• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제5권4호
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• pp.251-257
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• 2002

Effects of bisphenol-A (BPA) on vitellogenin (VTG) synthesis and estrogen-estrogen receptor $(E_2- ER)$ binding activity were examined in primary hepatocyte cultures of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss. Hepatocytes were precultured for 2 days and then $estradiol-17\beta\;(E_2,\;2\times10^{-6}M)\;BPA\;(10^{-5}-10^{-8}M)$ and/or 4-hydroxy-tamoxifen $(4-OHT,\;10^{-6} M)$ were simultaneously added to the incubation medium. Hepatocytes were cultured for 5 more days and then spent medium was analyzed by SDS-PAGE for VTG production. The addition of BPA to the incubation medium had no effect on the viability of hepatocytes in the culture. On the other hand, BPA increased VTG production in a concentration-dependent way and a significant increment occurred at BPA concentrations greater than $10^{-6}$M. Although VTG was increased by the addition of $E_2\;(2\times10^{-6}\;M)\;or\;BPA\;(10^{-5}M)$, its were reduced by a simultaneous 4-OHT $(10^{-6}\;M)$ addition. BPA inhibited $E_2-human$ ER binding activity by $72\%$ at $10^{-5}$ M of BPA. These results suggested that BPA induced VTG synthesis by BPA-ER binding activity in the hepatocyte of rainbow trout.

• 환경생물
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• 제22권1호
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• pp.206-212
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• 2004

In an effort to develop the tools for monitoring the contamination of xenoestrogen in the aquatic environment of Korea, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis of vitellogenin (VTG) mRNA expression were optimized in Synechogobius hastus. Based on the partial VTG cDNA sequence VTG mRNA level in livers from male fishes was analyzed by RT-PCR. As an internal control beta actin mRNA was amplified. 3 ${\mu}g$ of total RNA was reverse transcribed in 20 $\mu$l reaction using murine leukemia virus 〔MuLV〕 reverse transcriptase. Subsequent PCR using the 1 ${\mu}g$ of cDNA resulted in linear increase in PCR product of VTG in female liver cDNA from 10 to 30 cycles of amplification. On the contrary, in male, PCR product first detected at 28 cycles of amplification and linearly increased during 38 cycles of amplification, suggesting that male S. hastus expresses minute amount of VTG mRNA which is $2^{-18}$ equivalent of female. In conclusion, the optimized protocol of VTG mRNA expression in the liver of male S. hastus will be promising the environmental monitoring the xenoestrogen contamination in the western coast and estuaries in Korea.

• Molecular & Cellular Toxicology
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• 제3권3호
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• pp.185-189
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• 2007

Gene expression levels of choriogenin, vitellogenin and estrogen receptor were determined using Reverse transcription (RT)-PCR technique after exposure to estrogenic chemical bisphenol A in the Korean wild medaka (Oryzias sinensis). These genes have been known to be induced in male test fish when the fish are exposed to estrogenic chemicals. Therefore they can be suggested as a possible biomarker of endocrine disruption in fish, however, relatively little has been known about these genes expression by estrogenic chemicals in Korean wild fish. Mature male Oryzias sinensis were treated with bisphenol A at nominal concentrations of 0.02, 0.2 and 2 mg/L for 6 days and total RNA was extracted from the livers of treated fish for RT-PCR. When the five biomarker genes were amplified by RT-PCR in the same condition, mRNA induction level of each gene was elevated with different sensitivities. Conclusively, the results of this work indicated that measurement of vitellogenin and choriogenin using RT-PCR is effective as a simple tool for the screening of estrogenic chemicals and suggested that O. sinensis would be a suitable model fish for the environmental risk assessment of potential endocrine disruptors.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제14권4호
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• pp.355-361
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• 2011

Effects of aluminum (Al) on plasma vitellogenin (VTG), alkaline-labile phosphorus (ALPP), calcium (Ca), glutamate pyruvate transaminase (GPT), the hepatosomatic index (HSI), and hepatic Al concentration were examined in estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$)-administered immature rockfish Sebastes schlegeli. Fish were injected intraperitoneally with $E_2$ (5 mg/kg body weight [BW]) and/or Al (0, 0.1, 1, 5, and 10 mg/kg BW) and plasma and liver samples were extracted 7 days later. After sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, the relative amount of VTG was determined by integrated optical density. VTG accounted for 23.6% of the total proteins in the control group, but this value decreased with increasing Al administration. Al reduced the concentrations of ALPP and Ca in a concentration-dependent manner and significant reduction occurred at Al concentrations greater than 5 mg/kg. The concentration of GPT increased in a concentration-dependent manner in all Al-administered rockfish. The concentrations of Al in the liver also increased, and HSI was decreased, in a concentration-dependent manner. These results suggest that Al inhibits $E_2$-induced VTG production by being toxic to hepatocytes in marine fish.

