Background: Dental caries is mainly composed of various cellular components and is deposited around the tooth surface and gums, causing a number of periodontal diseases. Streptococcus mutans is commonly found in the human oral cavity and is a significant contributor to tooth decay. The use of antibacterial ingredients in oral hygiene products has demonstrated usefulness in the management of dental caries. This study investigated the anticaries effect of the ethanol extract of Terminalia chebula (EETC) against S. mutans and their cytotoxicity to gingival epithelial cells. Methods: The EETC was prepared from T. chebula fruit using ethanol extraction. Disk diffusion, minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), and colony forming unit (CFU) were analyzed to investigate the antimicrobial activity of the EETC. Glucan formation was measured using the filtrate of the bacterial culture medium and sucrose. Gene expression was analyzed using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Cytotoxicity was analyzed via the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide assay. Results: The antibacterial activity of the EETC was explored using disc diffusion and CFU measurements. The MIC and MBC of the EETC were 10 and 20 ㎍/ml, respectively. EETC treatment decreased insoluble glucan formation by S. mutans enzymes and also resulted in reduced glycosyltransferase B (gtf B), gtf C, gtf D, and fructosyltransferase (ftf), expressions on RT-PCR. In addition, at effective antibacterial concentrations, EETC treatment was not cytotoxic to gingival epithelial cells. Conclusion: These results demonstrate that the EETC is an effective anticaries ingredient with low cytotoxicity to gingival epithelial cells. The EETC may be useful in antibacterial oral hygiene products for the management of dental caries.
본 연구는 천연 식물 추출물을 이용하여 화장품 제형 내에서 천연 방부제로서 효능을 확인하기 위한 목적으로 진행하였다. 선별된 15종의 천연 식물 추출물을 이용하여 병원성 세균(Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli)과 효모균(Candida albicans), 곰팡이균(Aspergillus niger)에 대한 paper disc법(disc diffusion method)과 최소저해농도측정법(MIC)을 이용하여 항균 활성을 측정하였다. 그 결과 가자, 오배자 추출물은 그람 양성인 S. aureus와 그람 음성균인 P. aeruginosa, E. coli 에 대한 항세균 활성이 우수하였고, 계피 추출물은 효모균인 C. albicans와 곰팡이균인 A. niger에 대해 우수한 항진균 활성을 나타냈다. 최종 선별된 3종 외 식물추출물은 효과가 없었다. 항균 활성 효과가 우수한 최적 조합비로 구성된 가자, 오배자, 계피 추출물의 혼합 추출물을 화장품 제형에 첨가하여 제형 내 방부 활성을 측정한 결과 상업적으로 널리 사용되고 있는 파라벤 혼합 방부제와 유사한 정도의 방부 활성을 나타냄을 확인하였다. 결론적으로, 화학 방부제를 대신하여 천연 식물 추출물로만 이루어진 넓은 항균 스펙트럼을 갖춘 방부 시스템의 개발이 가능할 것으로 사료되며 최근 다양한 문제가 제기되고 있는 화학 방부제의 단점을 극복한 천연 방부제를 함유한 화장료의 개발에 응용 가능할 것으로 기대된다.
