한국작물학회 2017년도 9th Asian Crop Science Association conference
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pp.12-12
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2017
Genetic improvement in potato can be carried out through several approaches, as sexual crosses, somatic hybridization, mutation and genetic engineering. Although the approach is different, but the goal is the same, to get a superior cultivar. Mutation and genetic engineering are very interesting methods for genetic improvement of potato plants. Mutation by gamma-ray irradiation have been performed to get some new potato cultivars which are more resistant to disease and have higher productivity. We have carried out a mutation of some potato cultivars and obtained some excellent clones to be potentially released as new superior cultivars. By the mutation method, we have released one potato cultivar for the French fries industry, and we registered one cultivar of potato for chips, and two cultivar for vegetable potatoes. Actually we are doing multi-location trial for three clones to be released as new cultivars. Through genetic engineering, several genes have been introduced into the potato plant, and we obtained several clones of transgenic potato plants. Transgenic potato plants containing FBPase gene encoding for fructose bisphosphatase, have a higher rate of photosynthesis and higher tuber productivity than non-transgenic plants. This result suggests that FBPase plays an important role in increasing the rate of photosynthesis and potato tuber productivity. Some transgenic potatoes containing the Hd3a gene are currently being evaluated for their productivity. Over expression of the Hd3a gene is expected to increase tuber productivity and induce flowering in potatoes. Transgenic potato plants containing MmPMA gene encoding for plasma membrane ATPse are more tolerant to low pH than non-transgenic plants, indicating that plasma membrane ATPase plays an important role in the potato plant tolerance to low pH stress. Transgenic potato plants containing c-lysozyme genes, are highly tolerant of bacterial wilt diseases caused by Ralstonia solanacearum and bacterial soft rot disease caused by Pectobacterium carotovorum. Expression of c-lyzozyme gene plays an important role in increasing the resistance of potato plants to bacterial diseases.
최근 GMO 작물의 재배, 생산이 날로 늘어나며 GMO 작물이 환경에 미칠 수 있는 많은 가능성들이 대두되고 있다. 특히 GMO 작물과 야생종과의 자연교잡에 의한 유전자 전이로, 잡초화의 문제점이 제기되며 생태계의 변화 및 파괴의 위험성이 우려되고 있다. 본 실험에서는 GM벼와 야생 및 근연종 사이의 교잡가능성 및 유전자 전이율을 조사하기 위한 유전자 이동의 분석 체계를 확립하고자 하였다. 벼의 개화시기에 GM벼와 야생 및 근연종 간의 인공교배 후 수확한 교잡 추정 종자를 발아시켜서 제초제를 처리하여 교잡종자를 선별하였다. 또한 GM 벼 및 야생 근연종벼들 간의 RAPD PCR 분석을 통해 선별한 marker를 사용하여 낙동 교잡벼와 샤레 교잡벼가 GM 벼와 교배된 식물체임을 확인하였다. PCR 분석을 수행한 결과 GM벼에서 도입된 trehalose-6-phosphate phosphatase (TPP) 유전자와 선별marker로 사용된 bar유전자가 GM벼 뿐만 아니라 샤레 교잡벼에도 존재하였으며, 결과적으로 GM벼의 bar 및 tpp 유전자가 잡초성벼인 샤레 교잡벼에 전이되었음을 검증할 수 있었다.
Methylprednisolone (MPD) is a synthetic glucocorticoid drug used in treatment of many neurological diseases and neurotraumas, including spinal cord injuries. Little is known of the mechanism of MPD in neuronal cells, particularly the genetic expression aspect. DD-PCR was used in identification of genes expressed during MPD treatment of PC12 cells. We have isolated 3 predicted up- or down-regulated genes, which are differentially expressed in neurons by MPD. One of these genes, USP16 (ubiquitin specific protease 16), is the deubiquitinating enzyme that is up-regulated by MPD in neurons. In order to observe the effect of MPD on USP16 gene expression, PC12 cells were treated under several experimental conditions, including endoplasmic reticulum stress drugs. We have isolated the total RNAs in PC12 cells and detected USP16 and ER related genes by RT-PCR. Because its expression pattern is similar to expression of ER chaperons, USP16 gene expression is strongly associated with unfolded protein response. A meaningful negative effect on each tissue treated by methylprednisolone is not shown in vivo. USP16 gene expression is suppressed by LY294002 (phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor), which suggests that USP16 gene expression is regulated by the phosphatidylinositol 3-kinase pathway.
We previously demonstrated that root colonization of the rhizobacterium, Pseudomonas chlororaphis O6, induced expression of a galactinol synthase gene (CsGolS1), and resulting galactinol conferred induced systemic resistance (ISR) against fungal and bacterial pathogens in cucumber leaves. To examine the role of galactinol on ISR, drought or high salt stress, we obtained T-DNA insertion Arabidopsis mutants at the AtGolS1 gene, an ortholog of the CsGolS1 gene. The T-DNA insertion mutant compromised resistance induced by the O6 colonization against Erwinia carotovora. Pharmaceutical application of 0.5 - 5 mM galactinol on roots was sufficient to elicit ISR in wild-type Arabidopsis against infection with E. carotovora. The involvement of jasmonic acid (JA) signaling on the ISR was validated to detect increased expression of the indicator gene PDF1.2. The T-DNA insertion mutant also compromised tolerance by increasing galactinol content in the O6-colonized plant against drought or high salt stresses. Taken together, our results indicate that primed expression of the galactinol synthase gene AtGolS1in the O6-colonized plants can play a critical role in the ISR against infection with E. carotovora, and in the tolerance to drought or high salt stresses.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제9권2호
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pp.235-239
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2004
Drosophila melanogaster heat shock protein 70 gene promoter (Dhsp70p) is widely used in transgenic insect to drive exogenous gene, and the homologous region 3 from Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPVhr3) functions as an enhancer for several promoters. To test whether BmNPVhr3 can enhance the Dhsp70ps transcriptional activity, the reporter plasmids, which contain the Dhsp70p, the reporter $\beta$-galactosidase gene with SV40 terminator and BmNPVhr3 fragment, are constructed and transfected into the insect cell lines (Bm-N cells and Sf-21 cells) by lipofectin-mediated method. The results from the transient expression assay show that BmNPVhr3 significantly increases transcriptional activity of Dhsp70p both under the normal condition and under the heat-shock treatment, although the effects are significantly different between in Bm-N cells and in sf-21 cells. The enhancing behavior of BmNPVhr3 on the Dhsp70p is in an orientation-independent manner. Meanwhile, the effects of heat-shock treatment on Dhsp70p alone or Dhsp70p/BmNPVhr3 combination present no significant difference, indicating that BmNPVhr3 only enhances the transcriptional activity of Dhsp70p, but cant alter its characteristic of the response to the heat-shock stress. The above results suggest that the Dhsp70p/BmNPVhr3 combination is more effective one to drive exogenous gene for transgene or stable cell expression system in insects.
