토양으로부터 세포외로 $\alpha$-galactosidase를 분비 생산하는 방선균 YB-4가 분리되었으며, 분리균의 배양ㆍ형태ㆍ생리적 특성을 조사한 결과 Streptomyces 속 균주로 확인되었다. 분리균의 배양상등액으로부터 부분정제된 $\alpha$-galactosidase를 조효소액으로 사용하였을 때 para-nitrophenyl-$\alpha$-D-galacto-pyranoside는 pH 6.0과 6$0^{\circ}C$의 반응조건에서 가장 잘 분해되었으며, 조효소액을 pH 4.0에서 pH 10.0범위에서 1시간 이상 방치한 후에도 약 90% 이상의 $\alpha$-galactosidase 활성을 유지하였다. 또한 분리균이 생산하는 $\alpha$-galactosidase는 melibiose, raffinose와 stachyose와 같은 저당류를 가수분해 할 수 있으며 분해산물로 galactose를 방출하는 것으로 보아 $\alpha$-1,6 결합을 분해한 것으로 확인되었다.
The antibiotic-producing Streptomyces strains were isolated from the soils of various localities in Yeang-Kwang and tested for the activity against some of gram positive and negative microorganisms, especially against Pseudomonas aeruginosa. The results are summarized as follows. 1. A total of 1464 Streptomyces strains were isolated from 336 soil samples. Of all the strains tested, 636 strains of the isolates showed antibiotic activity against either gram positive or negative test organisms. And 408 of the 636 strains were strongly active against one or all of those testorganisms. 2. Ninety-three of Streptomyces strains among the active isolates showed the antibiotic activity against Pseudomonas aeruginosa, and 24 of 93 strains showed the strong antibiotic activity against all of the test organisms i.e. Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Salmonella typhi and Shigella jlexneri. 3. Antibiotic-producing Streptomyces strains active against Pseudomonas aeruginosa were isolated from the soil samples taken from vegetable field, paddy field, sandy ground and roadway, but not isolated from the soil taken from dwelling area, grass field and piers.
토양에서 분리된 Streptomyces sp으로부터 cholesterol oxidase의 정제 및 효소학적 특성을 조사하였다. 본 효소의 정제는 50~80% 포화의 황산암모늄 침전 및 cholesterol affinity column chromatography를 통하여 28.3%의 수율로 정제 되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE에서 단일한 밴드를 보였으며 분저량은 약 60,000 dalton으로 추정되었으며, HPLC분석 결과 단일의 peak로 검출되었다. 본 효소의 특성을 검토한 결과, 금속 이온으로 Hg와 Cu의 존재시 크게 저해를 받았고, dithiothreitol 과 mercaptoethanol과 같은 저해제에 의해서 상당히 실활되었다. 본 cholesterol oxidase의 Michaelis 상수는 cholesterol을 기질로하여 Lineweaver-Burk plot분석에서 1.38mM로 추산되었다. 정제효소의 아미노산 조정은 약 416개의 잔기로 추정되며 glycine, alanine, threonine의 함량이 높은 반면, methionine, isoleucine의 함량은 극히 낮았다.
한국의 토양에서 분리한 균 중 bacterial $\alpha$-amylase에 저해효과가 있는 균주를 분리하여 DMC-47 균주라 명명하였고, 이 균주는 Streptomyces 속의 균임을 확인하였다. 이 균주를 옥수수 전분 배지에서 진탕 배양한 결과 4일후에 최대 저해 효과를 나타내었다. 이 균주가 생성한 저해물질은 bacterial $\alpha$-amylase, pancreatic $\alpha$-amylase, salivary $\alpha$-amylase, glucoamylase에 저해효과를 보였고, $\beta$-amylase 에는 저해효과가 없었다.
토양에서 분리, 동정한 Steptomyces sp. GI 32의 glucose isomerase 생산은 sorbitol 1%, yeast extract 0.4%, tryptore 0.6%, 1 mM Fe$_2$(SO$_4$)$_3$의 조성을 가진 배지에서 초기 pH 7.0으로 조절하여 35$^{\circ}C$에서 약 18시간 진탕배양시 효소생산량이 최고로 240 units/mg이었다. 효소는 ammonium sulfate 분획, DEAE cellulose chromatography 등의 과정을 거쳐 부분정제한 결과 3배정도 효소 비활성이 증가하였다. 효소활성의 치적온도는 7$0^{\circ}C$이며, 최적 pH는 8.0이었다. 특히 효소의 열안정성이 7$0^{\circ}C$에서 1시간 가열하여도 전혀 실활되지 않았다.
