국내에 자생하는 장수버섯(Fomitella fraxinea)의 자실체에서 분리한 수용성 다당체의 약리적 효과를 검정하기 위해 본 실험을 수행한 결과는 다음과 같다. 장수버섯 자실체에서 추출한 수용성 다당체는 DEAE-sephadex A-25 column chromatography에 의해 1종의 중성다당체(FF-NP)와 2종의 산성다당체(FF-AP1, FF-AP2)로 분리되었다. 3종의 다당체중 FF-AP1이 $20\;{\mu}g/ml$ 농도에서도 약리적으로 유효한 항보체 활성을 나타내었다. Clonogenic assay에 의한 9종의 인체 암세포에 대한 각 다당체의 저해효과검정에서, FF-AP1은 $500\;{\mu}g/ml$ 농도에서 인체 위암 세포주(Snu-1)에 대해 86%, FF-AP2는 동농도에서 인체 후두암(Hep-2)과 구피암(KB)에 대해 각각 71%와 77%의 생존억제율을 보여주었다. 장수버섯 자실체로부터 열수 추출한 조다당체에 대한 mouse의 급성독성 검정시험결과에서 반수치사량이 5000 mg/kg 이상이었으며, 육안이나 조직학적 관점에서 어떠한 이상도 관찰되지 않았다.
인삼을 세절하여 동결건조 시킨 후 가열에 따른 성분변화의 특성을 살펴보고자 가열온도(130, 145, 160, 175, 190$^{\circ}C$) 및 가열시간(10, 15, 20, 23, 30 min)에 따른 중심합성실험계획으로 가열처리 하여 반응표면분석하였다. 그 결과, 가용성 고형분 함량의 경우 가열온도 및 가열시간이 증가할수록 감소하는 것으로 나타났으며 갈색도는 가별온도 및 가열 시간이 증가할수록 증가하는 것으로 나타났다. 또한 산성 다당체 함량, 총 폐놀성 화합물 함량도 가열온도 및 가열시간이 증가할수록 증가하는 것으로 나타났다. 가용성 고형분 함량은 가열온도 146.05$^{\circ}C$ 및 가열시간 18.16 min일 때 최대값 58$\%$로 예측되었으며, 조사포닌 함량은 160.00$^{\circ}C$ 및 가열시간 20.00 min일 때 64.40 mg/g의 최대값으로 예측되었다. 조사포닌 함량은 가열시간에 영향을 많이 받는 것으로 나타났으며, 가용성 고형분 함량, 산성다당체 및 총 페놀성 화합물 함량은 가열온도에 영향을 많이 받는 것으로 나타났다.
This study was carried out to investigate the optimum conditions for extraction of soluble acidic polysaccharides from ginseng marc. Method of carbazole-sulfuric acid was applied to determine the amount of acidic polysaccharides in ginseng marc. The amounts of soluble acidic polysaccharides in water extract of ginseng marc were increased with increasing extraction temperature. The contents of acidic polysaccharides were not significantly different despite the extraction time increasing from 0.5 hours to 6 hours. To estimate the rehydration rate of the freeze dried polysaccharide, the extracted acidic polysaccharide fraction powder was determined the amount of soluble acidic polysaccharides by carbazole-sulfuric acid method again. The rehydration rate of acidic polysaccharides from water-extract of red ginseng marc at room temperature was 100%. On the other hand, the rehydration rate of acidic polysaccharide of red ginseng marc at boiling temperature was about 50%. The rehydration rate of acidic polysaccharides from water-extract of white ginseng marc at room temperature was 50%. The rehydration rate of acidic polysaccharide of red ginseng marc at boiling temperature was about 40%. The rate of soluble acidic polysaccharide of Red Ginseng is higher than that of White Ginseng. We can find out the maximum extraction method of soluble acidic polysaccharide from ginseng marc.
Toxohorome-L is a lipolytic factor found in ascites fluid of sarcoma 180-bearing mice and of patients with hepatoma. A substance that inhibited the lipolytic action of Toxohormone-L was isoialed from red ginseng powder. This substance had a pectin-like o 1, 4-pollrgalacturonan backbone with some acetoxyl groups, and so was an acidic polysaccharide. It inhibited Toxohormone-L-induced lipolysis in a dose dependent manner at concentrations higher than 10 $\mu\textrm{g}$/ml.