한방에서 사용되는 약재 중 가자와 지모, 단삼은 면역조절 및 항암효과, 항염증효과가 있다고 알려졌다. 그러나 비만세포와 관련된 아나필락스를 이해할 수 있는 세포학적 기전에 대한 가자와 지모, 단삼의 효과에 대해서는 알려진 바 없다. 본 연구에서는 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물이 아나필락시스 반응에 대해 어떠한 영향을 끼치는지를 조사하였다. 시험관내 실험과 생체 실험을 통하여, 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물이 compound 48/80에 의한 아나필락시스와 비만세포 활성화 및 IgE에 의한 피부반응을 관찰하였다. 실험결과는 다음과 같다. 1) 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물은 compound 48/80에 의한 전신성 아나필락시스와 귀부종 반응, IgE에 의한 피부반응을 억제하였다. 2) Compound 48/80에 의한 비만세포 탈과립과 흰쥐 복강 비만세포로부터 히스타민 유리가 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물 전처리에 의해 억제되었다. 3) Compound 48/80에 의한 흰쥐 복강 비만세포내로의 칼슘 유입이 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물 전처리에 의해 현저하게 억제되었다. 이상의 결과로 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물은 비만세포 탈과립과 비만세포로부터 히스타민 유리, 비만세포내로 칼슘유입을 억제함으로써 compound 48/80에 의한 아나필락시스와 IgE에 의한 피부반응을 억제한다는 것을 알 수 있었다. 이로써 가자와 지모, 단삼은 알레르기 질환에 대한 효과적인 치료제로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
가자 추출물을 흰쥐에 일정량 투여한 후 간장에 미치는 영향을 관찰할 목적으로 여러 가지 효소량의 변동을 검토하였다. 간 손상의 지표로 사용되는 AST, ALT활성을 측정한 결과 AST, ALT모두에서 정상군보다 300 mg/kg의 용량으로 2주 시료 투여한 군의 함량이 2배 이상 증가되는 것으로 나타났다. 가자 추출물이 지질과산화물 생성에 미치는 효과를 관찰한 결과, 300 mg/kg의 용량으로 2주 시료 투여한 군함량이 정상군에 비해 135.43%, 173.9% 정도 증가하는 결과를 나타내었다. 간 조직의 지질과산화물 반응에 관여하는 것으로 알려진 XO, AO, AD 및 AH활성에 대한 효과를 관찰한 결과 마이크로솜 분획에 존재하는 AD, AH의 활성은 저해 효과가 없었고, 세포질 효소인 XO, AO의 활성은 300 mg/kg의 용량으로 2주 시료 투여한 군 함량이 정상군에 비해 약 2배 증가됨을 볼 수 있었다. 가자 추출물에 의한 간 조직중 glutathione농도에 미치는 영향에 대해 관찰한 결과 2주 동안 300 mg/kg의 용량으로 투여한 군의 glutathione농도는 정상군에 비해 약 75% 감소하는 것으로 나타났다 가자 추출물 투여 후 glutathione의 함량 감소를 경감시키는 기전을 알아볼 목적으로 glutathione 합성에 관여하는 $\gamma$-GCS의 활성과 산화형 glutathione을 환원형 glutathione으로 환원시키는 GR의 활성을 관찰한 결과 정상군에 비해 GR이 56.6%, $\gamma$-GCS가 6.7% 정도 감소하는 것으로 나타났다. 이러한 glutathione의 함량 변동은 산화형 glutathione을 환원형 glutathione으로 환원시키는 GR의 활성에 영향을 주어 나타나는 결과로 생각된다. 가자 추출물이 지질과산화의 해독계에 미치는 영향을 관찰할 목적으로 catalase, GP 및 SOD의 활성을 측정한 결과 catalase, GP의 활성은 각각 77.5%, 64.3% 감소하는 결과를 나타냈으며, SOD의 활성은 정상군에 비해 약 3배 증가하는 것으로 나타났다.
Many herbs have been used as therapeutics in Korean traditional medicine. In view of their clinical indications, anti-oxidant activity may contribute to their pharmacological effects. However, anti-oxidant information on these plants has not been available. In this study, seventy herbs which have been used in Korean traditional medicine were selected and screened for anti-oxidant activity using their water extracts. The anti-oxidant activity was assessed by their ability to inhibit three oxidation reactions; luminol/Fenton reagent, 2, 7-dichlorodihydrofluorescein(DCHF)/Fenton reagent and DCHF/peroxynitrite. In each assay, 70 herbs were divided into two groups; anti-oxidant group which inhibited the respective oxidation reaction and was majority(about 60 herbs), and pro-oxidant group which enhanced the oxidation reaction but was minority(more or less 10 herbs). When the herbs were listed in the order of their anti-oxidant strength, the orders obtained from each assay were found to be quite similar. The upper top rankers(more or less 10 herbs) in each assay showed strong activity compared to the others. The uppermost rankers in each assay were Rubus coreanus Miquel/Rubus schizostylus(覆盆子), Schisandra chinensis Baillon/Schizandra chinensis(五味子) and Terminalia chebula Retziusl Terminalia chebula(訶子). Of the pro-oxidant herbs, about 4-5 herbs were strongly pro-oxidant, which enhanced the control oxidation reactions to 150-300%. But the meaning of this observation is not known since few of them in one assay were also anti-oxidant in other assays. The results obtained in the present study may serve as information for understanding pharmacological effects of these herbs and developing new drugs from them.
