본 실험은 한국산 잠견에 기생하는 세균을 분리하여 생리학적 형태학적 및 배양적인 특성을 파악하여 그 미생물을 동정하고 저장중인 잠견에 미생물 침식을 방지하는 과학적인 근거를 모색했다. 그 실험결과는 다음과 같다. 1. 잠견으로부터 분리된 12 strain의 Bacteria의 형태학적인 실험결과 colony의 형태는 table II와 같다. 종합적인 형태적 특성은 table III과 같으며 gram stain과 spore stain은 Fig, I, II와 같다. 2. 분리된 12 strain의 배양적인 특성은 table IV, V, Ⅵ와 같다. 3. 분리된 12 strain의 생리적인 특성은 table Ⅶ와 같다. 4. 이상, 형태학적 배양적 생리적인 특성에 의거하여 분리균주의 유연관계를 추정하면 다음과 같다. (l) No 1 No 8; Bacillus subtilis variation (2) No 2 ; Bacillus stearothermophilus (3) No 3 ; Bacillus circulans (4) No 5 No 6; Bacillus thuringiensis (5) No 7 No 11; Bacillus brevis (6) No 12 No l0; Bacillus cereus variation
국내의 무지개송어, 금붕어, 은어양식장에서 아가미와 지느러미의 부식과 괴사를 나타내는 물고기로부터 균주를 분리하여 형태학적, 생화학적, 항원적시험 그리고 전기영동을 통하여 분리주와 미국과 일본에서 분리된 표준주(NCMB $2248^T$, EK 28)의 성상을 비교하였다. 즉, 형태학적으로 cytophaga agar에서 강한 점착성, rhizoid 그리고 노랗고 편평한 집락을 나타내었으며 flexirubin type pigment를 산생하고 동종과 이종에 대한 항원적 시험에서도 응집역가는 1024, 512를 나타냈다. 비록 분리주는 각기 다른 어종에서 분리되었음에도 불구하고 형태학적, 생화학적 그리고 혈청학적인 특성에 있어서 미국과 일본에서 분리된 표준주와 유사하였다. SDS-PAGE에 의한 세포외막단백질(outer membrane proteins, OMPs)의 분석에서도 표준주와 gel pattern이 일치하는 형태를 나타내었다. 이상의 결과를 미루어볼 때 국내 무지개송어, 금붕어 및 은어양식장에서 분리된 균주들은 Cytophaga columnaris로 분리 동정할 수 있었다.
한국 서해안과 남해안 47개소의 해수와 mud 시료로부터 광합성세균으로 유추되는 13개의 균주를 분리하였고, agar-shake tube method와 RAPD-PCR을 이용하여 4개 서로 다른 균주를 순수분리 하였다. 4개의 균주 중 폐수분해능이 가장 뛰어난 균을 선정하여, 형태학적, 배양적, 생화학적 특성 및 16S rRNA sequencing에 의한 동정결과 purple, sulfur bacteria 쪽에 가까웠으나 형태학적, 배양학적, 생화학적 특성이 purple, non-sulfur bacteria의 Rhodobacter 속에 가장 근접하여, Rhodobacter sp. EGH-24로 명명하였다.
광합성 세균의 수소생성 기작에 대한 연구의 일환으로 광합성 세균에서 생성되는 색소의 성분을 조사하였다. 분리한 광합성 세균 K-7은 수소생성능이 뛰어난 균주로 조사된 홍색 비유황세균으로서 생리, 형태 및 배양학적 조사에 의하여 Rhodopseudomonas spheroides로 분류하였다. Type culture인 Rhodopseudomonas spheroides NCIB 8253과 비교 연구하였으며, SEM(Scanning Electron Microscope)하에서 기존균주와 분리균주의 형태학적인 특징을 확인하였다. 군 동정의 주요열쇠가 되는 색소성분을 조사한 결과, 균주 K-7에서 추출된 carotenoids로는 spheroidene의 산화형태인 OH-spheroidenone이 주성분이었고, Neurosporene, Lycopene, Anhydro- rhodovibrin, Rhodovibrin등이 동정되었다.
가시아메바 (Aconthamoeba) 속의 종 동정과 분류 체계를 확립하기 위해 18종의 대표주를 포함 한23분리주들의 185rRNA 유전자를 PCR로 증폭하고, RFLP를 비교 분석하는 riboprinting을 시행하였다. 이에 근거한 dendrogram은 형태학적 일 grouping과 잘 부합하였다. 형태학적 제1군에 속 한 별가시아메바와 A.tubiahi는 형태학적 제2군 및 제3군의 분리주들로부터 가장 먼저 분지해 나왔으며, 서로간에도 매우 큰 유전적 거리를 나타내었다. 형태학적 제3군의 4분리주 중 A. cuLbertsonj A. hedvi 및 A.pulesti 는neAfsis는 서로간에 큰 유전적 거리를 나타내어 합당한 분류로 인정할 수 있었으나, A. Ppustulosa는 A. pqlestinenis와 유전적으로 매우 가깝게 나타나 A. pdestinensis로 재동정되어야 할 것으로 판단되었다. 형태학적 제2군의 분리주들은 0.2%의 유전 적 거리를 기준으로 하여 6개의 분지군으로 나누어졌다. 그 중 18S rRNA 유전자 내에 intron을 포함하고 있는 A. griffini가 나머지 분리주들과 가장 큰 유전적 거리를 나타내었다. 카스텔라니가시 아메바 Castellani주, Ma주, A. quplnvi13주, 담수가시아메바 L3a주, 대식가시아메바 Jones주 및 A. triangdris SH621주가 하나의 분지군을 형성하였으며, 그 중 A. quina Vil3와 담수가시아메바 L3a주는 카스텔라니가시아메바로 재동정되어야 할 것으로 판단되었다. Chang주는 A. hntchetti로, A. mcuritaniensis, A. divionensis와 A. puraAivionenis는 A. rhysodes로 재동정되어야 할 것으로 판단되었다. Neff주는 카스텔라니가시아메바보다는 대식가시아메바와 유전적으로 훨씬 가까웠다. Riboprinting은 임상 및 환경에서 분리되는 가시아메바 분리주의 빠른 동정에도 유용할 것으로 사료된다.