This study was devised to observe the inhibitory effect of 7 kinds PG(PG1, PG2, PG3, PG4, PG5, PG6 and PG7) and of 5 kinds PG4(PG41, PG42, PG43, PG44 and PG45) of the acidic polysaccharide fraction from Korean red ginseng on a lipolytic action of Toxohormone-L. Toxohormone-L is a lipolytic factor, found in ascites fluid. of sarcoma-180 bearing mice and of patients with hepatoma. A substance that inhibited the lipolytic action of toxohormone-L was isolated from red ginseng powder. This substance was an acidic polysaccharides In vitro test showed that the inhibitory effect of PG4 and PG43 fraction of the lipolysis by Toxohormone-L was highest percent among other treatments at concentration of 50, 100, 200, 500 and 1,000ug/ml of reaction mixture. And total inhibitory activity(units) of PG1 and PG4, and PG4 s was highest among other treatments at the same concentration.
Toxohormone-L is a lipolytic factor, found in ascites fluid of sarcoma 180-bearing mice and of patients with hepatoma A substance that inhibited the lipolytic action of Toxohormoue-L was isolated and purified from Korean red ginseng powder. This substance had a pectin-like $\alpha$-1,4-polygalacturonan backbone with some acetoxyl groups, and so was an acidic polysaccharide It inhibited Toxohormone-L Induced liploysis in a dose dependent manner at concentrations higher than 10 Ug/ml. Purified acidic Polysaccharide yield(PG4-3 and PG4-4 fraction) was about 0.03%. And also pectic acid that inhibited the lipolytic action of Toxohormone-L.
인삼원료삼의 안정적인 공급을 위하여 인삼의 기내배양에 의하여 생산된 캘루스 및 모상근으로부터 인삼사포닌, 지방산, 산상다당체, 페놀성화합물 및 유기산함량을 조사하였다. 인삼사포닌의 경우에는 캘루스에 비해 모상근에서 훨씬 많았으며 모상근 세포주간에는 약 10mg/g로 유사한 경향을 보였다. 포화지방산은 인삼 캘루스에서 높은 반면 모상근의 경우에는 불포화지방산이 오히려 많거나 비슷한 경향을 보였다. 특히 인삼 캘루스에서는 palmitic acid가 많이 존재하였으며, 인삼 모상근의 경우에는 불포화지방산인 linoleic acid가 캘루스의 5배 이상 많은 검출되었다. 산성 다당체와 페놀성화합물은 기내 배양한 인삼 캘루스 조직에서는 거의 동량으로 존재하였으나, 인삼 모상근의 경우에는 세포주에 따라서 많은 차이를 나타내었다. 특히 HR-2같은 경우에는 산성 다당체보다는 페놀화합물이 $2.26\%$로 산성 다당체보다 2배 이상 많이 존재하였는데 반하여, HR-3 인삼 모상근의 경우에는 산성 다당체가 $1.64\%$로 페놀화합물보다 4배 이상 존재하는 것으로 분석되었다. 인삼 모상근세포주와 캘루스의 유기산은 모상근 세포주가 34.64 mg으로 가장 많이 존재하는 것으로 조사되었다.
Inonotus obliquus 균사체의 액상배양을 통한 항당뇨효능의 단백다당체 대량생산 배양공정을 개발하기 위한 첫 단계로 고생산성 균주의 개발을 신속하게 수행하기 위한 방법을 개발하였다. I. obliquus는 균사체로 성장할 때 포자를 형성하지 못하므로 단일 세포를 획득하기 위해서는 원형질체들을 회수하여 이로부터 성장 능력과 단백다당체의 생산성이 높은 우량균주를 선별하여야 한다. 본 연구에서는 이러한 균주개량 공정 중 특별히 장기간의 배양 시간이 요구되어 신속한 균주개발 시 가장 큰 장애 요인으로 작용하는 고체성장배양 단계의 문제점을 극복하고자, 고체배양 환경의 최적화에 대한 연구를 중점적으로 수행하였다. 고체성장배양 시 균사체 성장에 효능이 탁월한 배지성분을 선별하기 위해 우선 Plackett-Burman design 실험을 통해서 유의성 높은 배지성분을 찾아내었고, 이에 근거한 부분요인설계법 fractional factorial design, FFD) 실험을 통해 배지성분 상호간의 관계를 분석 할 수 있었다. 또한 이 FFD 실험결과에 근거해서 설계한 최급상승법 (steepest ascent method, SAM) 실험방법을 적용한 결과, 고체성장배양 시 균사체 성장환의 직경이 기존의 MA 배지와 비교해서 약 41% 증가했을 뿐만 아니라 균사체의 밀도도 크게 향상된 배지조성을 확립 할 수 있었다. 또한 SAM 연구결과를 바탕으로 최적의 배지조성을 확립하고자 각 배지성분의 최적농도를 통계적으로 더욱 정밀하게 조사하는 반응표면분석법 (response surface method, RSM) 실험을 수행하였다. 그 결과 최적고체성장배지의 성분과 농도는 glucose 25.61 g/L, brown rice 12.53 g/L, soytone peptone 12.53 g/L, $MgSO_4$ 5.53 g/L, agar 20 g/L인 것으로 최종 결정되었으며, 이 조건에서 13일 동안 배양시 균사체의 직경이 약 82 mm 정도에 이르는 것으로 나타났다. 이 결과는 상기의 SAM 실험에서 최적농도로 제시한 배지조성과 매우 유사한 것으로 확인되었는데, 이로부터 최종적인 RSM 실험을 수행하기 전에 최적 농도의 근사치를 추정하기 위해서 수행한 SAM 실험이 매우 효율적이었음을 확인할 수 있었다. 또한 배지 최적화 결과 고체성장배양에서의 성장속도의 증가로 인해 배양기간을 기존의 15~20일에서 8일로 획기적으로 줄일 수 있게 되어, 짧은 시간 내에 대규모 균주 선별과 각 균주의 단백다당체의 생산성 확인이 가능하게 되었다.
