To develop effective skin whitening agents, we tested natural herbal extracts for their melanogenic inhibitory activities. Sedum samentosum was selected for its inhibitory effect on melanogenesis in B16 melanoma cells. Ethanolic extract of S. samentosum (SSE) was evaluated for antioxidative effect and tyrosinase inhibitory activity of melanogenesis. We investigated the changes in protein level and mRNA level of tyrosinase, tyrosinase related protein (TRP)-1 and TRP-2 by using western blotting and RT-PCR, respectively. SSE showed scavenging activities of free radicals and reactive oxygen species (ROS) with the $IC_{50}$ of 342.7 $\mug/ml$ against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical and 64.69 $\mug/ml$ against superoxide radicals in the xanthine/xanthine oxidase system, respectively. SSE treatment suppressed the biosynthesis of melanin up to 46% and reduced tyrosinase activity up to 51% at 100 $\mug/ml$ in B16 melanoma cells. The tyrosinase activity and tyrosinase expression in B16 melanoma cells were reduced in a dose-dependent manner by SSE. Also, SSE was able to significantly inhibit tyrosinase and TRP-1 expression in mRNA level. These results suggest that SSE inhibited melanin production which may be dependent on tyrosinase activity and expression in B16 melanoma cells, and an effective whitening agent for the skin.
본 연구의 목적은 청국장, 시금장, 표고버섯 분말의 첨가 비율을 달리하여 새로운 발효 식품(일명: 청금장)을 개발하고자 하였다. 시금장, 청국장, 시금장과 청국장의 첨가비율을 달리하여 청금장 A(Sigumjang:Cheonggukjang=1:2), 청금장 B(Sigumjang:Cheonggukjang=1:1), 청금장 C(Sigumjang: Cheonggukjang=2:1) 시료를 제조한 후 이화학적 특성과 기능성 평가를 실시하였다. 청금장은 시금장보다 단백질 함량은 증가하였으며, 청국장보다 지방과 칼로리는 낮았으나, 유리당 함량은 청금장 C에서 5.8681 g/100g으로 가장 높은 함량을 나타내었다. DPPH 라디컬 소거능은 시금장과 청금장 C가 양성대조구인 BHT와 유사할 정도로 높은 활성이 나타났다. SOD 유사활성능은 시금장이 가장 높은 SOD 유사활성능을 나타내었고 청금장 중에서는 청금장 C가 가장 높았다. 금속이온의 지방산패 촉진에 대한 청금장의 억제능은 $Cu^{2+}$ ion에 대한 억제능보다 $Fe^{2+}$ ion에 대한 억제능이 다소 높은 것으로 나타났고, 활성 산소종의 지방산패 촉진에 대한 청금장의 억제능은 $KO_2$보다 $H_2O_2$에 대한 억제능이 다소 높은 것으로 나타났다. Xanthine oxidase 활성저해능은 700 ppm 에서는 전반적으로 높은 xanthine oxidase 활성 저해능을 나타내었고, 특히 시금장과 청금장 C는 높은 xanthine oxidase 활성 저해능을 나타내었다. ${\alpha}$-Glucosidase 저해 활성능은 모든 농도(300 ppm, 500 ppm, 700 ppm)에서 전반적으로 우수한 ${\alpha}$-glucosidase 저해 활성능을 나타내었으며 시금장과 청금장 C는 높은 ${\alpha}$-glucosidase 저해 활성능을 나타내어 혈당을 조절하는데 도움을 줄 것으로 기대된다. 관능평가 결과 청금장 C가 색, 향기, 쓴맛, 짠맛 및 종합적인 맛에서 가장 높은 평가을 받은 것으로 나타났기 때문에 시금장과 청국장을 단독으로 사용하는 것보다 시금장과 청국장을 2:1로 혼합하여 제품을 제조하는 것이 이화학적 특성과 기능성에 효과적일 것으로 판단된다.
