토양으로부터 분리된 섬유소분해 활성이 우수한 균주를 동정하고, 효소의 생산조건, 효소의 분리 및 정제와 정제한 효소의 물리화학적 특성을 검토하였다. 분리된 미생물은 동정을 통하여 Pseudomonas sp. YD-15라고 명명하였고 avicel 1.2%, yeast extract 0.6%, $KNO_3$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.2%, $MgSO_4$$7H_2O$ 0.15%의 배지(pH 8.0)를 사용하여 $30^{\circ}C$에서 $60{\sim}80$시간 배양 하였을 때 최대 효소생산을 보였으며, 배양액으로부터 85% ammonium sulfate 침전, DEAE-Sepharose CL-6B chromatography, Sephadex G-100 gel filtration 과정을 통하여 14%의 수율로 정제도 15.3배의 효소단백질을 얻었다. 정제효소의 최적 작용 pH는 6.0 이었고 pH $5.0{\sim}8.0$ 사이에서 안정하였다. 최적 작용온도는$50^{\circ}C$였으며, $50^{\circ}C$까지는 안정하였다. 효소의 분자량은 약 100,000으로 추정되었으며, 기질인 carboxymethylcellulose(CMC)에 대한 Km 값은 40mg/ml 이었다.
토양에서 분리된 호알칼리성 coryneform bacteria TU-19는 적어도 세종류의 단백질분해효소(Protease I, II, III)를 생성분비하였다. 이 균주의 효소생산과 관련된 배양조건을 조사해본 결과 최적온도 및 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 10.0인 것으로 나타났다. 이틀 배양된 배양액으로부터 이 효소들을 정제하기 위해서 ammonium sulfate fractionation, gel filtration 및 QAE-Sephadex column chromatography 등을 순차적으로 행하였다. 그 결과 이들 세종류의 효소는 SDS-PAGE pattern으로 평가했을 때 single band로 순수 정제되었으며, 각각의 분자량은 120, 80, 45 kDa이었다. 정제된 효소의 특성을 살펴보면 Pretense I과 II의 최적 pH와 온도는 각각 $10.5,\;45^{\circ}C$이었으며, Protease III는 11.0과 $50^{\circ}C$로 나타났다. 또한 이들 세효소는 10 mM PMSF 농도에서 효소활성을 완전히 상실하였으며, pCMB, 1,10-phenanthroline, IAA, EDTA에는 별 영향이 없는 것으로 보아 serine protease의 일종으로 생각된다.
벼 유기재배시 토양양분공급용으로 이용되고 있는 유기자재(금수강산골드)를 대조로 하고 식물성유기 자재(쌀겨팰렛), 동물성유기자재, 식물성과 동물성이 혼합된 유기자재를 질소 성분량(7kg/10a)을 기준으로 하여 이앙 20일전에 전량 기비로 시비하고 경운한 다음 동진1호를 시험품종으로 하여 2년연속 유기 자재와 벼를 재배하면서 일어나는 토양의 이화학적 특성과 벼 생육 및 특성의 변화를 시기별로 조사하였다. 시험 전 토양의 화학성은 전반적으로 유기물은 높고 인산함량은 매우 낮은 조건의 토양이었다. 관행유기자재(금수강산골드)는 20일경에 50% 무기화율을 보였으나, 식물성자재 40~60일경, 동물성자재와 혼합자재(식물성+동물성)는 60~80일경에 47~52% 무기화 정도를 나타내 식물성 자재의 무기화 속도가약 20일정도 빨랐다. 토양 중의 유기물 잔존함량은 식물성자재 > 혼합자재 > 동물성자재 > 관행 순이었으며, 토양 중의 전 질소 잔존함량의 경우 관행유기자재는 처리초기부터 빠르게 감소하는 특성을 보이나, 식물성자재와 혼합 자재는 시비초기와 거의 비슷한 수준을 유지하였고, 동물성 자재는 서서히 감소되는 경향이었다. 토양 물리성은 액상과 공극율 다소 증가되는 경향이었으며 식물성과 혼합유기자재처리구가 컸으며, 토양 유효 입단 형성력에 있어서도 유사한 경향이었다. 벼 수량 특성은 관행유기자재보다 1년차에는 3~9%의 낮았으나, 2년 연속처리를 할 경우 관행유기자재를 처리할 때와 동일한 생산성을 기대할 수 있었다. PME와 $\beta$-Glucosidase의 효소활성은 관행유기자재 < 식물성자재 < 동물성자재 < 혼합유기자재의 순으로 높은 경향을 볼 수 있었다.
토양으로부터 분리한 포도당 이성화효소를 강하게 생산하는 방사균을 Bergey's manual 8판에 따라 동정한 결과 Streptomyces antibioticus 근록의 균주이었다. 본 균의 배양액으로부터 균체를 모아서 해사를 넣고 파쇄 하여 증류수로 추출하고 Mn-처리를 하여 핵단백질을 제거한 후 황산 ammonia 분획침전(0.5∼0.8포화), 수석, DEAE-cellulose column chromatography, DEAE-sephadex (A-50) column chromatography 및 sephadex G-200에 의한 gel filtration을 거쳐 비활성도로 약 380배, 회수율 25% 정도로 분리 정제하였다.