소나무 숲 토양에서 방선균을 666주 선별한 후 이중 glucose isomerase 생산성이 우수하고 (488U/ml) 40 포도당액의 이성화율이 5%3에 도달하는 TH34 균주를 선별하였다. 이 균주는 세포벽을 구성하는 diaminopimelic acid(DAP), 기균사의 색깔, spiral type의 spore 사슬의 형태, melanoid 색소형성, 탄수화물 이용성 및 전자현미경 사진등으로 미루어 보아 Streptomyces luteogriseus로 동정하였다. 분리 동정한 S.luteogriseus의 발효조건 및 배지조성 등을 검토하여 본 결과 28~$29^{\circ}C$에서 효소생산이 최대이었으며 pH 6.0~8.0의 넓은 범위에서 안정한 효소생산을 보였다.
An Actinomycete strain isolated from Mt. Dea-Dun had a strong antifungal activity. The culture brith produced by isolated strain showed only antifungal activity against fungi with the exception of yeast and bacteria. It was heat stable, dissolved in ehtylacetate. The concentrated antifungal agent showed cytotoxicity against HEP-2 and HeLa as tumor cell line, and showed weak cytotoxicity against VERO 36 as normal cell line. Morphological and physiological characteristics were tested with isolated strain. The spore color of isolated strain was gray. It had a short chain and produced brown colored lytic substance in yeast extract-malt agar. The cell wall of isolated strain was composed of meso-DAP, and we suggested it as genus Actinomadura. In the existing of chemical inhibitor, isolated strain grew on the condition of 0.0001% crystal violet, 0.1% phenol, 0.01% sodium azide and 10% sodium chloride. Carbon utilization of isolated strain was shown that glucose, sucrose, manitol and sodium citrate were well utilized.
토양시료로부터 치아우식원인균인 S. mutans에 대하여 항균력을 나타내는 방선균주를 순수분리하여 분리균주를 공시균주로 하여 항생물질 생성에 미치는 환경인자를 규명하였다. 본 공시균주의 항생물질 생성 최적배지조성은 Bacto-soytone 1%, glucose 1%, NaCl 0.5%, $CaCO_3$ 0.1% 였으며 배지의 초기 pH는 7.0이었다. 또한 항생물질은 $28^{\circ}C$에서 진탕배양시 생성의 최적조건이었으며 본 공시균주는 24시간 유도기를 거쳐 배양 72시간째 항생물질의 생성과 더불어 균의 최대증식도를 나타내었다.
An Actinomycetes strain JB isolated from Mt. Hanla had a strong antimicrobial activity against gram positive bacteria and tumor cell growth inhibition. Especially, it couldn't degrade starch and casein as organic compounds. It was resist on lincomycin and rifampicin. The spore mass of strain JB which was arethrospore was white. DAP of the cell wall was L, L-DAP. Antimicrobial material was heat stable, dissolved in ethyl acetate, and not dissolved in butanol. In the pressnce of 0.1% phenol and 4% sodium chloride, strain JB could grow, but it didn't growth at below $10^{\circ}C$. Strain JB didn't use dextran, sodium acetate and sodium citrate as sole carbon source and L-cystein and L-thereonine as nitrogen source. The filtered broth of strain JB had the antimicrobial activity against gram positive bacteria, especially Staphylococcus aureus (ATCC 65389) and the growth inhibition of tumor cell line.
From 5 forest soil samples, the isolation frequency of oligotrophic Actinomycetes was investigated with nutrient and minimal media. The frequency of soil Actinomycetes by the minimal media. The frequency of soil Actinomycetes by the minimal media of DHV, WA, BA and NA was similar to the value by HV nutrient medium. In addition, different Actinomycetes were isolated from all the media used in this experiment and then their growth were tested on nutrient (Bennett's agar) and minimal media(WA). In consequent, the number of different Actinomycetes from minimal media was 26.1 strains, whereas the number of from nutrient medium (HV) was 26.6 strains. Furthermore, the percentage of facultative and obligate strains among the oligotrophic Actinomycetes was 90% and 10%, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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