한방 약용자원으로 이용되고 있는 순비기나무(Vitex rotundifolia)의 종자를 건조시킨 만형자를 새로운 항산화제나 생리활성 소재로 활용하기 위한 연구의 일환으로 물추출물(WE)과 에탄올 추출물(EE) 그리고 열수 추출물(HWE)에 함유된 플라보노이드와 폴리페놀 화합물 함량을 분석하였고, 각 추출물을 $0.1{\sim}1.0\;mg/mL$의 농도로 희석하여 항산화 활성 및 tyrosinase 저해활성을 측정하였다. 플라보노이드 화합물 함량은 만형자 추출물 중 EE에서 31.05 mg/g으로 가장 많이 함유하였으며, 폴리페놀 화합물은 물을 용매로 추출한 WE에서 186.69 mg/g, HWE는 182.55 mg/g을 함유하였다. SOD 유사활성능은 1.0 mg/mL의 농도에서 $12.48{\sim}83.40%$로 HWE가 EE보다 6배 이상 높은 유사활성을 나타내었다. 전자공여능은 1.0 mg/mL의 농도에서 $91.14{\sim}95.08%$로 0.1 mg/mL 농도에서도 세가지 추출물 모두 88% 이상의 전자공여능을 나타내었다. 통풍을 일으키는 원인으로 알려져 있는 xanthine oxidase 대한 저해활성을 측정한 결과 1.0 mg/mL의 농도에서 $94.02{\sim}97.51%$였으며, 0.5 mg/mL에서도 90% 이상의 저해활성 나타내어 대조군인 ascorbic acid 보다 높은 xanthine oxidase 저해활성을 보였다. 아질산염 소거능은 pH 1.2의 조건에서 $59.27{\sim}86.61%$로 EE에서 가장 높았으며, pH 3.0에서는 $26.53{\sim}35.73%$, pH 6.0에서는 $14.07{\sim}19.55%$의 소거율을 나타내었다. Tyrosinase에 대한 저해활성을 측정한 결과에서는 $29.09{\sim}48.58%$로 HWE가 가장 높은 저해율을 보였으며 WE도 46.67%로 EE보다 약 1.5배 높은 저해활성을 나타내었다. 이상의 결과에서 만형자 추출물은 플라보노이드 함량은 EE에서 가장 많이 함유하였으나 폴리페놀 화합물은 WE와 HWE가 EE보다 약 1.8배 많았고 SOD 유사활성과 tyrosinase 저해율 또한 높았으며, 전자공여능은 EE에서 더 높았으나 WE가 유사한 활성을 나타내었다. 또한 아질산염 소거능은 pH 1.2에서는 EE가 높았으나 pH 3.0의 조건에서는 WE와 HWE가 더 우수한 소거효과를 나타내었으므로 만형자는 물을 용매로 추출하는 것이 에탄올을 용매로 추출하는 것보다 더 효율적인 것으로 사료되며, 천연항산화제나 미백제 및 기능성 식품 그리고 의약품 등의 원료 및 첨가물로써 활용될 수 있는 유용한 한방 약용자원인 것으로 판단된다.
Tectorigenin and kaikasaponin III from the flowers of Pueraria thunbergiana showed potent hypoglycemic and hypolipidemic effects in the streptozotocin-induced diabetic rats. Intraperitoneal administration of these two compounds with 5 and 10 mg/kg, respectively, for seven days to streptozotocin-induced rats significantly reduced the blood glucose, total cholesterol, LDL- and VLDI-cholesterol and triglyceride levels when compared with those of control group. Glycitein in which 5-OH is unlinked and tectoridin (7-O-glycoside of tectorigenin) isolated from the flowers of P. thunbergiana did not improve hyperglycemia and hyperlipidemia. In addition, tectorigenin showed in vitro antioxidant effects on 1,1-diphenyl-B-pirylhydrazyl (DPPH) radical, xanthine-xanthine oxidase superoxide anion radical, and lipid peroxidation in rat microsomes induced by enzymatic and non-enzymatic methods. We further found that tectorigenin and kaikasaponin III protected the Vero cell line(normal monkey kidney) from injury by hydrogen peroxide. From these findings, it seems likely that the antioxidant action of tectorigenin and kaikasaponin III may alleviate the streptozotocin-induced toxicity and contribute to hypoglycemic and hypolipidemic effects.
