• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제33권3호
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• pp.398-407
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• 2020

Objective: The Yip1 domain family (YIPF) proteins were proposed to function in endoplasmic reticulum (ER) to Golgi transport and maintenance of the morphology of the Golgi, which were homologues of yeast Yip1p and Yif1p. YIPF3, the member 3 of YIPF family was a homolog of Yif1p. The aim of present study was to investigate the expression and regulation mechanism of porcine YIPF3. Methods: Quantitative realtime polymerase chain reaction (qPCR) was used to analyze porcine YIPF3 mRNA expression pattern in different tissues and pig kidney epithelial (PK15) cells stimulated by polyinosine-polycytidylic acid (poly [I:C]). Site-directed mutations combined with dual luciferase reporter assays and electrophoretic mobility shift assay (EMSA) were employed to reveal transcription regulation mechanism of porcine YIPF3. Results: Results showed that the mRNA of porcine YIPF3 (pYIPF3) was widely expressed with the highest levels in lymph and lung followed by spleen and liver, while weak in heart and skeletal muscle. Subcellular localization results indicated that it expressed in Golgi apparatus and plasma membranes. Upon stimulation with poly (I:C), the level of this gene was dramatically up-regulated in a time- and concentration-dependent manner. pYIPF3 core promoter region harbored three cis-acting elements which were bound by ETS proto-oncogene 2 (ETS2), zinc finger and BTB domain containing 4 (ZBTB4), and zinc finger and BTB domain containing 14 (ZBTB14), respectively. In which, ETS2 and ZBTB4 both promoted pYIPF3 transcription activity while ZBTB14 inhibited it, and these three transcription factors all played important regulation roles in tumorigenesis and apoptosis. Conclusion: The pYIPF3 mRNA expression was regulated by ETS2, ZBTB4, and ZBTB14, and its higher expression in immune organs might contribute to enhancing ER to Golgi transport of proteins, thus adapting to the immune response.

• 생명과학회지
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• 제22권8호
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• pp.1018-1023
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• 2012

Snail은 E-cadherin 발현을 직접 억제하는 zinc finger transcription factor로서, 암세포의 invasion과 metastasis를 촉진시키는 epithelial-mesenchymal transition (EMT)를 유발한다. 또한 Snail은 세포사멸 자극과 세포 생존물질의 제거로 인한 세포사멸에 대해 저항성을 나타낸다. 그러나 이에 대한 분자기작은 잘 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 가장 널리 사용되는 항암제 중의 하나인 5-fluorouracil (5-FU)에 의한 세포사멸에 대한 Snail의 저항성 기작에 대하여 조사하였다. MCF-7 #5 세포주에 doxycycline (DOX)을 처리하여 Snail을 과발현시킨 세포에서 5-FU에 의한 세포사멸이 억제되고 세포괴사가 일어남을 확인하였다. DOX 처리 및 Snail expression vectors인 pCR3.1-Snail-Flg와 phosphorylation-resistant mutant Snail vector인 pCR3.1-S104, 107A Snail-Flg을 이용하여 Snail을 과발현 시킨 경우 ERK1/2의 활성에는 영향을 주지 않는 반면 PTEN 발현억제 및 불활성화, 그리고 Akt/PKB 활성화가 유도됨을 관찰하였다. 또한, Snail은 5-FU에 의한 p53의 발현을 억제한다는 사실을 확인하였다. 따라서 Snail은 prosurvival kinase인 Akt/PKB의 활성화와 p53 억제를 통해 5-FU에 의한 세포사멸을 세포괴사로 전환하는 것으로 생각된다.

