기내배양된 아까시나무(Robinia pseudoacacia L.)의 줄기기부에서 발생된 callus로부터 기관발생을 통하여 식물체재분화 시스템을 확립하였다. Callus는 줄기를 BA 또는 NAA가 함유된 MS배지에 배양하였을 때 유도되었으며, BA처리구가 NAA처리구보다 유도율이 높았다. BA가 첨가된 배지에 줄기를 배양하였을 때 기부 callus의 생장은 광조건 및 암조건에서도 잘 증식되었다. 줄기기부에서 발생된 callus는 녹색과 희면서 노란색을 띠는 callus로 분리되어 2.0mg/l BA와 0.5mg/l NAA가 함유된 mMS배지에 배양하였을 때 녹색의 callus로부터 줄기가 재분화되었다. 재분화된 줄기는 생장조절제가 함유되지 않은 ${\frac{1}{2}}MS$배지에서 발근되었다.
도깨비고비와 참쇠고비의 포자발아에서 얻은 전엽체를 균질화하여 배양함으로써 전엽체 개체발생과 포자체 형성과정을 연구하였다. 배양 2주일이 지나자 균질화한 전엽체 세포들이 일차원의 필라멘트 형태를 형성하였고, 4주일째에는 다수의 가지를 뻗은 형태의 전엽체가 출현하였다. 배양 6주일째에 apical notch가 발달된 전엽체가 형성되었는데. 중심부에는 분열조직이 발달되었다. 8주의 배양기간이 지나자 전엽체의 중심부에서 장란기의 형성 없이 무수정생식에 의한 bud가 관찰되었다. 10주일이 지나자 무수정생식에 의한 bud는 포자체로 발달되었는데, flow cytometric 분석 결과 도깨비고비와 참쇠고비 모두에서 전엽체와 포자체는 동일한 ploidy level을 지닌 것으로 확인되었다. 이는 도깨비고비뿐만 아니라 참쇠고비 또한 무수정생식을 하는 양치식물임을 증명하는 결과로 생각된다.
Iris 속 식물인 꽃창포의 번식 특성에서 종자의 잡종성과 적은 분얼로 인한 분주 번식의 어려움을 해결하고 고유한 품종의 특성을 유지하기 위해서는 조직배양을 통한 대량 번식의 구명이 필요하므로 Iris 속 식물의 화기부위 별 절편체를 이용하여 기내 번식에 의한 대량 증식방법을 정립하고자 본 실험을 수행하였다. 자생꽃창포의 화피기부조직, 자방, 소화경, 화경을 치상하여 기내배양환경에 적절한 환경을 구명하고자 조도 2000 Lux에서 일장 (0~24시간), 온도 (10~3$0^{\circ}C$), sucrose (l~9%)의 조건에서 배양하였다. 자생꽃창포의 화기 절편체로부터 유식물체 재분화에 적합한 일장은 16시간의 장일조건이, 온도 조건은 $25^{\circ}C$에서, sucrose 농도는 3%에서 가장 적합한 것으로 나타났으며 특히 화기 부위 중 화피기부조직과 자방 배양에서 높은 신초 형성을 보였다. 화기조직 치상절편체로부터 부정근의 분화는 암상태에서 촉진되어지고 sucrose는 6%에서 뿌리를 생장시키며 1$0^{\circ}C$, 15$^{\circ}C$의 저온에서는 신초,뿌리의 분화가 저조하였다.
수분 후 담배의 배에 중이온 ($^{14}$ N) beam을 조사하여 유도한 variegated담배의 잎 조직을 기내배양하여 재생된 식물체의 특성을 조사하였다. NAA 0.1mg/L 와 BAP 1/0mg/L를 첨가한 MS배지에서 variegated담배의 잎을 배양하면 백색부위에서는 백색 식물체만이 유도되었으나 녹색부위에서는 녹색 식물체가 47.2%, 백색 식물체가 37.4%, variegated식물체가 15.4% 유도되었다. 재생된 녹색 식물체는 자가수분한 후대 (F$_1$)에서 녹색 식물체 1,651 개:백색 식물체 54개로 분리되었다. 또한 variegated 잎에서 재생된 녹색 식물체와 정상주를 정역교배 한 결과, 전부 녹색체가 분리되었다. 이 결과는 variegated잎의 표현형 유전은 최소한 모성 유전이 아님을 보여준다. Variegated잎의 녹색부위를 배양하여 재생된 variegated식물체의 잎을 이용하여 DNA gel blot한 결과, 엽록체 유전자인 psbA, rbcL, 165 rDNA, 23S rDNA의 양은 흰색부위 잎에서 정상주인 녹색 잎과 variegated식물체 잎의 녹색부위 보다 많았다.
여러가지 생장조절제를 첨가한 MS배지에 참나리의 기내배양 소인편과 실생인편을 치상하여 재분화 과정을 알아보았다. 소인편의 부정아 발생은 BAP 1.0mg/L와 NAA 0.1 mg/L을 혼합 처리한 MS배지에서 4주간 배양했을 때 가장 왕성하게 일어났으며, 실생인편의 부정아 발생률은 BAP 0.5mg/L와 NAA 0.1 mg/L에서 4주간 암배양했을 때 가장 높았다. 소인편의 캘러스 발생은 BAP 0.1 mg/L와 2,4-D 1.0 mg/L 혼합 처리구에서 가장 높았다. 또한. 캘러스의 재분화는 NAA 0.5 mg/L와 BAP 0.1 mg/L를 혼합 처리한 MS배지에서 8주간 명배양했을 때 가장 높았다. 뿌리는 MS배지에서 쉽게 발달되었으며, 8주 후 굵고 긴 뿌리를 갖춘 완전한 재분화 식물체로 성장하여 화분에 이식하였다. 참나리의 재분화 전, 후의 염색체 수는 모두 2n=24로서 조직배양에 의한 염색체수의 변화가 없음을 확인하였다.
