Apoptotic death of articular chondrocytes has been implicated in the pathogenesis of osteoarthritis. Tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) has been used for several years as a marker enzyme of bone-resorbing osteoclasts. This study investigated the activity of TRAP in media of apoptotic cell death-induced canine chondrocyte. We exposed canine chondrocyte to capsaicin and the results showed that capsaicin induced cell death in a dose dependent manner. And we measured TRAP activity in media of chondrocyte death induced by capsaicin treatment and the results capsaicin significantly increased the activity of TRAP in media for dose dependent. We also investigated whether the combination treatment with capsaicin and TRAIL enhance apoptotic cell death in canine chondrocyte. We exposed canine chondrocyte to capsaicin for 24 hrs at the indicated dose, and then treated with recombinant TRAIL protein for 24 hrs. TRAIL alone did not induce cell death after 24 hours, but the combined treatment of both induced more cell death compared with capsaicin alone in a dose dependent manner. Also, the combination treatment with capsaicin and TRAIL increased the activity of TRAP in culture media. These results suggest that TRAP can flow out into extracellular after chondrocyte damage, and TRAP may be a successful biomarker for detection of joint disease such as osteoarthritis.
본 연구에서는 십자인대 손상견의 무릎관절액의 TRAP의 농도와 비교 할 수 있는 정상 관절액의 TRAP 농도의 지표를 제시 하기 위하여, 정상 무릎 관절액의 TRAP의 농도를 측정하였다. 십자인대 손상이 없는 23두 건강한 잡종견(14두 노령견과 9두 성견)을 실험견으로 선택하고 성별, 나이, 몸무게로 구별하였다. 무릎 관절액을 채취 한뒤, Lang method로 관절액의 TRAP을 측정하였다. 측정된 TRAP의 농도를 성별, 나이, 몸무게 등으로 구별하여 $Mean{\pm}SD$로 표시 하였으며, 유의성 차이를 T-test로 구별하였다. 노령견(14두, 2년이상) TRAP의 농도는 $0.083{\pm}0.039\;IU/ml(mean{\pm}SD$, 성견(9두, 2년 이하) $0.064{\pm}0.023\;IU/ml$, 대형견(15두, >22 kg) $0.075{\pm}0.028\;IU/ml$, 소형견(8두, <22 kg) $0.076{\pm}0.046\;IU/ml$, 중성화견(15두) $0.085{\pm}0.036\;IU/ml$, 중성화 되지 않은견(8두) $0.056{\pm}0.022\;IU/ml\;(Mean{\pm}SD)$로 나타났으며, 중성화 견과 중성화 되지 않은 견에서만 유의성 있는 차이 (P<0.05)가 보였다. 본 연구의 정상견에서 TRAP 농도는 십자인대의 손상견과 비교할수 있는 지표로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
Choi, Bohm;Kim, Tae-Gun;Han, Seung-Hee;Park, Yoon-Hee;Lee, Won
Journal of Korean Dental Science
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제5권1호
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pp.37-44
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2012
Purpose: Among the facilitation of tooth movement in adult orthodontic treatment methods, surgical approaches are gaining popularity but complications following mechanical bone reduction are a problem. In this study, tooth movement was observed after alveolar bone was chemically demineralized to verify whether tooth movement had been facilitated. Materials and Methods: Twelve rabbits were used. In the experimental group, the alveolar bone of the left first molar area was exposed and demineralized. Thirty seven percents phosphoric acid was applied for 5 minutes for demineralization. The opposite first molar area was used as control. Two teeth were pulled with 200 g force and 4 rabbits each were sacrificed at 3, 7, and 14 days after the force was applied. Histologic examination was done with hematoxylin and eosin and tartrate-resistant acid phosphatase staining. Result: The histologic examination results revealed more bone resorption in the demineralized area. As time passed, the number of osteoclasts increased in the compressed area. The amount of tooth movement was larger in the experimental group compared to the control group but the difference was not statistically significant. Conclusion: The demineralization with etchant resulted in limited bone resorption, more tooth movement and less damage of the cementum after applied orthodontic force.
