• 제목/요약/키워드: 단백질 동정

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제주 조간대로부터 단백질 가수분해효소를 생산하는 세균의 분리 및 동정 (Isolation and identification of protease-producing bacteria from the intertidal zone in Jeju Island, Korea)

  • 문영건;수브라마니안 다라니다란;김동휘;박소현;허문수
    • 미생물학회지
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    • 제51권4호
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    • pp.382-388
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    • 2015
  • 단백질가수분해효소를 생산하는 11개의 세균들은 유기 생물체의 외부 표면 서식하며, inorganic materials는 제주도 조간대로부터 수집되었다. 시료들은 냉동 상태로 실험실로 옮겨졌으며, 멸균 해수와 1% skim milk가 들어가 있는 Zobell plates에서 배양시켰다. 다음 clear zone이 나타난 11개의 균주들은 단백질분해효소를 생성하는 세균으로서 선택되었으며, 각각의 균주들은 16S rDNA을 기반으로 동정하였다. 분석결과, Psedoalteromonas속 해양 세균 JJM125, JJM129, YG47과 YG49, Microbulbifer속 JJM122, Vibrio속 YG51, YG52, YG62, YG63, Firmicutes문과 Bacillaceae강에 속하는 JJM129, YG65로 나타났다. 따라서, 본 연구에서는 단백질분해가수효소를 생성하는 세균들을 다양한 생명 공학 응용프로그램과 함께 새로운 다양성의 개발 및 이용이 가능할 것이다.

납두제조중(納豆製造中)의 단백질(蛋白質), Peptide 및 AminoAcid의 변화(變化)에 관(關)한 연구(硏究) (Studies on the Changes of Protein, Peptide and Amino Acid During Natto Preparation)

  • 김수영;김재욱
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제8권
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    • pp.11-20
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    • 1967
  • 증자대두(蒸煮大豆)에 납두균(納豆菌)(Bacillus subtilis Natto 492-2)을 접종(接種)하고 $38^{\circ}C$에서 발효(醱酵)시키면서 매(每) 10 시간(時間)마다 시료(試料)를 채취(採取) 처리(處理)하여 납두(納豆) 제조과정중(製造過程中)에 일어나는 단백질(蛋白質)의 변화(變化)와 peptide 및 amino acid의 생성양상(生成樣相)에 관(關)하여 다음과 같이 결과(結果)를 얻었다. 1. 증자대두(蒸煮大豆)의 불용성(不溶性) 단백태(蛋白態) 질소(窒素)가 84%에서 발효(醱酵) 50 시간(時間)에 44%로 감소(減少)하였고, 수용성(水溶性) 단백태(蛋白態) 질소(窒素)는 약간(若干)의 증가(增加)를 했지만, peptide, amino acid 및 ammonia 태(態) 질소(窒素)가 8%에서 45%로 증가(增加)하여 단백질(蛋白質)의 가수분해(加水分解)가 현저(顯著)하였다. 2. 납두균(納豆菌)에서 분비(分泌)된 효소(酵素)에 의(依)해 분해(分解)된 peptide 및 amino acid으로 분자사별(分子篩別)한 결과(結果), 대체(大體)로 A.P.L.이 작은 저급(低級) peptide가 많이 생성(生成)됨을 알 수 있으며 발효(醱酵) 30 시간(時間) 이후(以後)에는 이전(以前)보다 단백질(蛋白質) 분해(分解)가 미약(微弱)하게 일어나면서 비교적(比較的) 큰 분자(分子)의 peptide 분해(分解)가 주(主)로 일어나 저급(低級) peptide 및 amino acid 생성(生成)이 많았다. 3. 분자사별(分子篩別)한 X-16 fraction을 시료(試料)로하며 paper chromatography에 의(依)한 amino acid 및 peptide를 동정(同定)한 결과(結果), 16종(種)의 amino acid와 그종(種)의 unknown amino acid가 동정(同定)되었는데, 이들 중(中) phenylalanine은 발효(醱酵) 10 시간(時間) 이후(以後), methionine은 20 시간(時間), proline은 30 시간(時間) 이후(以後)부터 각각(各各) 출현(出現)하였고, 또 Rf치(値)가 다른 3점(點)의 peptide 중(中) 1개(個)는 처음부터 나타나서 발효(醱酵) 20시간이후(時間以後) 소실(消失)하였고, 다른 그점(點)은 20 시간(時間), 40 시간이후(時間以後)부터 각각(各各) 계속(繼續)하여 출현(出現)하였다.

