The changes in expression of copper-zinc superoxide dismutase (CuZn-SOD), manganese superoxide dismutase (Mn-SOD) and glutathione peroxidase (GPX) in light-damaged rat retinas were examined. Sprague-Dawley rats (male, 6-weeks-old) were maintained on a cyclic photoperiod (12 hours light and 12 hours darkness) for 2 weeks. The illumination intensity during the light period was 80 lux. To induce light damage to the retina, a high-intensity illumination (3000-lux) was applied to the animals for 24 hours. After light exposure, the animals were returned to cyclic lighting. Eyes were enucleated 12 and 24 hours after light exposure started or 1,3, and 7 days after light exposure ended. Eyes were fixed and embedded in paraffin wax. Tissues were cut into 4${\mu}{\textrm}{m}$-thick sections. Sections were immunostained using antibody against CuZn-SOD, Mn-SOD, GPX and 8-hydroxy-deoxyguanocine (8-OHdG) as oxidative stress marker. 8-OHdG was observed in the outer nuclear layer (ONL) and retinal pigment epithelium (RPE) during light exposure. In light-damaged retinas CuZn-SOD labeling was up regulated in the ONL and RPE. Mn-SOD labeling was up regulated in rod inner segments (RIS) during light exposure and that in the RPE was up regulated after exposure. GPX labeling was observed in rod outer segments (ROS) during light exposure. GPX labeling was also observed in the RPE during and after light exposure. All three enzymes were observed in the outer retina, which suffered light damage, but occurred in defferent layers except within the RPE, in which case all three were expressed. These enzymes may play complementary roles as protective factors in light-damaged retinas.
Superoxide dismutase (SOD) removes damaging reactive oxygen species from the cellular environment by catalyzing the dismutation of two superoxide radicals to hydrogen peroxide and oxygen. Extracellular superoxide dismutase (EC-SOD) is a tetramer and is present in the extracellular space and to a lesser extent in the extracellular fluids. Increasing therapeutic applications for recombinant human extracellular superoxide dismutase (rEC-SOD) has broadened interest in optimizing methods for its purification, with a native conformation of tetramer. We describe a solid phase refolding procedure that combines immobilized metal affinity chromatography (IMAC) and gel filtration chromatography in the purification of rEC-SOD from Escherichia coli. The purified rEC-SOD tetramer from the $Ni^{2+}$-column chromatography is refolded in Tris buffer. This method yields greater than 90% of the tetramer form. Greater than 99% purity is achieved with further purification over a Superose 12PC 3.2/30 column to obtain the tetramer and specific activities as determined via DCFHDA assay. The improved yield of rEC-SOD in a simple chromatographic purification procedure promises to enhance the development and therapeutic application of this biologically potent molecule.
참돌꽃 유식물에서 줄기와 뿌리의 부위별로 나타나는 superoxide dismutase(SOD)의 활성과 환경 스트레스 또는 항산화분자 처리에 따른 SOD활성도를 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. SOD의 활성은 줄기보다는 뿌리에서 높았고 각 기부보다는 선단부에 이를수록 높았으며 이러한 현상은 유식물 생육의 초기보다 후기에 더 상승된 결과를 나타내고 있다. 또한 환경 스트레스에 대한 SOD의 활성도는 유식을 초기생육 상태에서는 NaCl또는 cadmium(Cd) 등 유해물질 처리 후 10 및 30% 정도 저해를 받고 있으나 생육 후기에 이를수록 처리된 유해인자에 의한 산화적 스트레스에 대하여 유식물은 자체의 SOD 활성 수준이 상향되는 방어능력을 보였으며 이러한 현상은 뿌리에서 더욱 현저하였다. SOD 활성도를 높이기 위해 항산화물질로 ascorbic acid를 처리한 유식물은 생육 후 최고 46%까지 높아짐을 보였으나 동시기의 스트레스 물질로 첨가한 cadmium 처리구에서 나타난 SOD 활성도에 비하여 유의할만한 상승효과의 차이를 보이지는 않았다. 이러한 결과는 참돌꽃 유식물 특히 뿌리부위는 항산화 기질의 처리 없이도 유해한 환경 인자에 노출되면 자체의 방어 수단으로 SOD 생성이 활발히 진행되고 있음을 시사하였다.