본 연구는 한방화장품의 원료로써 사용이 되는 약용식물들의 부위별 및 추출용매에 따른 추출물의 효능의 차이를 기술하였다. 기존의 단일성분 분석법보다 실제로 성분의 복합체인 추출물에 대하여 항산화와 UV흡수 관련 효능효과 시험법을 적용하였다. 약효를 가지는 약용식물들을 추출할 때 고려해야 할 조건이 있다. 같은 약용식물이라도 채취시기, 채취장소, 채취부위와 같은 채취조건들과 용매의 종류, 추출시간, 추출온도와 같은 추출조건들을 고려하여야 한다. 조건 중에서 추출용매와 채집부위는 효과에 있어서 매우 중요한 요인이다. 약용식물에 대한 관심이 증가하면서 여러 가지의 채취조건과 추출조건을 연구하여 한방원료의 개발에 있어 좀더 다양한 적용이 요청되고 있다. 본 연구에서는 약용과 식용으로 널리 사용되는 식물(Terminalia chebula, Syzygium aromaticum, Paeonia lactiflora, Morus alba, Scutellaria baicalensis)을 선정하여 추출용매와 채집부위를 변경시킴으로써 용매와 부위에 따른 효능의 차이를 확인하였다. 이 결과로 추출시 적당한 조건을 선택한다면 사용되는 약용식물의 양을 줄이거나 좀더 효과적인 결과를 얻을 수 있다.
정향피, 초두구, 복분자, 산사자, 가자육, 금앵자, 오배자의 7종에 대한 에탄올 추출물을 제조하여 10종의 공시균주에 대하여 paper disk method에 의한 항균활성을 측정하였다. 복분자, 가자육, 오배자 3종이 선발되었으며 이의 에탄올 추출물을 두부에 0.01%, 0.05 및 0.1%(w/w)의 농도로 첨가하여 $5^{\circ}C$에서 저장하면서 총균수를 측정한 결과, 저장 4일 정도에 부패에 도달하는 것으로 판단되었다. 총균수 그래프의 회귀방정식을 구하여 유통가능 기간을 산출하였을 때 가자육 추출물을 첨가한 처리구의 경우 0.01% 첨가 처리구가 대조구에 비하여 저장기간이 108.8% 연장된 것으로 측정되었으며, 0.05% 첨가 처리구는 117.3%, 0.1% 첨가 처리구는 132.6% 연장되는 효과가 있는 것으로 판단되었다. 3종의 추출물 중 가자육 추출물이 가장 저장성을 연장시키는 효과가 우수한 것으로 나타났으며 복분자, 오배자 추출물은 가자육 추출물에 비하여 그 효과가 다소 미약한 것으로 판단되었다.
One hundred and seventy crude drugs were screened for prolyl endopeptidase (PEP) inhibitors. Among them, 80% methanolic extract of 18 medicinal plants such as Polygonum cuspi data, Sanguisorba officinalis, Eugenia caryophyllata, Rubus coreanus, Cinnamomum cassia (Cassiae Cortex and Cinammomi Ramulus), Rheum palmatum, Ulmus pumila, Sorbus commixta, Areca catechu, Uncaria sinensis, Terminalia chebula, Caesalpinia sappan, Nelumbo nucifera, Machilus thunbergii, Paeonia moutan, Elscholtzia patrini and Cynomorium coccineum inhibited more than 70% of PEP activity at a concentration of 40 ppm. The active principles of P. moutan, M. thunbergii, T chebula, A. catechu, S. commixta, R. palmatum, R. coreanus, E. caryophyllata and P. cuspidata were transferred into organic solvents, which showed more than 75% inhibition at 5 ppm.
Methanol extracts from 450 plants were screened for muttidrug-resistance reversing activity using drug sensitive KB-3-1 and multidrug-resistant KB-Vl cells. Among them, the extracts of Cynanchum wilfordii, Torilis japonica, Celastrus orbiculatus, Melia toosendan and Teminialia chebula strongly potentiated vinblastine cytotoxicity in KB-Vl cells. But their cytotoxicities to both sensitive KB-3-1 and resistant KB-Vl cells were in the same order of magnitude. These results indicate that the above samples would contain the active principles which do not exert their ativity solely by cytotoxicity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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