피부관리실을 방문한 서른명의 얼굴 여드름 부위로부터 30주의 P. acnes를 분리하였다. 이들 균 주들을 형태학적, 생화학적 특징 등을 조사하여 P. acnes로 동정하였으며, 분리된 균 주들간의 생화학적특징은 유의한 차이를 나타내지 않았다. 생물학적 균 주 분류(biotyping)한 결과 comedone을 나타내는 여드름증상으로부터 23주의 biotype I, 구진(papule) 여드름증상으로부터 1주의 biotype II, 구진과 농포의 여드름증상으로부터 5주의 biotype III, 구진(papule) 여드름증상으로부터 1주의 biotype IV가 각각 분리되었으며, biotype V형의 균 주는 분리되지 않았다.
미국 오하이오주 남서쪽에 위치한 Seip 토루군(100 B.C.-A.D. 500경)의 출토유물들에 대하여 현미경으로 관찰되는 인피섬유의 형태학적 손상을 분석하였다. 형태학적 손상이란 외부로부터의 물리적 혹은 화학적 요인에 의해 섬유은 표면과 내면에 발생하는 형태변형을 말한다. Seip직물에 포함된 인피섬유의 형태학적 손상 정도는 본 연구를 위해 제작된 인피섬유손상지로(IBFM)의 점수의 합으로 나타내었다. Seip직물들은 육안으로 보았을 때 우선 숯과 같이 검은 색을 띄고 있는 직물들과 그렇지 않은 직물군으로 분류되었는데 발굴보고서에 설명된 시신과 관련 부장품들의 수습상황으로 미루어 볼 때 검게 된 직물군은 부분적으로 하장된 시신의 부장품이었으며 검게 되지 않은 직물군은 일반매장된 시신의 부장품으로 보였다. Seip직물들은 다시 서로 다른 조직에 따라 분류되는 직물군으로 나뉘어 질 수 있었는데 본 연구에서는 이들 중 가장 빈번히 보이는 교차쌍 위사 트와인조직(Spaced alternate-pair weft-twining)으로 만들어진 직물군과 그 밖의 조직으로 되어 있는 직물군으로 나누고 이들을 각각 얼터씨이트(Alternate)와 기타조직(Pooled)으로 명명하였다. 본 연구에서는 Seip직물들 간에 매장법에 의해 손상정도의 차이가 발생했으며 특히 부븐적으로 화장된 직물과 그대로 묻혀진 직물들 간에 섬유손상 정도의 차이가 있었을 것으로 좌고 이를 확인하기 위해 검게된 직물군과 검게 되지 않은 직물군 간에, 그리고 얼터네이트와 기타조직으로된 직물군들 간에 IBFM 점수의 차이가 있는지 조사하였다. 섬유의 형태학적 손상은 광학현미경과 주사전자현미경을 사용하여 분석하였으며 분석에 이용된 총 샘플수는 총 132개였다. 수집된 데이터는 t-test를 이응하여 분석 하였다. T-test의 분석결과 Seip 직물들은 검게된 직물군과 검게되지 않은 직물군 사이에서 유의한 손상 정도의 차이를 볼 수 있었으며 반면에 조직에 따른 분류에서는 유의한 차이를 볼 수 없었다. IBFM의 평군점수를 비교하면 검게된 직물군보다 검게되지 않은 직물군이 더 높은 점수를 나타내어 후자가 더 많이 손상된 것으로 보여졌다. 7개의 손상형태를 독칩적으로 보았을 때 섬유속의 분리정도 (degree of bundle separation) , 횡금(transverse crack) , 그리고 횡선 (transverse striations) 이 검게된 직물군과 검게 되지 않은 직물군 사이에서, 섬유속의 분리정도, 종금(lengthwise striations)과 횡금이 얼터네이트와 기타조직 사이에서 각각 유의한 차이를 보였다.
임상 검체에서 분리된 65개의 사상형 진균을 대상으로 연구하였다. 이 균주들은 형태학적으로 동정이 불가능한 진균, 형태학적으로 유사하여 동정이 까다로운 균주, 종(species) 수준의 동정이 요구되는 균종들이다. PCR과 염기서열분석은 ITS. DiD2, 그리고 β-tubulin 유전자를 표적 부위로 하였고, 증폭된 염기서열은 상동성 분석을 위하여 GenBank 데이터베이스의 알고리즘을 이용하여 분석하였다. 형태학적으로 속 수준의 동정이 가능한 진균은 61.5%이었고, 65주의 염기서열분석으로 62 균주는 속과 종의 동정이 가능하였다. 형태학적 검사와 염기서열분석의 결과, 속과 종이 불일치한 경우 14주(21.5%)이었고, 형태학적으로 동정이 불가능하였던 사례는 11 균주이었다. B. dermatitidis, T. marneffei, 그리고 G. argillacea 등은 염기서열분석으로 국내에서 처음으로 확인하였다. Aspergillus와 같이 흔히 분리되고 성장이 빠른 진균들의 경우에는 형태학적인 검사가 보고시간과 비용 면에서는 매우 유용한 방법이다. 분자유전학적인 검사 방법은 비용과 임상적 중요성 등을 고려하여야 하지만 분자유전학적 검사를 병행하여 신속하고 정확한 결과를 제공할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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