Park Soo Young;Kim Han Geu;Lee Soo Kyung;Ahan Jong Chan;Chung Tae Wook;Moon Jin-Young;Park Sun Dong;Kim June Ki;Choi Dall Yeong;Kim Cherl Ho;Park Won Hwan
동의생리병리학회지
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제17권1호
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pp.230-240
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2003
We investigated that Hwao-tang had various effects on stimulus-induced superoxide generation in human neutrophils. Hwao-tang significantly inhibited N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine-induced superoxide generation in a concentration-dependent manner, but not that induced by arachidonic acid. Also, Hwao-tang significantly reduced mouse paw oedema induced by carrageenan. The results suggest that protein tyrosine kinase participates in fMLP-mediated superoxide generation by Hwao-tang-treated human neutrophils. Also, the results indicate that Hwao-tang exerts anti-inflammatory effects related to the inhibition of neutrophil functions and of NO and prostaglandin E2 production, which could be due to a decreased expression of iNOS and COX-2.
시판되고 있는 두류 13종류의 70% 에탄을 추출물을 제조하여, 이들의 항산화 활성을 환원력, 지질과산화 억제 활성, superoxide radical 소저활성, hydroxyl radical 소거활성, mitomycin C로 유도된 DNA의 산화적 손상에 대한 억제활성을 지표로 조사하였다. 환원력은 예팥, 속피리, 유월콩 및 적두가 높았다. 지질과산화 억제능을 조사한 결과, linoleic acid 자동산화계를 이용한 실험계에서 모든 시료가 억제활성을 보인 반면, 토끼 적혈구막 지질과 산화에 대한 억제활성은 쥐눈이콩과 적두, 속피리에서만 관찰되었다. Superoxide radical 소거활성은 예팥, 나물콩, 적두, 쥐눈이콩에서 높게 나타났으며, hydroxyl radical 소거활성은 속피리, 청태, 예팥과 제비콩에서 높았다. Mitomycin C로 유도된 DNA의 산화적 손상에 대한 억제활성을 조사한 결과, 모든 품종들이 DNA의 산화적 손상을 억제할 수 있었으나, 특히 예팥, 쥐눈이콩, 나물콩, 녹두, 적두의 억제활성이 우수하였다. 이상의 실험결과에서 예팥, 적두, 쥐눈이콩, 속피리가 환원력, 지질과산화 억제, superoxide radical 및 hydroxyl radical 소거활성, DNA의 산화적 손상에 대한 억제활성 둥 항산화활성이 우수한 품종임을 알 수 있었다.
본 연구에서는 초산화칼륨이 포함된 화학 폐를 이용하여 이산화탄소를 산소로 전환시켰다. 우선 초산화칼륨을 수산화칼슘과 혼합하여 초산화칼륨의 반응성을 낮추었다. 기제조한 수산화칼슘-초산화칼륨 혼합물을 수분제거에 용이한 실리콘 고분자 매트릭스에 여러 가지 비율로 분산시켜 화학 폐를 제조하였다. 일반적으로 화학 폐에 있는 초산화칼륨의 양이 많아질수록 변환되는 이산화탄소와 발생되는 산소의 양이 증가하였다. 후리에 적외선 분광기 분석결과 화학 폐에 분산되어 있는 규소-산소의 단일결합이 $1,050cm^{-1}$에서 나타났다. 규소-산소 단일결합의 흡수도는 화학 폐에 있는 규소고분자의 함량이 높을수록 높았다. 본 실험결과는 이산화황이나 이산화질소같은 산성 가스의 전환에도 이용될 수 있음을 보여준다.
Cu, Zn-SOD 억제제인 diethyldithiocarbamate(DDC)가 paraquat(PQ)에 의한 세포독성에 미치는 영향을 배양한 백서 섬유아세포에 DDC(30 mM)를 전처치하여 PQ를 100${\mu}M$이 되게 첨가해 배양하여 생존한 세포를 Carmichael 등의 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide(MTT)법에 의해 측정한 결과 DDC 전처치 대조군과 DDC 전처치 PQ 첨가군 사이에 유의한 세포생존율의 차이는 없었다. Catalase 억제제인 3-amino-1,2,4-triazol(AT)를 전처치하여 PQ를 100${\mu}$M을 첨가하고 배양한 섬유아세포의 생존율을 MTT법에 의해 측정한 결과 AT 전처치 PQ 첨가군에서 유의한 세포생존율의 감소를 나타냈다. 섬유아세포를 PQ(200${\mu}$M)로 처치한 후 Cu, Zn-SOD를 첨가하여 생존한 세포수를 각각 MTT법에 의해 측정한 결과 Cu, Zn-SOD 첨가로 인한 세포생존율의 유의한 변화는 없었다. PQ 처치군에 catalase 첨가로 PQ처리 대조군에 비하여 생존한 세포수가 유의하게 증가되었다. 이상의 실험결과 일차배양한 백서 섬유아세포를 AT로 전처리하면 PQ독성이 증가되고, catalase 첨가로 독성이 감소되며, DDC전처치나 Cu, Zn-SOD첨가로 PQ에 의한 세포생존에 미치는 영향이 적은 점으로 미루어, PQ 독성은 surperoxide보다 과산화수소농도와 더 밀접한 연관성이 있는 것으로 추정된다.
