숙주세포 침입을 위한 Anaplasma phagocytophilum의 주요 표면단백질 (Msp)-2과 PSGL-1 (CD162)과의 반응

Anaplasma Phagocytophilum Major Surface Protein (Msp)-2 Directly Binds to Platelet Selectin Glycoprotein Ligand-1 (CD162) Prior to Cell Entry and Infection

Anaplasma phagocytophilum의 주요 표면단백질인 Msp2 (p44)는 세균의 표면에 발현되는 주요한 항원 단백질이다. 본 실험에서는 A. phagocytophilum이 주요 숙주세포인 호중구나 HL-60 세포에 침입하는 데 있어, 세균의 주요 표면 단백질인 Msp2와 숙주세포의 표면에 발현되는 PSGL-1과의 반응 여부를 알아보았다. 그 결과, 재조합 단백질인 Msp2나 순수하게 분리된 A. phagocytophilum이 PSGL-1/FucT IV 유전자가 형질전환되어 PSGL-1이 발현되는 BJAB 세포와는 결합하지만, 순수한 BJAB 세포와는 전현 반응하지 않는 것을 관찰할 수 있었다(p<0.01 & p<0.01). 또한, 순수하게 분리된 A. phagocytophilum과 형질전환된(PSGL-1/FucT IV) BJAB 세포와의 결합이 Msp2의 단-클론항체나 Msp2 재조합 단백질의 농도에 따라 억제됨을 관찰할 수 있었다(p<0.05 & p<0.01). 따라서 A. phagocytophilum의 Msp2가 숙주세포인 호중구의 표면에 발현되는 PSGL-1과 직접적으로 결합하는 부착물질임을 알 수 있었다.

Anaplasma phagocytophilum major surface protein-2 (Msp2 or p44) is the immunodominant outer membrane protein of the bacterium. Recently, we disclosed that Msp2 was an A. phagocytophilum adhesin for binding to host neutrophils and HL-60 cells, probably mediated by attachment to platelet selectin glycoprotein ligand-1 (PSGL-1). In this study, we further elucidated that Msp2 bound to PSGL-1/FucT IV-transfected BJAB but not nontransfected BJAB cells. Binding of recombinant Msp2 or cell (lee bacteria to the surface of PSGL-1/FucT IV-transfected BJAB cells was significantly higher than to nontransfected BJAB cells (p<0.01 and p<0.01). Also, Msp2 monoclonal antibody and soluble recombinant Msp2 as antagonist led to concentration-dependent reductions in A. phagocytophilum adhesln (p<0.05 and p<0.01) to transfected BJAB cells. Thus, we conclude that Msp2 of. A. phagocytophilum acts as an adhesin by which the bacterium binds to PSGL-1 on host neutrophils and myeloid cells.