• 한국환경보건학회지
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• 제33권3호
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• pp.207-210
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• 2007

The study was designed to determine the estrogenic effect of some penicillins on endocrine function in adult Japanese medaka (Oryzias latipes). Vitellogenin (Vtg) produced in male fish has been used for a biomarker to study endocrine disrupters. $17\beta-estradiol\;(E_2)$ was used a positive control that was induced Vtg in male fish. Result of total protein qantification and ELISA for female and male fish were exposed to $17\beta-estradiol$ 10ng/ml for $3\sim5$ days. As a result, male fish exposed to amoxicillin respectively appeared 0.75, 0.23, 8.21 and $9.36\%_{\circ}$ of 1, 10, 100 and 1000 ppm respectively, that value was elevated compared with control male fish. Male fish exposed to ampicillin respectively appeared 1.85, 4.68, 0.85 and $39.59\%_{\circ}$ of 1, 10, 100 and 1000 ppm respectively, that value was elevated compared with control male fish. This study is one of the first reports suggesting potential endocrine disruption of some penicillins in aquatic ecosystem. These results suggest that vitellogenin and estrogen receptor induction patterns alter in male medaka treated with selected estrogenic compounds, and that these results may be useful molecular biomarkers for screening estrogenic EDCs (endocrine-disrupting chemicals) in the shortest possible time.

• 한국양식학회지
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• 제11권3호
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• pp.311-317
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• 1998

Estradiol-17${\beta}$($E_2$)에 의한 Vitellogenin (VTG) 함성에 미치는 Cu 및 Zn의 영향을 무지개송어의 배양 간세포를 이용하여 조사하였다. 간세포는 2일간 배양 한 후, E하(2) ($2{\times}10^6$ M)와 동시에 Cu ($2{\times}10^{-5}$~$10^{-4}$M) 또는 Zn ($10^{-5}$~$10^{-3}$M)을 배양액에 첨가하여 5일간 배양하였다. VTG 합성률은 총 단백질에 대한 VTG의 배율로 나타내었다. CU 및 Zn의 첨가는 배양 간세포의 생존율에는 영향을 미치지 않았다. 그러나, Cu의 첨가에 사용된 모든 농도에서, Zn의 첨가에는 농도 의존적으로 감소하여(10^{-3}$M에서 유의하게 감소하였다. 이러한 감소는, Zn의 제거시에는 회복되었으나, Cu에서는 회복되지 않았다. 그리고, Cu (10^{-4}$M의 첨가 시에 Ca (1.8 mM) 농도를 2.5 및 5.0 mM로 증가시켜도 Cu의 작용을 저해하지 못하였다. 이러한 결과로 보아, Cu 및 Zn은 간세포에서 합성되는 다른 단백질 보다 VTG 합성에 더 깊이 관여하는 것으로 추정된다.

• 한국어류학회지
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• 제12권3호
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• pp.180-185
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• 2000

플라스틱의 원재료로 이용되는 bisphenol-A (BPA)가 vitellogenin (VTG)의 합성에 미치는 영향을 넙치의 간세포를 초대 배양하여 조사하였다. 간세포는 2일간 사전 배양을 하였으며, estradiol-$17\beta(E_2)$ 및 BPA를 배양액에 동시 첨가하였다. 간세포는 6일간 배양한 후 배양액을 회수하여 SDS-PAGE로 분석하였다. BPA는 농도 의존적으로 총 단백질에 대한 VTG 비율은 증가하였으며, $10^{-6}M$과 $10^{-5}M$의 농도에서 유의한 차이를 나타내었다(P<0.05). 특히, BPA $10^{-5}M$의 농도에서의 총 단백질에 대한 VTG 비율은 26.36%로 $E_2$만을 첨가한 대조군과 유의한 차이를 나타내지 않았다. $E_2$와 BPA를 단독 또는 동시에 첨가하여 유도된 VTG합성은 배양액에 tamoxifen$(10^{-6}M)$을 첨가함으로서 $E_2$를 첨가한 대조군의 약 80%로 유의하게 억제되었다. 그리고, in vivo에서 $E_2$에 의해 유도된 VTG합성은 in vitro에서 간세포를 6일간 배양함에 따라 $E_2$를 첨가한 대조군의 약 22%까지 억제되었다. 이러한 감소효과는 BPA의 농도 의존적으로 지연되는 결과를 나타내었다. 따라서 넙치에서의 BPA는 $E_2$ receptor와의 반응을 통한 에스트로겐 작용에 의해 VTG합성을 유도하고, 난황형성기에서의 VTG 합성을 장시간 지속시킬 가능성이 있는 것으로 추측된다.