• 미생물학회지
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• 제42권4호
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• pp.246-251
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• 2006

사상성 진균인 Aspergillus nidulans에서 유성분화초기단계, 또는 유성분화유도를 위한 세포내 조건 형성과정에 관여할 것으로 예상되는 유전자를 탐색하였다. 선행연구결과를 통해 유성분화를 전혀 하지 못하는 NSD (never in sexual development) 돌연변이주가 분리되어 nsdA, nsdB, nsdC, 그리고 nsdD의 4상 보군으로 동정된 바 있다. 본 연구에서는 이들 유전자 중 nsdC 유전자를 분리하고자 A. nidulans AMAl-Not I Genomic DNA library로 nsdC6 돌연변이균주를 형질전환하여 야생형처럼 유성분화를 할 수 있는 형질전환체를 분리하고 이들로부터 약 10 kb genomic DNA가 삽입된 library DNA를 분리하였다. Genomic priming system (GPS)을 이용하여 nsdC6 돌연변이를 상보하는 유전자의 부분 서열을 확보한 후 전체 DNA 염기서열을 결정하였다. 유전자분석 결과 nsdC는 intron 없이 1,929염기(643개의 아미노산)로 구성된 Open reading frame (ORF)를 가지며, 약 1kb 정도의 비교적 긴 5'-UTR 부위에 2개의 intron을 가지고 있음이 확인되었다. 또한 NsdC polypeptide의 중앙에 $C_2H_2C_2H_2C_2HC$ 형의 zinc finger DNA binding domain과 C 말단 부위에 coiled-coil domain이 존재하였다. nsdC6 돌연변이는ORF의 407 bp와 408 bp사이에 엽기 T가 삽입되어 frameshift가 일어난 것으로 밝혀졌다. 따라서 nsdC6 돌연변이균주는 단지 139개 아미노산만 갖고 있는 결실 단백질이 생산됨을 알 수 있었다.

• 미생물학회지
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• 제47권4호
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• pp.281-288
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• 2011

스트레스 반응에 관여하는 Saccharomyces cerevisiae 전사인자인 Msn2/4의 $C_2H_2$ zinc finger 부위와 아미노산 서열 유사성을 보이는 Aspergillus nidulans MsnA의 하위 유전자 획득을 위하여 msnA 결손 돌연변이체 또는 과발현 균주에서 야생주와 비교하여 차별적으로 발현되는 유전자(Differentially Expressed Gene, DEG)들을 분리하였다. 선별된 DEG들은 염기서열 결정을 통해 해당 유전자들을 동정하였고 이들 중 DEG6는 단당류 수송자(monosaccharide transporter)로 예측된 mstB 유전자로 밝혀졌다. mstB의 발현은 MsnA 과발현에 의하여 증가되었으며 MsnA는 in vitro에서 mstB 프로모터 부위에 직접적으로 결합하였다. MstB는 12개의 막결합 부위를 가지며 A. niger의 고친화성 단당류 수송자(high-affinity monosaccharide transporter)인 MstA와 80%의 높은 아미노산 서열 동일성을 보였다. mstB 결손 돌연변이체의 표현형은 야생주와 유사하였으나 MstB가 과발현된 균주는 낮은 당 농도인 0.1% glucose 배지에서 유성생식 기관인 cleistothecia의 형성이 증가하였다. 이러한 결과는 단당류 수송자인 MstB가 유성분화 과정에서 요구되는 당의 수송에 관여하고 있음을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제17권12호
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• pp.1729-1733
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• 2007

BAK1(Brassinolide insensitive associated receptor kinase 1)는 브라시노스테로이드 생합성 대사관련 신호전달 매체이다. BR 생합성 및 신호전달 돌연변이체는 매우 특징적인 난쟁이 표현형을 보인다. 과채류전용 양액배지인 Sonneveld 양액을 이용하여 양분결핍에 의해 왜성을 나타내는 토마토를 선발하였다. 선발된 토마토에 대해 이차원 전기영동법으로 단백질체를 분석한 결과, 발현차를 나타내는 28개의 단백질 spot이 분리되었다. 분리된 단백질 spot중 현저하게 발현이 억제된 단백질 spot 6개를 선발하여 단백질 서열을 결정하였다. 실험 결과, pI 4.5, 분자량 24 kDa를 나타내는 단백질은 브라시노스테로이드 생합성에 관여하며 왜성 표현형을 나타내는 신호전달 단백질, BAK1으로 동정되었다. BCK1, cystein proteinase, sulfutase, peroxidase, zinc finger factor로 동정 된 나머지 단백질들은 브레시노스테로이드 생합성관련 신호전달기작에 관여하는 단백질로 추정되었다. BAK1을 검정하기 위해 단백질 서열이 결정된 부위로부터 프라이머를 디자인하여 RT-PCR를 수행한 결과, 증폭된 500 bp의 산물이 정상과 발현차를 보여주었는데 이 결과는 양분조절에 의해서도 BAK1의 발현이 조절될 수 있음을 시사한다.