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당근 세포의 단백질 생합성에 대한 몇가지 식물생장조절제의 영향 (Effects of Some Plant Growth Regulators on Protein Biosynthesis of Carrot Cells)

  • 류기중;박창규;송태철
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제28권3호
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    • pp.187-195
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    • 1985
  • 당근에서 cytokinin, auxin 또는 GA에 의해 조절되는 polypeptide 및 단백질들을 동정하기 위하여, kinetin, BA, IAA, NAA 혹은 $GA_3$가 각각 $10^{-4},\;10^{-5},\;10^{-6}M$인 배지에서 suspension culture 한 당근 callus들의 추출물의 전기영동양상을 조사하였다. 생장조절제를 처리하지 않은 callus에서 15개 polypeptide band가 관찰되었는데, 이들의 분자량은 각각 $18._4,\;20._2,\;24._0,\;34._9,\;35._7,\;37._4,\;40._3,\;42._2,\;44._1,\;44._4,\;49._3,\;55._0,\;56._6,\;58._1$ 그리고 $59._9KD$였다. Kinetin, BA, IAA, NAA 그리고 $GA_3$에 의하여 합성이 촉진되는 것으로 보이는 polypeptide band는 각각 2개, 6개, 1개, 2개 그리고 4개였고, 합성이 억제되는 것으로 보이는 것은 각각 5개, 3개, 4개, 3개, 그리고 2개였다. 분자량 $40._3KD$$42._2KD$의 polypeptide들은 cytokinin류 생장조절제에 의하여 합성이 촉진되는 것으로 나타났고, $44._1KD$의 것은 auxin류에 의하여 합성이 촉진되며 $37._4,\;44._4,\;56._6KD$의 것은 auxin류에 의하여 합성이 억제되는 것으로 나다났다. Kinetin, BA, IAA, NAA 및 $GA_3$처리에서 상대 이동도가 0.56, 0.84, 0.92인 단백질 band들이 증가된 것이 관찰되었으나, 각 생장조절제들에 특유한 단백질은 동정할 수 없었다.

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2배체와 4배체 도라지의 단백질 발현양상 비교 분석 (Proteomic Responses of Diploid and Tetraploid Roots in Platycodon grandiflorum)

  • 김혜림;권수정;;조성우;김학현;문영자;부희옥;우선희
    • 한국작물학회지
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    • 제60권3호
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    • pp.394-400
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    • 2015
  • 본 연구는 2배체와 4배체 도라지 단백질 발현지도 제작과 도라지의 생리활성에 관여하는 메카니즘을 분자적 수준에서 해석하기 위한 기초자료를 얻고자 실시하였다. 2배체 및 4배체 도라지의 단백질의 발현 양상은 배수성에 따른 특이성은 관찰 할 수 없었으며, 모두 분자량 15~100 kDa 크기, pH 4.0~8.0의 범위에 분포하는 것으로 나타났다. 동정된 39개의 단백질 중 2배체에 비해 4배체에서 2개의 단백질이 up-regulated 되었고, 37개의 단백질이 down-regulated 되었다. 단백질을 기능별로 분류한 결과, 산화환원효소의 활성(oxidoreductase activity)기능을 갖는 단백질이 23.7%의 비율로 가장 많았고 다음은 nucleotide binding 기능의 단백질이 15.8%의 비율로 높았다.

바이러스 유래 시스타틴 재조합 단백질의 곤충 면역 및 발육 억제효과 (Inhibitory Effects of a Recombinant Viral Cystatin Protein on Insect Immune and Development)

  • 김영태;엄성현;박지영;김용균
    • 한국응용곤충학회지
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    • 제53권4호
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    • pp.331-338
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    • 2014
  • 시스타틴(cystatin: CST)은 C1A류 시스테인 단백질분해효소에 대한 경쟁적 가역억제자로서 동식물류에서 파파인과 같은 캐셉신을 억제대상으로 작용하게 된다. 바이러스 유래 CST (CpBV-CST1)이 폴리드나바이러스의 일종인 CpBV (Cotesia plutellae bracovirus)에서 동정되었다. 기존 연구는 이 유전자의 과발현이 배추좀나방(Plutella xylostella) 유충의 면역 및 발육을 교란한다는 것을 보여 주었다. 본 연구는 이 유전자의 단백질 기능을 분석하기 위해 세균발현시스템을 이용하여 재조합단백질(rCpBV-CST1)을 형성하여 단백질분해효소에 대한 활성억제효과를 결정하고, 곤충의 면역과 발육에 대한 생리적 억제효과를 분석했다. 이 유전자 번역부위는 138 개 아미노산으로 약 15 kDa 크기의 단백질로 추정되었다. CpBV-CST1이 먼저 pGEX 발현벡터에 재조합되고, BL21 STAR (DE3) competent cells에 형질전환된 후 0.5 mM IPTG로 4 시간동안 과발현되었다. 분리된 재조합단백질은 파파인에 대한 뚜렷한 억제효과를 나타냈다. 이 재조합단백질은 파밤나방(Spodoptera exigua)에 대해서 혈구소낭형성의 세포성 면역반응을 억제하고, 경구로 처리할 때 배추좀나방의 유충발육을 처리 농도에 비례하여 제한시켰다. 이상의 결과는 CpBV-CST1이 해충 밀도 억제에 응용될 수 있음을 제시하고 있다.