토양으로부터 rutin을 유일한 탄소원으로 생육하는 세균을 분리하여 그 중 rutin 가수분해활성이 높은 MT-57균을 Arthrobacter sp.로 동정하였다. Arthrobacter sp.MT-57에서 수 종류의 rutin 가수분해효소가 확인되었으며 이들 중 rutinosidase를 전기영동상 단일한 효소 단백질까지 정제하였다. Rutinosidase으 분자량은 SDS page와 gel filtration으로 부터 42,000의 단량체로 추정 되었다. 효소반응의 최적 pH와 온도는 pH 7.5와 $45^{\circ}C$였으며, 20분간 열처리하였을 때 $50^{\circ}C$까지 안정하였다.
Alkaline protease 생성능이 강한 Aspergillus fumigatus을 토양에서 분리동정하고, 효소생산조건을 구명한 결과 $30^{\circ}C$에서 3일간 배양하였을 때 최고활성을 나타냈으며 생산된 조효소를 황산암모늄염석, Sephadex G-25, G-150 gel filteration과 DEAE-Cellulose컬럼 chromatography로 정제하여 수율 6.4%, 정제정도 86.13배의 효소를 얻었고 polyacrylamide gel 전기영동에 의해 단일밴드인 것을 확인하였다. 정제효소의 분자량은 63000정도 였으며, 17종의 아미노산으로 구성되어 있고, 그 중 glycine과 glutamic acid가 가장 많고 methionine과 cystine이 가장 적었다.
식물조직을 분해하여 단세포화하는 효소, protopectinase를 생산하는 다수의 미생물을 토양에서 분리하였다. 이들 분리된 미생물의 배양여액에서 얻어진 조효소를 감자조직에 처리하여 단세포화된 감자세포를 확인할 수 있었다. 이들 미생물 중에서 비교적 높은 protopectinase의 효소활성을 보이는 균주를 선택하여 형태관찰 결과로부터 Rhizopus sp.임을 알 수 있었다. 선별된 균주 Rhizopus sp. R2의 배양여액에서 얻어진 protopectinase를 이용하여 감자조직의 단세포화를 시도하여 $40^{\circ}C$, pH 4 하에서 최적의 효소반응 조건을 보였다.
최근 들어서 생물학적 제어 방법의 하나로써 키틴분해 미생물을 이용한 제어 수단이 식물병제어에 일정한 효과가 있는 것으로 보고되고 있다. Fusarium 시들음병을 억제하기 위하여 40kg의 키틴퇴비를 면적이 $7.5m^2$ 인 토양에 정식 7일전 처리하였으며 토마토가 시들음병 증세를 보이기 시작하는 날(정식 후 66일)로부터 시작하여 4번에 걸쳐 시료를 채취하였다. 키틴퇴비 처리구(CTC)의 근권토양의 키틴효소와 ${\beta}$-1,3-glucan 효소 활성은 일반퇴비 처리구 (CC) 토양 보다 항상 높은 값을 나타냈다. 그러나 식물체 뿌리에서 측정된 chitinase, ${\beta}$-1,3-glucanase, peroxidase과 같은 병 관련 효소들은 CNC에서 실험기간동안 증가 추이를 보였다. 실험의 마지막 단계인 정식 후 96일째에는 CTC의 토마토는 CC 와 비교 할 때 25% 낮은 치사율을 나타냈다.
남극 토양생태계 세균의 분포와 세균의 생화학적 특성을 알아보기 위해 King George섬의 세종기지(한국)와 Te-niente Jubany기지(아르헨티나) 주변의 토양 17점을 남극 하계 기간(1989년 2월) 동안 채취하여 종속영양 세균의 수오 채외 효소활성도를 측정하였다. 종속영양 세균수는 시료채취지역과 배양온도가 다른 조건에서 자란 세균의 경우에도 그 평균값이 비숫한 경향을 보이고 있으나 protease는 $4^{\circ}C$에서 자란 세균의 경우 92%로서 특히 높게 나타났다. 배양온도에 따라 매우 변화가 켰으며 산술평균값은 배양온도 $37^{\circ}C$, $25^{\circ}C$, $4^{\circ}C$에서 각각 $2.5\times 10^{4}$, $2.7\times 10^{7}$, $6.9\times 10^{5}$ CFU/$cm^{3}$soil로 나타났다
경남지역 논토양의 글로말린 함량과 미생물 특성과의 관계를 분석하기 위하여 2011년에 20개소를 선정하여 분석한 결과는 다음과 같다. 토양 글로말린 함량은 토양 유기물 함량 (r=0.595, p<0.01) 및 탈수소효소 활성 (r=0.663, p<0.01)과 정의상관 관계를 나타냈다. 또한, 글로말린 함량은 미생물 생체 탄소 함량 (r=0.710, p<0.001) 및 총 세균군집 (r=0.616, p<0.01)과 정의상관을 보였다. 그리고 글로말린 함량은 그람음성 세균의 군집 (r=0.561, p<0.05) 및 cy19:0/18:$1{\omega}7c$ (r=0.487, p<0.05)와 정의상관 관계를 나타냈다. 따라서 논토양에서 글로말린 함량은 지속가능한 친환경농업을 위해 토양 건강성의 지표로 활용할 수 있을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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