Xiaoshuan Zaizao Wan (XZW) has been used in China to improve hemiplegia, deviation of eye and mouth, and dysphasia due to cerebral thrombosis. To characterize pharmacological actions of XZW, we evaluated its effects on neuronal cell damage induced in primary cultured rat cortical cells by various oxidative insults, glutamate or N-methyl-D-aspartate (NMDA), and $\beta$-amyloid fragment ($A_{\beta(25-35)}$). XZW was found to inhibit the oxidative neuronal damage induced by $H_2O_2$, xanthine/xanthine oxidase, or $Fe^{2+}$/ascorbic acid. It also attenuated the excitotoxic damage induced by glutamate or NMDA. The NMDA-induced neurotoxicity was more effectively inhibited than the glutamate-induced toxicity. In addition, we found that XZW protected neurons against the $A_{\beta(25-35)}$-induced toxicity. Moreover; XZW exhibited dramatic inhibition of lipid peroxidation in rat brain homogenates and mild 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging activity. Taken together; these results demonstrate that XZW exerts neuroprotective effects against oxidative, excitotoxic, or $A_{\beta(25-35)}$-induced neuronal damage. These findings may provide pharmacological basis for its clinical usage treating the sequelae caused by cerebral thrombosis. Furthermore, XZW may exert beneficial effects on Alzheimer's disease and other oxidative stress-related neurodegenerative disorders.
산화적인 스트레스(oxidative stress)는 신경염증의 발병 요인 중의 하나로 알려져 있다. 이에 본 연구는 약용곤충으로 알려진 청동풍뎅이(Anomala albopilosa) 성충과 3령 유충(궁벵이) 에탄올 추출물을 대상으로 항산화활성을 비교 측정하였으며, 또한 대식세포인 RAW 264.7 세포에서의 NO 의 생성억제 효과 및 세포독성 그리고 분자 염증관련 인자인 iNOS, COX-2와 $PGE_2$ 생성 및 활성 억제를 조사하여 항염 증효과 등의 생리활성을 측정 비교하였다. 우선, 분자염증은 활성산소 관련의 물질과 밀접한 관련이 있으므로 향산화 실험과 관련하여 청동풍탱이 성충과 3령 유충 에탄올 추출물 의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radical 소거능, superoxide radical 소거능, xanthine oxidase 저해활성 그리고 nitric oxide 소거능에 대한 항산화활성 등의 assay를 실시하였다. 그 결과, 청동풍뎅이 에탄올 추출물은 항산화능을 갖고 있었으며, 3령 유충 추출물에서보다는 성충 추출물에서 다소 높은 항산화활성을 보여주었다. 또한 RAW 264.7 세포에 LPS로 자극을 주고 청동풍뎅이 성충과 3령 유충 에탄올 추출물을 처리하여 항염증관련 활성을 확인해본 결과, 고농도에서는 다소 세포독성을 나타냈지만 농도의존적으로 NO, iNOS, COX-2 그리고 $PGE_2$의 생성 억제효과가 나타났다. 이러한 결과는 유용곤충자원을 이용한 유효성분 추출을 통한 항산화 및 항염증 물질의 연구 또는 예방하거나 치료할수 있는 염증 억제 성분의 분리 및 그 작용기전 연구에 중요한 기초 자료가 될 것이라 사료된다.