조직 괴사 활성을 지닌 Aeromonas hydrophila 의 분비 단백질에 관한 연구 (A Potent Tissue Destructive Activity of Secreted Proteins of Aeromonas hydrophila)

  • 김규리;최윤정;강호영
    • 생명과학회지
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    • 제25권2호
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    • pp.214-222
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    • 2015
  • Aeromonas hydrophila는 수생계에 흔히 존재하는 병원체로서 출혈성 패혈증, 수종, 궤양 등의 질병을 유발한다. A. hydrophila는 효과적인 감염과 다양한 환경에서 적응하기 위해 세포 외 물질(Extracellular products, ECPs)을 분비한다. 본 연구에서 사용한 A. hydrophila CK257은 매우 독성이 강한 균주로 균이 분비하는 ECP 역시 쥐, 토끼, 금붕어를 포함한 동물 모델에게 조직 손상을 일으키며 독성을 보였다. 이러한 괴사 반응을 일으키는 원인 요소를 찾기 위해 ECP의 특성을 분석하였고 그 결과, 원인 요소가 단백질이라는 것을 확인하여 이후 단백질 분리 및 정제에 초점을 맞추어 실험을 진행하였다. 균체를 제거한 배양액 상의 분비 단백질을 얻기 위하여 ammonium sulfate 침전법을 사용하였고, 이후 겔 거르기 크로마토그래피(Gel filtration chromatography)를 이용하여 단백질을 정제하였다. 정제 후 단백질은 다섯 개의 분획으로 나뉘었고 이 중 한 개의 분획이 동물 모델에 괴사와 같은 피부 손상을 일으키는 것을 확인하였다. 괴사 활성을 가진 분획의 단백질 4개의 밴드를 MALDI-TOF 시스템을 통해 분석한 결과, Peptidase M35와 Peptidase M28로 밝혀졌으며 이들은 각각 금속촉매효소(metalloprotease)임을 확인할 수 있었다. Peptidase M35와 Peptidase M28의 단백질 분해 효소로써의 기능을 확인하기 위해 카제인 분해 활성을 확인하였고, 다양한 금속 이온을 처리함에 따라 그 활성이 달라지는 것을 관찰할 수 있었다. 또한 조직에 존재하는 단백질의 한 종류인 엘라스틴(elastin) 분해능 역시 확인해 보았다. 본 연구에서는 A. hydrophila가 분비하는 물질 가운데 조직 괴사 활성을 일으키는 것으로 추정되는 Peptidase M35와 Peptidase M28의 두 가지 인자를 확인하여 동정하였다. 이후 두 가지 인자를 결손 시킨 돌연변이주를 구축하여 조직 괴사에 이들이 직접적으로 작용하는지 확인 할 예정이다.

감마선 조사에 의한 수산 자숙액의 단백질 함량 변화 (Changes of the Protein Contents of Seafood Cooking Drips by Gamma Irradiation)

  • 최종일;김현주;성낙윤;변의백;김재훈;전병수;안동현;조국연;변명우;이주운
    • KSBB Journal
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    • 제23권6호
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    • pp.489-493
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    • 2008
  • 수산가공 폐자원인 수산 자숙액의 산업적 활용 극대화 방안의 연구 일환으로 감마선 조사가 수산 자숙액 내 단백질 성분에 미치는 영향을 알아보기 위해 톳, 문어 및 참치 자숙액을 감마선 조사하여 단백질 정량 및 SDS-PAGE를 진행하였다. Lowry, BCA 및 Kjeldahl 법에 의한 단백질 정량 실험 결과 감마선 조사에 의해 수산 자숙액 단백질의 함량이 증가된 것으로 확인되었다. 또한 단백질 함량은 10 kGy이상에서는 선량에 따라 일정한 값을 가졌다. 이를 토대로 각각의 자숙액을 SDS-PAGE를 이용한 전기영동적 분리정도를 확인한 결과 감마선 조사에 의해 단백질의 응집과 저분자화가 관찰되었다. 이상의 결과를 볼 때 감마선 조사에 의해 수산 자숙액의 단백질 추출 효율이 증가한 것으로 판단되며 추후 감마선 조사에 의해 증가된 단백질의 동정 및 구조변화 등의 후속연구가 필요하다고 사료된다.