개가시나무 가지의 에탄올 추출물에서 항산화활성을 관찰하였으며, 활성성분을 규명하기 위한 연구를 진행하였다. 그 결과, 4종류의 화합물을 분리하여 동정하였다. 분리 동정된 성분은 catechin(1), epi-catechin(2), tyrosol(3) 및 tiliroside(4)이다. 분리 성분의 항산화활성은 DPPH 라디칼 및 superoxide 음이온 라디칼 소거활성을 이용하여 측정하였다. 화합물 1, 2, 3, 4는 $100{\mu}L$/mL 농도에서 각각 94.2 %, 93.4 %, 33.6 %, 11.2 %의 DPPH 라디칼 저해활성을 나타내었다. 또한, 화합물 1, 2, 3, 4는 $200{\mu}L$/mL 농도에서 각각 60.2 %, 35.1 %, 20.6%, 4.5 %의 superoxide 음이온 라디칼 저해활성을 나타내었다. 화합물 $1{\sim}4$는 개가시나무에서는 처음으로 분리된 물질이다.
Purpose: This study was performed to evaluate anti-inflammatory effects of Jogantanggagambang(JGTG). Methods: In the study of anti-oxidant activities, JGTG was investigated by DPPH radical scavenger activity, superoxide dismutase activity and superoxide anion radical scavenger activity. In the study of anti-inflammatory effects, JGTG was investigated using cultured cells and murine models. As for the parameters of inflammation, levels of several inflammatory cytokines and chemical mediators which are known to be related to inflammation were measured in mouse lung fibroblast cells(mLFCs) and RAW264.7 cells. Results: 1. JGTG showed a safety in cytotoxicity and toxicity of liver. 2. JGTG effected scavenging activity on DPPH free radical, superoxide dismutase and superoxide anion radical. 3. JGTG in RAW 264.7 cell decreased IL-$1{\beta}$ mRNA expression, IL-6 mRNA expression, TNF-${\alpha}$ mRNA expression at 50, $100{\mu}g/m{\ell}$ and also decreased NOS-II mRNA expression at $100{\mu}g/m{\ell}$, and decreased COX-2 mRNA expression at 10, 50, $100{\mu}g/m{\ell}$. 4. JGTG in RAW 264.7 cell decreased significantly IL-$1{\beta}$, IL-6 and TNF-${\alpha}$ at 50, $100{\mu}g/m{\ell}$. 5. JGTG inhibited significantly IL-$1{\beta}$, IL-6 and TNF-${\alpha}$ production in serum of acute inflammation-induced mice. 6. JGTG decreased significantly IL-$1{\beta}$ mRNA production in spleen tissue. Conclusion: These results suggest that JGTG can be used for treating diverse female diseases caused by inflammation
Nitric oxide(NO) is synthesized via the oxidation of L-arginine by a family of nitric oxide synthases(NOS), which are either constitutive(cNOS) or inducible(iNOS). The induction of iNOS in tissues can lead to the sustained production of high concentrations of NO which may exert pro-inflammatory effects including vasodilation. edema, cyototoxicity, and its activity can be mediated by various pro-inflammatory cytokine, including interferon ${\gamma}(INF-{\gamma})$. tumor necrosis factor, IL- 1 and IL-6. The enzyme, iNOS, became a new target for pharmacologcal research with the aim to find new substances for the treatment of chronic inflammatory disorders. Murine macrophages produce large amounts of NO when activated with $TFN-{\gamma}$ plus LPS. The murine macrophage-like cell line, RAW 264.7, is a suitable cell model on which to perform vitro studies regarding the iNOS system. Semen jugrandis is a fatty walnut seed found in Korea. The walnut have been used in foik medicine to improve virility, to relieved asthma, and to relieve constipation. Sesquiterpenelactones were isolated from this plant. In the course of screening for NO inhibitory activity from medicnial plants, the aqueous extract of this plant was found to have a significant activity. The result are summarized as followings. 1. The viability of cells incubated in the presence of semen jugrandis increased mare than non incubated cells. 2. Semen jugrandis suppressed the production of NO in tissues dependent on density. 3. Semen jugrandis suppressed the induction of iNOS in tissues dependent on density can lead to reduced production of NO. 4. Semen jugrandis suppressed the production of superoxide in tissue depend on density. According to the above mentioned results, semen jugrandis could be applied production of NO and superoxide can lead to reduction of chronic inflammatary. And as a depence matter come into a virus of microbe and tumor cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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