본 연구에서는 ACE 저해능 및 항산화능이 있는 식물성 젖산균을 다양한 식물체로부터 분리한 후, 그 특성을 조사하였다. 김치, 부추, 포도 및 동동주에서 K-1, K-21, L-5, G-3 및 D-3 균주가 분리되었으며, 16S rRNA gene 염기서열 분석을 통하여 이들은 각각 Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus plantarum, Weissella cibaria, L. plantarum 및 L. brevis로 동정되었다. 분리균주들은 MRS broth에서 44.3-71.9%의 ACE 저해능을 나타내었으며, 특히 G-3, L-5, K-1 균주는 skim milk가 함유된 MRS broth에서 59.0-8-98.6%의 높은 ACE 저해능을 나타내었다. 분리 균주는 42.5-82.7%의 DPPH radical 소거능을 나타내었으며, G-3 및 K-1 균주는 pH 2.5의 인공위액에서 42.2-88.1%의 높은 생존율을 나타내었다. 분리균주는 0.3% oxgall에서 24시간 배양시 55.4-112.8%의 내성을 나타내었다. 또한 분리균주는 유기산 생성에 따른 pH 감소 효과로 인하여 Pseudomonas aeruginosa를 포함한 일부 병원성 세균의 생육을 억제할 수 있었다.
This study aimed to understand the survival and growth patterns of bacteriophage-sensitive Weissella and Leuconostoc strains involved in kimchi fermentation. Dongchimi kimchi was prepared, and Weissella and Leuconostoc were co-cultivated in the dongchimi broth. Weissella cibaria KCTC 3807 growth was accompanied by rapid lysis with an increase in the bacteriophage quantity. Leuconostoc citreum KCCM 12030 followed the same pattern. The bacteriophage-insensitive strains W. cibaria KCTC 3499 and Leuconostoc mesenteroides KCCM 11325 survived longer under low pH as their growth was not accompanied by bacteriophages. The bacteriophage lysate of W. cibaria KCTC 3807 accelerated and promoted the growth of Leuconostoc. Overall, our results show that bacteriophages might affect the viability and population dynamics of lactic acid bacteria during kimchi fermentation.
분리된 미생물은 pH 4.5내지 pH 8.0에서 100% 안정성을 나타내며 에너지원이 전혀 공급되지 않은 상태에서도 37$^{\circ}C$의 용액중에서 48시간 이고 경과시도 80% 이상의 높은 생존율을 나타낸다. 생리식염수에서는 4$0^{\circ}C$에서 한 시간 방치하는 경우도 90% 이상의 높은 생존율을 나타낸다는 것을 알수 있었다. 이러한 조건들을 검토해볼 때 생장내 조건에서 상당히 안정하며 경구투여제로 투여하기에 충분히 적당하다고 결론지을 수 있겠다. 특히 포만시에 투여하는 것이 더욱 효과적인 것으로 사료되므로 소화제등과 혼용한 약제로 축발하는 것이 바람직하리라 기대된다.
식염용액에서 휴지미생물(non-growing microorganisms)의 사멸현상과 식염용액에서 미생물의 보호작용이 있다고 알려진 물질의 작용을 시험하였다. L. mesenteroides LA10, S. aureus B3l와 E. coli B34를 완충용액으로 제조한 0, 10, 20, 30%의 식염용액에서 배양하였을 때 각각 pH 6, 7, 5 부근에서 가장 높은 생존율을 나타내었고, 이 pH로부터 산성 또는 염기성쪽으로 변화시키거나 식염농도가 증가할 수록 생존율이 감소하였다. 젖산균 5종과 일반세균 9종 및 효모 2종의 균주를 pH 5, 6, 7로 조절한 10% 식염용액에서 실험해 본 결과 식염에 내성이 강한 pH는 미생물마다 달라 이는 균주의 특성에 속하는 것으로 사료되며 그람양성균이 그람음성균에 비해 식염내성이 높았으며 그람양성균 중에서도 젖산균이 식염에 대한 내성이 두드러지게 컸고 일반세균에서는 S. aureus가 큰 것으로 나타났다. 식염농도의 영향은 물론 pH가 식염용액에서 미생물의 사멸에 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다. 식염의 미생물 생육저해작용으로부터 미생물을 보호한다고 알려진 물질들의 보호작용은 관찰되지 않았다.