• 한국작물학회지
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• 제64권1호
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• pp.1-17
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• 2019

본 연구는 2017년 CNDH 계통을 이용하여 출수기와 수량을 QTL 조사하여 다음과 같은 결과를 가졌다. 1. 도수분포표에서 QHD, QTPW, QM, QTGW, QY는 정규분포를 이루고 있었다. 2. 출수기 관련 QTLs은 총 1개가 잡혔고, 수량관련 QTLs은 총 9개가 잡혔다. QHD에서는 LOD 2.85가 가장 컸고, QTPW에서는 5.39, QM에서는 3.92, QTGW에서는 4.80, QY에서는 3.7이 가장 컸다. 3. 유전자 분석을 통해, 2, 3, 7, 8, 10번 염색체에서 총58개의 후보유전자를 찾았다. 이 중 수량요소인 QM에서 Rcd1 protein, OsERF3 유전자, QTGW에서 MtN3, Zinc finger protein 유전자, QY에서 OsNAC3 protein 유전자를 발견하였다. 4. 본 연구를 통해 발견된 CNDH 계통 내의 수분함량, 천립중, 수량에 관련된 유전자의 존재여부를 찾아낸다면 조생종, 수중형에 가까운 품종을 개발하는 데 기초자료로 이용될 수 있을 것이라 판단된다.

• 생명과학회지
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• 제32권3호
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• pp.241-248
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• 2022

NF-κB는 염증과 선천성 면역에 중요한 전사인자이며 anti-apoptotic gene을 유도하여 세포의 생존과 발암에도 깊이 연관되어 있으며 많은 신호전달분자 및 신호전달회로와 연결되어있다. 한편, Hsp90는 NF-κB의 활성을 조절한다는 보고가 이루어졌으나 그 구체적인 기전은 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 IKK compelx를 구성하는 인자들의 발현 plasmid를 이용하여 NF-κB의 활성조절에서 Hsp90와 IKKγ의 연관성 및 역할을 연구하였다. 그 결과 Hsp90는 IκBα의 인산화와 분해를 촉진하여 NF-κB를 활성화시켰고, NIK과 LPS에 의한 NF-κB의 활성화는 Hsp90에 의해 더욱 활성이 증가하였다. IKKγ는 Hsp90에 의해 증가된 IκBα의 인산화와 분해를 더욱 촉진함으로써 Hsp90의 NF-κB 활성화 작용을 상승시켰다. 이러한 Hsp90와 IKKγ에 의한 NF-κB의 활성화 현상은 항상 활성화 된 상태를 유지하는 IKKβ-EE mutant를 이용한 검토에서도 입증되었다. 또한 IKKγ의 deletion mutant를 이용한 검토에서 IKKγ의 N-말단에 위치하는 IKKβ 결합부위와 C-말단에 위치하는 leucine zipper 및 zinc finger 부위는 IKKγ와 Hsp90의 NF-κB에 대한 상호협력적 촉진작용에 필요하지 않았다. 또한 Hsp90에 의해 촉진된 세포내 pro-inflammatory cytokine들의 발현은 IKKγ에 의해 더욱 상승하였다. 이러한 결과로부터 Hsp90와 IKKγ의 상호작용을 차단한다면 NF-κB의 과다활성으로 인한 질병의 예방과 치료에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제33권3호
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• pp.183-187
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• 2009