홍삼으로부터 홍삼알콜 추출물을 제조하고 부산물로 생성된 홍삼추출잔사로부터 한외 여과를 이용하여 홍삼산성다당체(RGAP, red ginseng acidic polysaccharide)를 대량으로 분리할 수 있는 방법을 개발하였다. 본 방법으로 홍삼추출잔사로부터 분리된 RGAP의 수율은 20.9%이었고, RGAP로부터 지표성분인 활성성분(GFP)의 분리수율은 39.4%이었다. 분리된 RGAP는 macrophage에 의한 NO(nitric oxide)를 생성하여 암세포를 사멸시키는 것으로 나타났다. RGAP를 BALB/c 마우스에 복강투여한 후 분리된 복강 macrophage를 P815 암세포(mastocytoma)와 함께 배양하였을 때 배지내의 NO 농도는 대조군에서 4.3 $\mu\textrm{m}$이었으나, RGAP 100, 300 mg/kg 투여군에서는 각각 9.8 및 25.3$\mu\textrm{m}$로 증가하는 경향을 나타내었다. 아울러 암세포인 P8l5세포의 사멸율도 정상대조군일 경우 7.3%이었으나 RGAP 100, 300 mg/kg 투여군에서는 각각 22.7 및 31.8%로 증가하는 경향을 나타내었다. RGAP을 2M의 TFA로 10$0^{\circ}C$에서 1시간 가수분해한 후 당 표준품과 TLC로 비교한 결과 당 표준품과 Rf치 및 발색 색깔이 일치하는 4개의 spot, 즉 rhamnose(Rf 0.78, 노란색 ), glucose(Rf 0.61, 녹색), galactose(Rf 0.56, 녹색), glucuronic acid(Rf 0.36, 황갈색)를 관찰할 수 있었다. 가수분해된 RGAP 분해산물을 Gl(glucose)부터 G7(maltoheptaose)까지의 당류와 함께 TLC를 행한 결과 진한 색상을 나타내는 spot은 Rf 0.56~0.61로 G2(maltose, Rf 0.46) 이상의 단당류(monosaccharide)인 것으로 나타났다. RGAP의 일부 이화학적 특성을 조사한 결과 pH는 4.74, 건조감량은 4.72%, 조단백질 함량은 3.30%, 회분은 4.74%이었고 중금속인 Pb는 2.30 ppm이었다.
Sarcoma 180 암세포를 이식한 마우스에서 면역조절 작용을 갖는 홍삼산성다당체 (RGAP)를 항암제 cyclophosphamide (CY)와 병용투여한 결과, RGAP (100 mg/kg)와 CY (3 mg/kg)의 병용투여는 고용량의 CY (10 mg/kg) 단독투여보다 강한 항암작용을 나타내었다. 또한 RGAP (100 mg/kg)과 CY (10 또는 20 mg/kg)과의 병용투여는 CY의 단독투여보다 LL/2 폐종양을 보다 강하게 억제하였다. RGAP (100 mg/kg) 와 5-fluorouracil (5-FU) (2.5 mg/kg)을 병용투여하였을 때도 sarcoma 180 암세포를 이식한 마우스에서 5-FU 단독투여군에 비해 현저한 항암시너지 효과를 나타내었다. LL2 폐 종양에 미치는 결과에서도 RGAP (100 mg/kg)와 5-FU (5 또는 10 mg/kg) 병용투여군은 항암제 단독투여군보다 강한 항종양 효과를 나타내었다. 이상의 결과로부터 RGAP는 항암제 CY 또는 5-FU와 병용투여시 sarcoma 180 및 LL/2 폐종양에 대해서 저용량 항암제의 사용으로 고용량의 항암제 사용에서와 유사한 항암효과를 나타낼 수 있어서 항암효과를 극대화 시킬뿐만아니라 항암제 사용에 의한 면역독성과 같은 부작용을 경감시킬 수 있는 항암치료 보조제로서의 사용가능성을 제시하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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