유산균을 고농도로 배양하기 위하여 $CaCO_3$를 각각 15% 와 20%씩 첨가하여 직경이 서로 다른 $CaCO_3$-alginate beads를 제조한 후, lactic acid에 대한 $CaCO_3$-alginate beads의 반응 특성과 완충효과를 관찰하였으며, lactic acid에 대하여 완충작용이 있는 $CaCO_3$-alginate beads를 이용하여 S. thermophilus ST-Body 1과 L. amylovorus DU-21을 고농도 배양하여 직접투입식 starter를 제조하였다. 본 연구에서 제조된 $CaCO_3$-alginate beads는 $CaCO_3$, alginate 함량 및 수분 함유율이 beads에 일정하게 고루 분포되어 있으며, 일정한 밀도를 갖는 입자임을 알 수 있었다. 또한 lactic acid에 대한 beads의 반응은 표면으로부터 일어나기 시작하여 내부로 진행됨을 확인하였으며, $CaCO_3$-alginate beads 양의 증가는 결국 lactic acid와 반응할 수 있는 $CaCO_3$ 표면적의 증가를 가져오게 되며, 단위시간당 lactic acid와 반응하는 $CaCO_3$의 상대적 증가를 가져오기 때문에 $CaCO_3$-alginate beads 양의 증가는 lactic acid 용액 내부의 중화작용의 증가를 가져온다는 것을 확인하였다. 즉, $CaCO_3$-alginate beads의 직경이 작을수록, 내부의 $CaCO_3$ 함량이 높을수록, 단위 부피당 넓은 표면적과 높은 중화작용을 가지므로 $CaCO_3$-alginate beads를 pH neutralizer로 이용하여 유산균을 배양할 경우에는 $CaCO_3$ 함량이 높고 직경이 작은 $CaCO_3$-alginate beads의 이용이 유산균 배양에 효과적임을 알 수 있었다. $CaCO_3$-alginate beads를 이용한 유산균의 고농도 배양시, pH와 생균수와의 상관성과 선형관계를 단순회귀분석법(simple regression)을 이용하여 최소자승추정량(least square estimator; LSE)을 구하여 검증한 결과, 각 X의 회귀계수의 값은 통계적으로 유의한 결과(p<0.05, p<0.01)를 보였다. 또한 $R^2$ 값은 S. thermophilus ST-Body 1와 L. amylovorus DU-21의 경우, $CaCO_3$-alginate beads 무첨가구와 첨가구에서 각각 0.6310, 0.7505, 0.7452, 0.7609이였다. 이는 pH가 균 증식에 다소나마 영향을 주는 것을 나타낸다. 고농도로 배양된 S. thermophilus ST-Body 1과 L. amylovorus DU-21 균주를 이용하여 직접투입식 starter를 제조한 결과, 동결건조 보호제로 15% glycerol을 이용하였을 때 각각 91.96${\pm}$1.35%와 89.09${\pm}$4.49%의 생존율을 보였다. 본 연구에서 확립된 기법은 probiotics 조제나 정장제 조제방법에 있어서도 공히 적용 가능하므로 미생물 세포의 이용기법으로 그 생존율과 발효에 연관되는 기능보존과 수반되는 여러 분야에 적용한다는 면에서 산업적으로 중요하다고 사료된다.
전통 장류에서 점성물질을 분비하는 유산균을 분리하고 높은 활성을 보이는 N45-10, K6-7 및 N58-5의 3균주를 선발하였다. 선발한 3균주의 16S rDNA의 염기서열을 분석한 결과 N45-10은 Leuc. citreum, K6-7, N58-5는 Leuc. mesenteroides로 동정되었다. 산 저항성과 인공위액 저항성은 3균주 중에서 Leuc. citreum N45-10이 높은 생균수($10^5-10^6$ CFU/ml)를 나타내어 산 저항성과 인공위액 저항성이 가장 우수하게 나타났으며, 인공 담즙 저항성은 Leuc. citreum N45-10은 높은 생균수($10^3-10^4$ CFU/ml)를 유지하여 담즙액 저항성이 우수하게 나타났다. 3균주들 중에서 Leuc. citreum N45-10은 EPS 생성량이 가장 많았고, MRS 배지에서 배양하여 EPS가 생성되지 않았을 때보다 슈크로오스 배지에서 배양하여 EPS를 생성하였을 때 생균수가 더 높게 나타났다. 이것은 EPS 생성이 유산균의 세포벽 주위에 보호막으로 작용한 결과로 생각된다. 선발 유산균 3주의 EPS 생산량은 슈크로오스 액체배지에서 각각 16.173, 8.167, 3.652 g/L였으며, Leuc. citreum N45-10은 글루코오스로만 이루어진 homo-polysaccharide, Leuc. mesenteroides K6-7과 N58-5는 프락토오스, 글루코오스로 구성된 hetero-polysaccharides로 동정되었다. 선발 유산균 3주 모두는 용혈 음성반응을 나타내고, 젤라틴 액화능을 나타내지 않아 안전성이 확인되었다.
