연구 시설에서 사육 중이던 4주령 수컷 돼지가 아무 전구 증상 없이 폐사된 상태로 발견되었다. 이 돼지는 이종 장기 이식 연구를 위하여 체세포 핵이식 후 대리모로부터 출산하였다. 핵 이식을 위한 난소는 연구시설 밖의 개인 양돈장에서 채취하였다. 병리조직학적으로 돼지의 심장에서는 림프구, 큰포식세포 및 다핵거대세포의 침윤, 심근 괴사 및 섬유화를 특징으로 하는 다병소성에서 연결성의 육아종성 심근염이 관찰되었다. 림프장기에서는 심한 림프구의 소실과 조직구 또는 다핵세포의 침윤을 보이고 있었다. 면역조직화학염색을 통하여 심장의 괴사된 심근세포, 큰포식세포 및 다핵거대세포와 림프 장기의 림프구소실 영역에서 큰포식세포 및 다핵세포에서 돼지 써코바이러스 2형(PCV-2)의 항원이 검출되었다. 유산 또는 사산된 돼지에서 PCV-2와 관련된 번식장애에서는 심근염이 자주 발생하는 상황이며, 이와 유사한 병변이 PCV-2에 감염된 본 증례의 4주령 돼지에서도 관찰되었다. 이 돼지에서 PCV-2의 감염은 양돈장에서 채취한 난소에 본 바이러스가 오염 또는 감염되어 발생한 것으로 사료된다.
양돈산업에 있어 돼지 써코바이러스 2형(PCV2)의 복합감염으로 인한 이유자돈의 질병 피해가 막대하다. PCV2 감염에 대한 숙주의 민감도는 상이한 것으로 알려져 있으며, 따라서 숙주의 민감도를 구분하는 것은, 이를 이용한 숙주의 저항성 향상 연구에 필수이다. 본 연구의 목적은 이유자돈군의 혈액 내에서 PCV2 바이러스에 대한 숙주의 민감도를 구분 짓고 구명하는데 있었다. 본 연구에서는 자연적으로 바이러스에 감염된 10주령의 이유자돈군으로부터 혈청을 채취하여 PCV2 바이러스량과 항체가를 측정하고 혈구분석을 실시했다. 또한, 측정된 PCV2 바이러스량과 항체가를 기준으로 자돈군 내에서 저항성군과 민감성군을 선정하였고, 통계분석결과 저항성군에 비해 민감성군에서 백혈구 수가 현저히 줄어든 것을 확인하였다. 본 연구를 통해서 PCV2 감염에 대한 돼지의 민감도를 구분짓기 위한 PCV2 바이러스량과 항체가를 이용한 복합기준을 제시할 수 있었으며, 이유자돈군의 PCV2 관련 질병저항성 및 백혈구감소증을 확인할 수 있는 방법을 마련하였다.
Porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) are known as significant immunosuppressive viruses in pigs. In this study, we investigated the correlation of PCV2 and PRRSV in enteric lesions of porcine salmonellosis. A total of 64 cases were classified into four pig groups as group A (24 cases, S. Typhimurium), group B (11 cases, S. Typhimurium+PCV2), group C (16 cases, S. Typhimurium+PRRSV) and group D (13 cases, S. Typhimurium+PCV2+PRRSV). Comparing with group A, ulcerative enteritis in large intestine was little more prevalent in the PCV2 infected pigs in group B and D. And lymphoid depletion in gut-associated lymphatic tissue (GALT) of large intestine was also detected in PCV2 positive group B (36.4%) and D (30.8%). According to the results of immunohistochemistry (IHC), PCV2 antigens (83.3%) were more prevalently distributed in the intestinal lesions of porcine salmonellosis than PRRSV antigens (10.3%). PCV2 were also detected in the lymphoid depleted GALT of the large intestine from 7 of the 8 pigs (87.5%), but PRRSV were not found in all cases. It may explain that PCV2 can play a certain immunological role to enhance secondary bacterial infection in porcine alimentary tracts.
Porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) have been suspected to have immunosuppressive effects on pigs. To investigate the correlation between these virus infection and the lesions of lymph nodes including sub-mandibular and inguinal lymph node, 44 pigs (PCV2 single, n = 14; PRRSV single, n = 10; PCV2/PRRSV, n = 14; negative control, n = 6) were examined by histopathology and immunohistochemistry. Histopathologically, granulomatous lymphadenitis characterized by lymphoid depletion with histiocytic cells infiltration was observed in PCV-2 single and PCV-2/PRRSV group. Immunohistochemically, there were significant reduction of B and T lymphocytes in lymph nodes of these groups, while the number of macrophages was increased. In only PRRSV infected group, germinal center hypertrophy and lymphoid necrosis were observed. Immunohistochemically, the number of CD3+ T lymphocytes was slightly increased. Severe lymphocytic depletion in PCV-2 infection-related lymph nodes might be associated with producing immunocompromised state in pig. Comparing with PCV-2 infected group, PRRSV produced minor effects on the changes in immune cell population in the lymph nodes of pigs. PRRSV may increase susceptibility of the disease in pigs by disruption of the first defense lines in target organs, such as the alveolar macrophages in lungs.
The purpose of this study was to evaluate the effect of a subsequent infection of PCV2 on piglets with PEDV. The results obtained were as follows: Antibodies against PCV2 and PEDV were detected at 24, 36, 48, 60 and 72h postinfection. And the antibody titers of alone infections with PEDV were gradually reduced and increased from 60 hpi to 72 hpi. Whereas, the antibody titers of dual infections with PCV2 and PEDV were gradually reduced all the time. PEDV antigens were detected at 24, 36, 48, 60 and 72 hpi, being seen almost exclusively in feces and small intestines from PEDV-infected piglets and PCV2-coinfected piglets. The detection rate of PEDV in feces and jejunum tissues by RT-PCR were 94.9% and 91.1% in dual infections and 87.1% and 83.6% in alone infections with PEDV, respectively. In dual infected piglets, significantly more PEDV antigens were detected in the feces and small intestines tissues at 24 hpi (P<0.05) than in the same feces and tissues of the alone infected piglets. Thereafter, at 72 hpi significantly more PEDV antigens (P<0.05) was detected in the jejunal tissues of the dual infected piglets with than of alone PEDV-infected piglets. The detection rate of PEDV antigen in the duodenum, jejunum and ileum by IFA were 91.3%, 91.3% and 83.3% in dual infected piglets and 75.0%, 83% and 75% in alone infected piglets, respectively. Intense and specific fluorescence signals were more often seen within jejunal villous enterocytes in dual infected piglets than alone infected piglets.
The purpose of this study was to evaluate the effect of a subsequent infection of PCV2 on piglets with PEDV. In clinical signs, the signs observed in dual-infected with PEDV and PCV2 piglets and alone infected with PEDV piglets ranged from diarrhoea to vomiting and dehydration. Dual-infected piglets developed signs of anorexia, vomiting and watery diarrhoea within 12 hpi. Nevertheless alone -infected piglets caused pasty diarrhea at first. In mortality, dual infections showed 25%, but alone -infections showed 8.3%, respectively. In gross findings, piglets dual-infected with PEDV and PCV2 appeared the severe findings of congestion, distension of lumen, milder curdes of undigested milk in stomach than those of single-infected piglets. In histopathological findings, piglets of dual-infection group appeared the more severe findings of villous atrophy and fusion, congesion, exfoliation, vacuolation, squamation, loss of cilia and proliferation of crypt. Significant (P<0.05) decrease in VH:CD ratio in dually infected piglets compared to piglets from alone-PEDV infections. In immunohistochemical findings, strong hybridization signals in dual-infected piglets observed moderate to severe villous atrophy or vacuolation with positive cells arranged continuously over the villi. In the lumen, exfoliated enterocytes were strongly positive in dual-infected piglets. A number of PEDV-positive cells in dual-infected pigs were significantly higher than that in alone PEDV-infected piglets.
Porcine circovirus (PCV) is a small, nonenveloped virus that contains a single-stranded circular DNA genome of about 1.76 kb and belongs to the family circoviridae. The PCV-2 has been incriminated as the cause of post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) , an emerging disease in pigs. In the present study, a PCR assay was applied to detect PCV-2 in tissue samples. The presence of PCV-2 antigen in the porcine tissues was confirmed by indirect immunofluorescence (IIF) with PCV-2 specific monoclonal antibodies. And then DNA extracted from PCV-2 positive tissues was used as a template. One oligonucleotide primer suitable for PCR was selected from a published PCV-2 sequence (Genbank). Amplified PCR product was detected the same fragment lengths of 416 bp as a control. Based on these results, it was suggested that the PCR is a simple and sensitive method for support diagnostic purposes.