골은 지속적으로 재형성이 일어나며, 오래된 골을 흡수하는 파골세포와 새로운 골을 생성하는 조골세포의 균형에 의하여 항상성이 유지된다. 골대사의 건전성을 측정하기 위한 골흡수 표시자에는 tartrate resistant acid phosphatase, pyridinium 연결부위, 콜라겐 telopeptide 등이 있으며, 골 형성 표시자로는 골 유래 alkaline phosphatase, osteocalcin, procollagen I extension peptide를 사용할 수 있다. 골밀도를 증진하기 위한 기능성 소재로는 milk basic protein, lactoferrin 등이 있으며, 우유의 유산균 발효과정에 의하여 생산되는 생리활성 펩타이드도 골밀도의 증진에 기여할 수 있다. Lactobacillus casei ATCC 393을 이용하여 생산한 발효분해물은 다양한 조골세포의 생화학적 지표 평가와 동물실험 결과를 근거로 할 때 조골세포의 증식과 분화를 촉진하고 파골세포의 활성을 억제시킴으로써 골대사를 개선할 수 있는 것으로 나타났다.
건강한 개의 혈액세포와 골수세포의 세포화학적 특성을 조사하였다. 이 실험에서 혈액과 골수 시료에 항응고제를 일체사용하지 않았으며 시료채취후 즉시 도말표본을 작성하여 30분 이내에 반응을 실시하였다. 이 실험의 결과는 아래와 같다. 1. alkaline phosphatase의 활성은 호산구계통과 간혹 전골수구에서 양성반응을 나타내었다. 2. acid phosphatase의 활성은 대부분의 계통의 세포에서 양성반응을 나타내지만 tartrate로 억제하면 호산구계만 양성반응을 나타내었다. 3. peroxidase 활성은 골수구계통의 모든 세포에서 양성반응을 나타내며 단구에서는 미약한 양성의 미세과립을 나타내었다. 4. naphthyl-AS-D-chloroacetate esterase활성은 호중구계 세포에서만 양성을 나타낸다. 5. $\alpha$-naphthyl acetate esterase활성은 단구와 일부의 임파구에서 양성을 나타낸다 6. Sudan black B 염색은 골수구계 세포와 단구계 세포에서 양성을 나타내었다. 7. $\beta$-glucuronidase 활성은 적혈구계를 제외한 모든 세포에서 양성반응을 나타내었다.
A pollen-specific cDNA clone, LMP50, was isolated from the mature pollen cDNA library of the Easter lily. The LMP50 transcript was highly abundant in mture pollen grains but not detectable in other organs. The LMP50 cDNA clone contains 1383 nucleotides and two open reading frames. The first codes for a peptide of 15 amino acid residues. The role of this peptide is nuclear. The second encodes a protein containing 329 amino acid residues. This protein exhibited a significant homology to human tartrate-resistant acid phosphatase and porcine uteroferrin. Both of these enzymes have been suggested to play a role in iron transport. Therefore, LMP50 may act as an iron carrier protein in mature pollen grains.
Objective : Ssangwha-tang is a traditional medicine formula widely prescribed for a decrease of fatigue after an illness in Korea. The aim of this study is to investigate the effect of Ssangwha-tang fermented by Lactobacillus fermentum (SF) on osteoclast differentiation in vitro and on bone metabolism of an ovariectomized rat in vivo. Methods : Tartrate-resistant acid phosphatase activity and staining were applied to evaluate the formation of osteoclasts. Ovariectomized rats were orally administrated with SF (30 ml/kg/day) for 12 weeks. Serum aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, total cholesterol, high-density lipoprotein-cholesterol, low-density lipoprotein-cholesterol, triglyceride, phosphate, calcium levels were determined. Effect of SF on bone loss were studied by histological analysis and the measurement of bone mineral density. Results : SF significantly inhibited tartrate-resistant acid phosphatase activity and formation of osteoclasts in RAW264.7 cells stimulated by receptor activator for nuclear factor ${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) ligand (RANKL). In addition, SF significantly decreased the level of triglyceride and increased the level of low-density lipoprotein. Moreover, the decrease of trabeculae of the femur was partially prevented in ovariectomized rats administrated with SF. Conclusions : SF treatment could prevent ovariectomy induced bone loss and its effects could be medicated by the inhibition of osteoclastogenesis.