Kariyawasam, Kariyawasam Majuwana Gamage Menaka Menike;Yang, Seo Jin;Lee, Na-Kyoung;Paik, Hyun-Dong
한국축산식품학회지
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제40권2호
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pp.297-310
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2020
This study aims to evaluate the probiotic properties of Lactobacillus brevis (L. brevis) KU200019 and the synergistic activity with prebiotics on antimicrobial activity, and the potential application as an adjunct culture in fermented dairy products. The commercial strain, L. brevis ATCC 14869 was used as reference strain. L. brevis KU200019 was showed higher viability in simulated gastric (99.38±0.21%) and bile (115.10±0.13%) conditions compared to reference strain. L. brevis KU200019 exhibited antimicrobial activity against various foodborne pathogens. The supplementation of fructooligosaccharides (FOS) enhanced viability of lactic acid bacteria (>8 Log CFU/mL) and antioxidant activity [2,2-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical assay (DPPH) assay, 31.23±1.14%; 2,2-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) assay, 38.82±1.46%] in fermented skim milk during refrigerated storage. L. brevis KU200019 was distinguished from the reference strain by its higher probiotic potential, antimicrobial activity, and higher antioxidant activity in fermented milk. Therefore, L. brevis KU200019 with FOS was demonstrated promising properties for further application in fermented dairy products with enhanced safety and quality.
Probiotics are microorganisms that have beneficial effects on the health of the host. The health promoting effect by probiotics influences suppressing harmful bacteria, prevention of constipation, blood cholesterol reduction and regulation of blood pressure. Prebiotics are used to promote the growth or activity of microorganisms. Synbiotics, which are a mixture of probiotics and prebiotics, synergize in the intestines by complementing each other. Synbiotics not only improves the viability of the probiotics while passing through the gastrointestinal tract, maintain intestinal homeostasis, but also regulate balance of harmful and useful bacterial growth. Glycine max Merr (GMM) has been widely used in Asian countries to treat cancer, obesity, oxidative stress and imbalanced immune diseases. In addition, it has been reported that dietary fiber-rich grains promote bowel movements and prevent constipation. In this study, we investigated the viability of LactobacillIus buchneri (L.buchneri) strains, known as lactic acid bacteria under conditions of gastric fluid and intestinal fluid to determine the suitability of L.buchneri as probiotics. The adhesion ability of L.buchneri to caco-2 cells was also confirmed. The present studies showed that GMM extract promoted the growth and activity of L.buchneri strains as prebiotics. Also, this results suggested that the mixture of L.buchneri and GMM extract can helps maintain intestinal health and healthy body as synbiotics and health functional food material.
A new technique has been developed for the preparation of Lactobacillus microcapsules to enhance the stability against high temperature, humidity, gastric acid and bile acid. Employing fluidized bed coating, primary sub-coating was processed in non-organic solvent system, so that Lactobacillus did not directly contact with organic solvent. Secondary enteric-coating was processed in organic solvent with low temperature $(below\;33^{\circ}C)$ technique, which minimized the heat labilability of Lactobacillus. Survival rate of Lactobacillus within microcapsule was not less than 95% and acid tolerance was above 30% in the artificial gastric acid. Further more it was dissolved in the artificial intestine juice within 2-3 hr. Average size of Lactobacillus microcapsules was $450\;{\mu}m$(25-50 mesh) and its viability was above 90% in the direct tableting.
Elevated serum cholesterol is a main risk factor for heart disorders. Most probiotic products administered to lower cholesterol are dairy products which are not suitable for lactose-intolerant individuals. In this study, we assessed the cholesterol-lowering efficacy of LAB isolated from traditionally fermented drinks in diet-induced rats and determine their efficacy in the production of non-dairy, probiotic formulations using papaya juice. LAB were isolated from palm wine and corn beer on MRS agar using a pour-plate technique. Identification was carried out using 16S rRNA gene sequencing. A hypercholesterolemia model in which diet-induced Wistar albino rats were assigned into four groups was established. Oral gavage was carried out for 30 days. On the 31st day, the rats were dissected and the serum lipid profile was analyzed using biochemical kits. A 106 cfu/ml of a 24-h-old culture of selected lactobacilli was used to inoculate papaya juice and incubated at 37℃. Microbial and chemical changes were assessed during papaya fermentation and after four weeks of cold storage. Two selected isolates (Pw1 and Cb4) had in vitro cholesterol reduction of > 80%. These two isolates lowered lipid profile (triglyceride, total cholesterol, LDL-c) significantly, and increased HDL-c levels (p < 0.5) in the rat sera. Phylogenetic analysis showed that Pw1 was 98.86% similar to Limosilactobacillus fermentum, while Cb4 was 99.54% similar to Enteroccocus faecium. Both strains fermented papaya juice with cell viability reaching 8.92 × 108 cfu/ml and 25.3 × 108 cfu/ml respectively, and were still viable after 4 weeks of cold storage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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