From 2006 to 2009, 50 pigs suspected of enteritis associated with porcine circovirus type 2 (PCV-2) (EAPC) were collected. Gross and histopathologic examinations and immunohistochemistry (IHC) were performed on the small intestine of 50 pigs. The pigs with EAPC were concentrated in grower pigs (68%), and diarrhea (84%) was the most common clinical sign. Grossly, the walls of the small intestine were thickened, and mesenteric lymph nodes were enlarged. The histopathologic features in the small intestine with EAPC were characterized by lymphoid depletion, histiocytic infiltration, and formation of basophilic grape-like inclusion bodies and multinucleated giant cells in gut-associated lymphatic tissue (GALT) and lamina propria. According to IHC, PCV-2 antigens were more intense and distributed widely in GALT (98%) than lamina propria (82%) of the small intestine. Co-infection with other enteric pathogens was detected in 26 pigs (52%). Twenty-four pigs (48%) were confirmed to be a PCV-2 single infection. Collectively, infected PCV-2 in the small intestine may induce an immunosuppressive status of individuals and then allow secondary co-infections in the digestive system. This study shows that PCV-2 can induce diarrhea and enteric lesions in pigs without a co-infection of other enteric pathogens.
The purpose of this study was to apply a nested-polymerase chain reaction (nPCR) assay to detect and differentiate PCV 2a and PCV 2b. The compared with nPCR and one-step PCR and nPCR showed more sensitive in the detection of PCV-2 from tissue and blood samples. The total of 52 tissue samples was collected from postweanning pigs from 2006 to 2010. All tissue samples showed positive for PCV-2 in one-step PCR and nPCR, followed by the nPCR in order to identify the genotypes of PCV-2. 2 samples (3.8%) showed positive for PCV 2a, and 35 samples were positive for PCV 2b (67.3%), 15 samples (28.9%) were positive the dual genotypes. In addition, 42 blood samples which were collected from the 5 different swine farms were compared figure out the detection rates of nPCR and one-step PCR. The PCV 2 was positive by one-step PCR in 21 samples (50.0%) and nPCR was positive in 37 samples (88.1%). The PCV 2 genotypes in blood samples and 32 samples (76.2%) were positive for PCV 2b and none were positive for PCV 2a, 5 samples (11.9%) were positive for dual genotypes. These results suggest that the nPCR is very efficient for genotyping blood samples and differentiating the genotypes of PCV-2 from field samples.
In order to obtain the genetic information of the Korean isolates of porcine circovirus 2 (PCV2), complete genomes of five isolates from Korean PCVD weaned pigs with wasting syndromes were sequenced and compared with those of other published PCV2 isolates. Of the five PCV2 isolates, four (1767 nucleotides) were classified into PCV2b, and one (1,768 nucleotides) was PCV2a. Moreover, it appeared that PCV2b is now the dominant genotype circulating in Korea herds. Total complete genomes of four PCV2b isolates shared $99.1{\sim}99.4%$ nucleotide sequence homology each other, and were only $95.4{\sim}96.2%$ similar to one PCV2a isolate. ORF2 genome of four PCV2b isolates shared over 99% nucleotide sequence and deduced amino acid sequence identity to each other. Nevertheless, those were much divergent with the PCV2a isolate of this study and ranged from $92.3{\sim}92.7%$ nucleotide homology and $91.9{\sim}92.3%$ deduced amino acid sequence homology, respectively. The amino acid sequence alignments of the putative capsid protein identified three major regions of amino acid heterogeneity at residues $59{\sim}91$, $121{\sim}136$ and $190{\sim}210$. Two of those correspond with dominant immunoreactive areas. Phylogenetic analysis based on the complete genome of PCV2 isolates showed that four PCV2b isolates of this study existed the closest relationship with European strains (Netherland, UK and France). One PCV2a isolate was closely related to Japan and North America strains.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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