본 연구는 전십자인대가 단열된 개의 슬관절액에서 tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) 와 cathepsin K의 변화를 알아봄으로서 십자인대에 관련된 질병 또는 십자인대 치료 실패에 따른 퇴행성관절염의의 조기 진단 및 치료에 관한 정보를 얻기 위하여 실시하였다. 실험동물로는 전방십자인대가 단열된 30두의 개와 정상 성견 8 두 그리고 어린 정상 개 9두를 사용하였다. 슬관절액 내의 TRAP 과 Cathepsin K의 변화를 확인하기 위하여 조직화학 염색과 면역조직화학염색을 실시하였다. 조직학적인 검사 결과 정상견에서는 TRAP과 Cathepsin K 세포들은 찾아보기 힘들었으나 전방십자인대가 단열된 개에 있어서는 TRAP 과 Cathepsin K 그리고 chondroid metaplasia가 중심부분에서 증가되고 있음을 관찰하였다. 이러한 결과로 보아 TRAP과 Cathepsin K 세포들은 전방십자인대가 단열 또는 단열 후 회복되는 과정에서 상호 보조적으로 관여하며 세포외 방출과 관계가 있는 것으로 생각된다.
Kim, Mi-Ri;Yang, Won-Kyung;Grzesik, Wojciech;Ko, Hyun-Jung
International Journal of Oral Biology
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제33권3호
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pp.113-116
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2008
Cementum is the mineralized tissue of the tooth. It is similar to bone in several aspects but it differs from bone. Human bone marrow stromal cells (BMSC) and human cementum derived cells (HCDC) (10,000 $cells/cm^2$) were plated in 6 well plates as feeder cells. The next day, mouse bone marrow cells (1.5 million $cells/cm^2$) were added. One group of these plates were incubated in serum-free conditioned medium (SFCM) generated from BMSC or HCDC supplemented with 2% FBS, parathyroid hormone (PTH), 1, 25 dihydroxyvitamin $D_3$ (Vit. $D_3$) and dexamethasone, or plain medium with the same supplements. Another group of plates were cocultured with BMSC or HCDC in plain medium supplemented with 2% FBS, PTH, Vit. $D_3$ and dexamethasone. Plates grown without SFCM or coculture were used as controls. After 10 days, the cells were stained for tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP). BMSC were found to support osteoclast formation under normal conditions. This was inhibited however by both SFCM generated from HCDC and also by coculture with HCDC. In addition, HCDC themselves did not support osteoclast formation under any conditions. Our results thus indicate that HCDC do not support osteoclast formation in vitro and that soluble factor (s) from HCDC may inhibit this process. In addition, we show that this inhibition also involves an active mechanism that is independent of osteoprotegerin, a feature that may distinguish cementoblasts from other cells present in periodontium.
본 연구에서는 마우스 골수유래 파골세포와 난소절제 동물모델을 이용하여 애엽 추출물이 골대사에 미치는 영향을 살펴보았다. 애엽 추출물이 파골세포의 분화 및 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 마우스 골수유래 전구세포에 M-CSF와 RANKL을 처리하여 파골세포로의 분화를 유도한 후, TRAP 염색법을 실시하고 TRAP 활성도를 측정하였다. 그 결과 애엽 추출물은 TRAP 양성 다핵세포의 형성과 TRAP 활성을 농도 의존적으로 감소시켰으며, 파골세포의 골흡수 또한 애엽 추출물의 최고농도($30\;{\mu}g/mL$) 처리 시약 90%까지 억제되는 것을 확인하였다. 난소절제 동물모델을 이용한 실험에서도 애엽 추출물이 난소절제에 따른 급격한 골밀도 감소를 막아준다는 사실을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 미루어 볼 때, 애엽 추출물이 에스트로겐 분비 감소로 인하여 급격한 골 손실이 나타나는 폐경기 여성의 골다공증 예방에 효과가 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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