본 연구는 산돌배나무 잎 추출물의 화장품 약리활성인 항산화활성과 항염증활성을 검증하고, 화장품 산업적 응용을 위하여 산돌배나무 잎 추출물의 화장품 천연소재로써 적용 가능성을 확인하였다. 본 연구에 사용된 시료는 산돌배나무 잎을 물과 70% 에탄올, 60% 아세톤으로 추출하여 사용하였다. DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 소거능은 50 ppm의 농도에서 열수추출물이 70%, 에탄올 추출물이 80%, 아세톤추출물이 85% 이상의 높은 전자공여능(electronic donating ability, EDA)을 나타내었다. Xanthine oxidase 저해능과 Superoxide dismutase(SOD) 유사활성능은 열수, 에탄올, 아세톤추출물 모두 500 ppm농도에서 30%이상의 저해능을 나타내었다. 그리고 SOD 유사활성능은 시료의 농도가 증가함에 따라 유의적으로 증가하는 경향을 나타내었다. 항염증 효과로 Nitric Oxide(NO)량을 측정한 결과 lipopolysaccharide(LPS)군에서는 12시간 후부터 대조군에 비교하여 NO의 생성량이 LPS농도 의존적으로 증가하였으며, 산돌배추출물을 처치한 군에서는 12~24시간 후 유의성 있게 NO의 생성량이 억제되었다. 이상의 결과로 미루어 보아 산돌배나무 잎 추출물이 항산화효과와 항염증효과가 있음을 확인할 수 있었고, 기능성 화장품 소재로써 이용가능성을 확인할 수 있었다.
딸기의 가공방안을 높이고, 안정된 수급과 식품소재로 활용하기 위해 냉동저장과 추출방법에 따른 생리활성 변화를 조사하였다. 냉동저장기간(3, 6개월)에 따른 딸기의 총 phenol 함량은 딸기즙이 $2.342{\mu}g/ml$. 열수추출물은 $2.235{\mu}g/ml$로 나타났다. 반면, 총 flavonoid성 함량은 딸기즙은 $200.36{\mu}g/ml$로 나타났고, 열수추출물은 $201.07{\mu}g/ml$로 나타났고, 냉동저장기간 동안 총 phenol 함량과 총 flavonoid성 함량은 비교적 차이가 없었다. 딸기의 항산화 효과는 전자공여능이 딸기즙과 열수추출물이 각각 94.2%, 93.5%로 나타났고, ABTS는 각각 99.9%, 100%로 높게 나타났다. Xanthine oxidase의 저해활성의 경우 딸기즙이 93.0%, 열수 추출물은 99.9%로 높은 저해율을 나타내었고, 열수추출물이 다소 높게 나타났다. SOD 유사활성은 딸기즙과 열수추출물이 32.5%, 38.0%로 열수추출물이 비교적 높은 SOD유사활성을 나타내었고, 냉동기간에 의한 항산화 효과는 비교적 차이가 없었다. 이러한 결과로 냉동 저장 시 항산화활성의 차이가 거의 없음으로 연중 원료의 안정적인 수급과 식품소재로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
한방생명자원으로 사용되고 있는 가죽나무(A. altissima)를 대상으로 뿌리와 줄기, 잎을 $80^{\circ}C$의 조건에서 물을 용매로 추출한 가죽나무 추출물의 전자공여능, 아질산염 소거능, SOD 유사활성 및 XO 저해 활성과 tyrosinase 저해효과를 측정하였다. 전자공여능은 1.0 mg/mL의 농도에서 뿌리(74.83%)>줄기(70.01%)>잎(29.24%)의 순으로 활성을 나타내었다. 아질산염 소거능에서 가죽나무 잎 추출물은 1.0 mg/ mL pH 1.2와 3.0의 조건에서 각각 95%와 89% 이상으로 줄기(55.17%)와 뿌리(33.33%)보다 높은 소거율을 보였으며, 0.5 mg/mL의 농도에서도 각각 93%와 80% 이상의 아질산염 소거효과를 나타내었다. SOD 유사활성능에서도 잎 추출물은 26.77%로 뿌리의 3.82%보다 7배 높았으며, 줄기 추출물에서는 SOD 유사활성 효과가 없었다. XO의 저해율은 세가지 추출물 모두 0.5 mg/mL 이상의 농도에서 약 90% 이상의 저해 활성을 나타내었으며, tyrosinase에 대한 저해 활성은 2.0 mg/mL의 농도에서 잎 추출물이 16.33%으로 뿌리(7.09%)와 줄기(5.21%) 추출물보다 약 2배 높은 저해율을 나타내었다. 