1시간 동안 처리하였을 때 안정적이었고 $70^{\circ}C$에서 20분간 처리하였을 때 효소의 활성이 반감되었다. Laccase의 분광학적 특성을 조사한 결과 구리를 포함하는 단백질로 나타났다. 일반적으로 알려진 laccase의 기질들에 대한 특이성을 조사한 결과, 5 mM ABTS에서 가장 높은 활성을 나타내었으며 tyrosine에서는 laccase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 $NaN_3$, TGA, DDC를 일정 농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 흰구름버섯 S1 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 Coriolus hirsutus의 laccase와 100%의 상동성을 나타냈고, T. versicolor의 laccase I과는 68%의 상동성을 나타냈다.