• 한국수산과학회지
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• 제30권3호
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• pp.480-487
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• 1997

범가자미, Verasper variegatus의 vitellogenin (Vg)을 분리하기 위하여 수컷에 $etradiol-17\beta(E_2) $를 처리하여 Vg의 합성을 유도하여 SDS-PAGE와 western blot으로 확인 하였다. 분리된 Vg의 분자량은 175 kD 이었으며 암컷 특이단백질이었다. $E_2$ 처리한 수컷 혈청을 찬 증류수로 침전시킨후 Sepharose CL-6B column chromatography에 의해 Vg을 분리하였다. 분리한 Vg에 대한 항혈청을 만들어 특이성을 western blot으로 확인하였고, 또한 Vg를 대한 단클론항체를 만들기 위하여 분리한 Vg을 Balb/c에 면역시켜 비장세포와 NS1 myeloma 세포를 세포융합하여 hybridoma를 만들었다. 세포융합된 18개 clone중 효소면역측정법에 의해 Vg과 가장 반응성이 높은 clone을 4D6으로 명명하였고, 이에 대한 특이성을 $E_2$가 처리되지 않은 수컷 혈청, $E_2$가 처리된 수컷혈청과 분리한 Vg를 사용하여 western blot으로 확인하였다.

• 한국양식학회지
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• 제8권1호
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• pp.1-19
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• 1995

난황형성 중인 암 참돔의 혈청 내에는 암 특이혈청단백질이 존재하고 있음이 Ouchterlony의 면역확산 검정과 면역 전기영동에 의하여 밝혀졌으며, 이러한 암 특이혈청단백질은 암 $\cdot$수 혈청과 난추출액의 면역학적인 조사에 의해 난황단백 전구체임이 밝혀졌다. 또한 난추출액으로부터 정제된 난황단백질은 난황전구체와 공통의 항원성이 있음도 면역학적인 조사에 의하여 알 수 있었다. 변형한 효소면역측정법의 타당성을 조사하였다. 일정 비율로 희석한 성숙중인 암 혈청의 흡광도 곡선은 난황단백질의 표준곡선과 평행하였다 본 효소면역측정법의 평균 회수율은 $109\pm5.6\%$이었으며, $10\%$ 이내의 assay내 변동계수 범위는 $31\~1,000ng/ml$이었다. 생식소의 성숙 단계에 대한 혈장내의 난황단백전구체의 양과의 관계를 조사하기 위하여 휴지기후기(1월)부터 난황형성기(4월)까지 난황단백질에 대한 항체를 이용한 효소면역측정법에 의하여 혈장 난황단백전구체의 양을 측정하였다. 난황단백전구체의 양은 난황형성 전기인 2월부터 증가하기 시작하여, 난황형성기(3월부터 4월) 동안에는 난이 성장하면서 계속 증가하였다 2월부터 혈장내의 난황단백전구체의 양이 암$\cdot$수에 따라 현저하게 차이가 났다. 따라서 참돔 친어의 성 구분은 효소면역 측정법에 의하여 2월부터는 명확히 할 수 있다

• 농약과학회지
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• 제7권3호
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• pp.188-197
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• 2003

내분비교란물질은 동물에서 생식기계통을 통제하는 호르몬 조절에 영향을 준다. 상기 선정된 농약을 투여함에 있어서 실험동물로 Xiphophorus helleri로 선정하였는데 이는 암수의 구별이 육안적으로 명확히 관찰되며 또한 난태생으로 사육이 용이한 점이 있다. Xiphophorus helleri에 있어서 내분비교란물질로 의심되는 endosulfan과 molinate의 영향을 조사하기 위하여 vitellogenin과 aromatase 를 진단 biomarker로써 사용하였다. RT-PCR 결과 endosulfan과 molinate의 혼합처치군 및 alachlor 단독군 수컷에서 vitellogenin과 aromatase의 induction 이 동시에 관찰되었고, endosulfan 단독군에서는 aromatase의 induction이 관찰되었다. 본 실험에서는 endosulfan이나 molinate 단독 처치군에서의 성호르몬과 세포에 대한 유해 효과는 나타나지 않았다. 그러나, endosulfan과 molinate 의 혼합처치군에서는 vitellogenin과 aromatase의 발현 및 apoptosis가 관찰되었다. 이러한 결과는 swordtail fish에 영향을 미치지 않는 낮은 농도의 molinate와 endosulfan이라도 병용되는 경우에 생식기계의 호르몬 변화와 apoptosis를 야기시킨다는 사실을 제시한다.