김치로부터 분리된 Lactobacillus paraplantarum KNUC25가 만드는 항균 물질의 특성 (Characterization of Antimicrobial Substance Produced by Lactobacillus paraplantarum KNUC25 Isolated from Kimchi)

  • 김마리;이수진;설경조;박유미;김사열
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제37권1호
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    • pp.24-32
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    • 2009
  • 숙성 정도가 오래된 김장 배추 김치에서 분리되어 16S rDNA 염기 서열 분석을 통해 부분 동정된 KNUC25 분리 균주를 단백질 전기 영동 패턴과 생리적 특징 그리고 염기 서열의 유사성을 비교하여 Lactobacillus paraplantarum로 동정하였다. L. paraplantarum KNUC25의 농축 상등액은 그람 양성균과 음성균에 넓은 범위의 항균 활성을 나타냈다. 전자 현미경을 통해 KNUC25가 만들어내는 항균 물질은 세균의 표면에 작용하여 생육을 억제하는 것으로 확인되었다. 항균 활성 물질을 생산하는 최적 온도는 섭씨 30도이고, 높은 온도에서도 항균 활성을 보였으며 단백질 분해 효소에 안정하며 비단백질성 항균 물질일 가능성을 보여주었다.

국내 닭의장풀에서 분리된 오이모자이크바이러스 분리주들의 외피단백질 유전자와 병징 다양성 비교 (Comparative Analysis of Genetic Variation of Cucumber Mosaic Virus from Commelina communis in Korea)

  • 박태선;홍진성
    • 식물병연구
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    • 제24권2호
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    • pp.170-173
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    • 2018
  • 춘천과 충주에서 퇴록현상과 모자이크 병징이 뚜렷한 닭의 장풀을 채집하여 바이러스 분리 동정하였다. 해당 바이러스는 RT-PCR과 RFLP 분석결과 CMV로 동정되었으며, 닭의장풀 CMV 분리주들은 서로 다른 서브그룹으로 존재하고 있는 것이 확인되었다. 외피단백질유전자의 염기서열을 분석한 결과, 각 CMV 분리주들은 CMV-Fny와 비교 하였을 때 CMV-Co와 96.3%, CMV-Co2는 96.3%, CMV-Co3는 95.9%의 유사성을 나타내었다. 또한 기주 반응 분석 결과 닭의장풀 분리주들은 대조바이러스(CMV-Fny)와 달리 C. pepo에서 전신 괴사병징이 특징적으로 나타났으며 Physalis angulata과 N.rustica의 경우 닭의장풀 분리주 간에 병징의 차이를 보였다. 이들 결과를 통해, 국내 닭의장풀에서 분리된 CMV들에서 유전적, 생물학적 다양성이 있는 것으로 확인되었다.

볏짚분해과정 중에 생산하는 Fomitopsis palustris 균체 외 Xylanase의 분리정제 및 효소특성 (Purification and Characterization of Xylanase from Fomitopsis palustris in Rice Straw Culture)

  • 윤정준;이영민;최두열;김영균;김영숙
    • Journal of the Korean Wood Science and Technology
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    • 제35권6호
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    • pp.159-165
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    • 2007
  • 본 논문에서는 갈색부후균 Fomitopsis palustris가 볏짚을 분해하는 과정 중에 생산하는 xylanase를 확인하여 분리 정제하고, 아미노산 서열분석을 통해 동정하였다. 그리고 동정된 단백질의 효소특성을 조사하였다. 분리 정제된 단백질은 SDS-PAGE분석에서 43kDa의 분자량을 나타내었고, 아미노산 서열분석에서는 Glycoside Hydrolase family 10에 속하는 xylanase와 높은 상동성을 나타내었다. 정제효소의 기질에 대한 $K_m$치는 $31 mg/m{\ell}$, $V_{max}$는 252.3 U/mg, $K_{cat}$$2.3{\times}10^4/min$이고, 최적 pH 범위는 pH 4.0~5.0 최대 활성 온도는 $70^{\circ}C$로 밝혀졌다.