유채(Brassica napus L. cv. Topas) 소포자 배양에 의한 기내 배발생 과정을 관찰하고 발생과정에 따른 총단백질의 변화 양상을 이차원 전기영동을 통하여 분석하였다. 배양에 적합한 소포자의 발달 단계는 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 형광염색으로 핵상관찰을 통하여 결정하였다. 최초의 소포자 생존율은 63.9%였으며 이러한 생존율의 차이로 배양초기에 소포자의 이형성이 나타났다. 배 발달 경로에 따른 최초의 세포분열은 화분벽 안에서 균등분열로 시작되어 배병의 발달이 선행된 후 배 발생이 일어났으며, 구형, 심장형, 어뢰형으로의 배 발달은 여러 조직의 분화와 더불어 빠르게 진행되었다. 소포자배 발달과정을 치상단계의 소포자, 배양 3일째의 초기 분열세포, 구형 및 심장형배, 어뢰형배, 성숙한 자엽단계의 배 등의 5단계로 나누어 각각 2차원 전기영동을 수행한 결과, 최초 소포자 단계에서 나타났던 23개의 단백질들은 배 달달 경로로 진행됨에 따라 사라지고, 배양 3일째에는 8개의 단백질이 특이적 또는 지속적으로 발현되었다. 배의 발달과 더불어 20∼50 kD 사이에서 총 42개의 단백질이 급격히 나타나거나 또는 후기 배로 진행하면서 점차적으로 발현되었다.
폐쇄형 묘생산 시스템을에서 기내 배양된 감자 소식물체를 이용하여 플러그묘의 생산이 시도(Kim 등, 2002)된 이래 묘소질이 우수한 감자 플러그묘를 생산하기 위한 연구가 지속되고 있다(이 등, 2002, 2003). 묘소질은 정식 후 활착의 용이, 수량 증대 및 품질의 우수성을 제공하는 잠재력으로서, 초장, 절간장, 엽형, 엽색 등과 같은 외적 소질과 광합성속도, 엽록소함량, 근활력 등 내적 소질로 구분된다(Kim, 2002). (중략)
산돌배나무의 기내번식 기술을 개발하고자 유묘의 정아를 재료로하여 기내 식물체 증식에 미치는 생장조절제의 효과를 시험하였다. 정아를 MS 배지에 BA 단독처리 혹은 BA+NAA 혼용처리 결과 대부분 줄기는 1-2개로 유도 되었으며 처리에 따른 차이는 나타나지 않았다. 줄기의 생장과정에서 정아괴저가 흔히 관찰되었으며 다경이 유도되는 줄기에서는 과수화 현상이 나타났고 줄기의 기부에는 캘러스가 형성되었다. 줄기의 증식 과정에서 BA+NAA 처리구에서 약 20%의 자발적인 발근이 이루어 졌다. 다경으로부터 얻어진 줄기는 gelrite 경화배지에서 기내발근이 저조하였으며, 기외삽목시 100 mg/L IBA 처리로 50%까지 발근되었다. 발근묘는 순화 후 정상적으로 생장하였다.
기내에서의 발아 및 형질전환 활성을 지닐 수 있는 백합 (Lilium longiflorum) 화분의 장기보존조건을 얻기 위하여 용매를 이용한 연구를 수행하였다. 화분의 용이한 수집을 위하여 용매를 사용했을 때, petroleum ether, n-heptane, benzene 등의 경우 화분의 기내발아에는 영향을 미치지는 않았으나 수집과 정 후 바로 화분건조 및 냉동 보관함으로써 발아활성을 유지 할 수 있었다. 이들의 활성유지는 또한 vacuum infiltration 및 Agrobacterium을 이용한 형질전환에 따른 외래유전자인 tissue plasminogen activator의 발현에 의하여 확인하였다.
본 연구는 자생나리에 있어서 기내 인편삽의 계대배양이 lily symptomless virus(LSV) 제거에 미치는 영향과 구근 재배 조건이 LSV 재감염에 미치는 영향을 구명하여 LSV 무병주 대량 생산을 위한 기초자료를 제공하기 위하여 실시되었다. 식물재료로는 날개하늘나리(L. dauricum), 말나리(L. distichum), 참나리(L. lancifolium), 중나리(L. maximowitzii)등 자생나리 4종을 사용하였다. LSV에 감염된 식물체의 인편에서 소인경을 얻은 다음 이들 소인경을 5회 이상 계대배양을 했을 때 LSV가 완전히 제거되었다. 특히 날개하늘나리와 말나리에서는 1회 기내 인편삽으로도 LSV를 완전히 제거할 수 있었다. 그러나 기내배양을 통해 생산된 LSV 무병주라도 구근의 재배기간이 길수록, 봄 정식구보다 가을 정식구에서, 소식구보다 밀식구에서, 해안지역보다는 내륙 지역에서 재감염률이 높았다. 그리고 재감염률은 중나리가 날개하늘나리와 참나리보다 높았다. LSV 감염주는 무병주에 비해 엽록소 함량이 낮았다. 따라서 자생나리 구근의 수회 계대배양을 통해 LSV를 제거할 수 있으며, 구근 생산과정에서 낮은 재식밀도, 봄 정식, 해안지역 정식 등 재배적 방제를 통해 LSV 재감염을 억제할 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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