이상의 결과로 보아 가죽나무 잎 추출물은 현재 한약재로 사용되고 있는 뿌리와 줄기보다 전자공여능은 낮았으나 뿌리보다 7배 높은 SOD 유사활성 효과와 약 90% 이상의 아질산염 소거능 효과를 나타내었다. 그리고 가죽나무의 잎 추출물은 약 95%의 XO 저해 활성과 약 16%의 tyrosinase 저해효과를 나타내어 뿌리와 줄기보다 저해효과가 높은 것으로 분석되었다. 그러므로 가죽나무의 잎에서도 우수한 생리활성 물질을 다량 함유하는 것으로 생각되며, 뿌리뿐만 아니라 잎도 기능성 식품이나 의약품의 원료 및 첨가물 등 다양한 제품에 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
홍국 첨가식 이로 성장시킨 흰쥐에 있어서 간조직의 유해산소 기구와 혈청지질 성분의 변동에 어떠한 영향을 미치는지를 검토할 목적으로 Monascus로 제조된 홍국을 사료에 2%, 4% 첨가시켜 1개월 간 사육한 후, 처치하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 300g 내외의 흰쥐를 홍국 첨가식 이로 1개월 간 성장시키는 동안 2% 홍국 첨가식이군의 체중증가율은 대조군 및 4% 홍국 첨가식이군보다 다소 낮게 나타나는 경향을 보였으며, 이러한 조건 하에서 간 기능은 2%, 4% 홍국첨가 식이군 모두 별다른 변화를 나타내지 않았다. 유해산소 생성 에 관여하는 cytochrome P450 dependent aniline hydroxylase 활성은 2% 및 4% 홍국 첨가식이군이 대조군에 비해서 각각 32%, 37%의 유의한(p<0.05)감소를 보였으며 홍국 첨가식이 농도를 달리한 실험군 간에 유의한 차이가 나타나지 않았다. 그러나 xanthine oxidase 활성은 2% 및 4% 홍국첨가 식이군이 대조군에 비해서 각각 29%, 36% 증가되었으며 2군간에는 의의있는 차이는 없었다. 유해산소 해독에 관여하는 glutathione-5-transferase와 glutathion peroxidase 활성은 2% 및 4% 홍국 첨가식이군 모두 대조군에 비해서 각각 1.1%, 23%의 유사한 증가를 보였으며, 특히 Catalase의 활성은 2%및 4% 홍국 첨가식이군이 대조군에 비해서 각각 41%, 25%의 유의한 (p<0.05) 증가를 보였다. 그리고 superoxide dismutase의 활성과 간조직 glutathione의 함량은 2% 및 4% 홍국 첨가식이군이 대조군에 비해서 높게 나타나는 경향을 보였으며, 2% 흥국 첨가식이군이 4% 홍국 첨가식이군보다 약간 높게 나타났다. 한편 혈청 중 HDL-cholesterol은 2% 및 4% 홍국 첨가식이군이 대조군에 비해서 16% 및 8%높게 나타나는 반면, LDL-cholesterol은 대조군에 비해서 다같이 약 26% 정도 감소되는 경향을 보였고, triglyceride의 함량 역 시 2% 및 4% 홍국 첨가식이군이 대조군에 비해서 모두 약 25% 정도 감소되는 경향을 보였다. 이때 동맥경화지수는 2$^{\circ}C$ 및 4% 홍국 첨가식이군이 대조군에 비해서 각각 39%, 29%의 유의한(P<0.05) 감소를 보였으며, 2% 홍국 첨가식이군 4% 홍국 첨가식이군보다 감소의 정도가 크게 나타나는 경향을 보였다. 이상 실험결과를 종합해 볼 때 홍국 성분은 oxygen free radical의 일종인 $H_2O$$_2$를 제거하는 효소인 catalase의 활성을 증가시킴으로서 유해산소에 의한 동맥경화증의 발생을 예방시켜 줄 수 있을 것으로 사료되나 이점에 대해서는 추후 계속적인 연구 검토가 행해져야할 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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