This study analyzed change of proteins in granulosa cells during the porcine follicuar development by proteomics techniques. Granulosa cells of the follicles, of which the diameter is $2{\sim}4\;mm$ and $6{\sim}10\;mm$, were collected from ovary of slaughtered pig that each follicle of diameter $1{\sim}4\;mm$ and $6{\sim}10\;mm$. We extracted glanulosa cell proteins by M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. Proteins were refined by clean-up kit and quantified by Bradford method until total protein was $200{\mu}l$. Immobilized pH gradient(IPG) strip used 18 cm, $3{\sim}10\;NL$. SDS-PAGE used 10% acrylamide gel. After silver staining, Melanie 7 and naked eye test were used for spot analyzation. Increasing proteins in glanulosa cell of $6{\sim}10\;mm$ follicle were 7 spots. This spots were analyzed by MALDI-TOF MS and searched on NCBInr. In results, 7 spots were similar to zinc/ling finger protein 3 precursor (RING finger protein 203), angiomotin, heat shock 60 kDa protein 1 (chaperonin) isoform 1 (HSP60), similar to transducin-like enhancer protein 1 (TLE 1), SH3 and PX domains 2A (SH3PXD2A). Those proteins were related with transfer between cells. Increase of proteins has an effect on follicular development.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제20권7호
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• pp.9.1-9.13
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• 2017

Background: Metal-responsive transcription factor-1 (MTF-1) is a key transcriptional regulator playing crucial roles in metal homeostasis and cellular adaptation to diverse oxidative stresses. In order to understand cellular pathways associated with metal regulation and stress responses in Pacific abalone (Haliotis discus hannai), this study was aimed to isolate the genetic determinant of abalone MTF-1 and to examine its expression characteristics under basal and experimentally stimulated conditions. Results: The abalone MTF-1 shared conserved features in zinc-finger DNA binding domain with its orthologs; however, it represented a non-conservative shape in presumed transactivation domain region with the lack of typical motifs for nuclear export signal (NES) and Cys-cluster. Abalone MTF-1 promoter exhibited various transcription factor binding motifs that would be potentially related with metal regulation, stress responses, and development. The highest messenger RNA (mRNA) expression level of MTF-1 was observed in the testes, and MTF-1 transcripts were detected during the entire period of embryonic and early ontogenic developments. Abalone MTF-1 was found to be Cd inducible and highly modulated by heat shock treatment. Conclusion: Abalone MTF-1 possesses a non-consensus structure of activation domains and represents distinct features for its activation mechanism in response to metal overload and heat stress. The activation mechanism of abalone MTF-1 might include both indirect zinc sensing and direct de novo synthesis of transcripts. Taken together, results from this study could be a useful basis for future researches on stress physiology of this abalone species, particularly with regard to heavy metal detoxification and thermal adaptation.

• Animal cells and systems
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• 제6권3호
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• pp.277-282
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• 2002

Topoisomearse II is an essential enzyme in all organisms with several independent roles in DNA metabolism. Recently, it has been demonstrated that the C-terminal region of topoisomerases II is associated with hetero-logous protein-protein interactions in human and yeast. In this study, we identified that RTP1, a rat homologue of EIA binding protein BS69, is another topoisomerae II interacting protein by yeast two-hybrid screening. RTP1 has an E1A-binding domain and a MYND motif, which are known to be required for transcriptional regulation by binding to other proteins and interaction with the leucine zipper motif of topoisomerase II. The physical interaction between RTP1 and topoisomerase ll$\alpha$ was examined by GST pull-down assay in vitro. The expression level of RTP1 peaks in S phase as that of topoisomerase ll$\alpha$. These results suggest that the interaction between topoisomerase ll$\alpha$ and RTP1 might play an important role in regulating the transcription of genes involved in DNA metabolism in higher eukaryotes.