Chironomous is aquatic insect belonging to order Diptera, family Chironomidae. Their larval stage can be found mainly in aquatic benthic environment, hence good model organism to study environmental toxicology assessments and consider as useful bio indicators of contamination of the aquatic environment. In this study, Chironomus Heat Shock Proteins, Cytochrome 450, Glutathione S-transferase, Serine-type endopeptidase gene expressions were compared between polluted field areas (Chironomus plumosus) and under laboratory conditions (Chironomus riparious) to investigate molecular indicators for environmental contaminant stress assessment. Heavy metal (Al, Fe, Mn, Cu, Cr, Zn, Se, Pb, As, Cd) concentrations in sediments collected from three study areas exceeded the reference values. Moreover, HSPs, CYP450 and GST gene expression except SP for C. plumosus showed higher expression than C. riparious gene expression. Similar gene expression pattern was observed in C. riparious that exposed environment waters up to 96 h when compared to C. plumosus exposed to waters that grown in lab conditions. In summary, this comparative gene expression analysis in Chironomous between field and laboratory condition gave useful information to select candidate molecular indicators in heavy metal contaminations in the environment.
No, Jin Gu;Lee, Haesun;Lee, Na Hyun;Sun, Wu-Sheng;Hwang, In-Sul;Lee, Minguk;Oh, Keon Bong
농업과학연구
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제48권2호
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pp.353-365
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2021
Previously, we reported that tissue factor (Tf) was included in the list of differentially expressed genes as an upregulated gene in a rejected porcine heart after xenotransplantation into monkey. In this study, we analyzed that expression of Tf in aortic endothelial cells (pAEC) isolated from alpha 1,3-galactosyltransferase knockout pig in response to allogeneic porcine serum and xenogeneic human serum. The consequence was significant upregulation of Tf expression by responding to human serum compared with porcine serum. To analyze the function of Tf gene as a promoter, we constructed reporter vectors for expression of luciferase linked to 1,246 and 787 base pairs of porcine Tf (pTF1246 and pTF787), and 535 base pairs of human TF (hTF535) sequences including putative promoter regions and AP-1 biding site at the 5' end. The reporter vectors were transfected into pAEC including cytomegalovirus enhancer/chicken β-actin (CAG)-luciferase vector as a control. Luciferase assay showed that all of the promoters were insufficient to express luciferase compared with CAG promoter in basic culture conditions. Notably, pTF1246, pTF787, and hTF535 led to a significant increase of luciferase expression in response to human serum compared with porcine serum while no change of CAG. pTF1246 and pTF787 showed higher expression than hTF535. Taken together, our findings suggest that pTF1246 and pTF787 promoters could mediate target gene expression specifically at xenogeneic stress condition.
Alfalfa (Medicago sativa) is an important food and feed crop which rich in mineral sources. The WUSCHEL-related homeobox (WOX) gene family plays important roles in plant development and identification of putative gene families, their structure, and potential functions is a primary step for not only understanding the genetic mechanisms behind various biological process but also for genetic improvement. A variety of computational tools, including MAFFT, HMMER, hidden Markov models, Pfam, SMART, MEGA, ProtTest, BLASTn, and BRAD, among others, were used. We identified 34 MsWOX genes based on a systematic analysis of the alfalfa plant genome spread in eight chromosomes. This is an expansion of the gene family which we attribute to observed chromosomal duplications. Sequence alignment analysis revealed 61 conserved proteins containing a homeodomain. Phylogenetic study sung reveal five evolutionary clades with 15 motif distributions. Gene structure analysis reveals various exon, intron, and untranslated structures which are consistent in genes from similar clades. Functional analysis prediction of promoter regions reveals various transcription binding sites containing key growth, development, and stress-responsive transcription factor families such as MYB, ERF, AP2, and NAC which are spread across the genes. Most of the genes are predicted to be in the nucleus. Also, there are duplication events in some genes which explain the expansion of the family. The present research provides a clue on the potential roles of MsWOX family genes that will be useful for further understanding their functional roles in alfalfa plants.
Glutaredoxin (Grx) is a small, heat-stable redox protein acting as a multi-functional glutathione (GSH)-dependent disulfide oxidoreductase. We have cloned the monothiol Grx5 gene from the genomic DNA of the fission yeast Schizosaccharomyces pombe. It has 1,904 bp, with one intron, and encodes a putative protein of 146 amino acids with a molecular mass of 16.5 kDa. Recombinant Grx5 produced functional Grx in S. pombe cells. NO-generating sodium nitroprusside (SNP, 1.0 and 2.0 mM) and potassium chloride (KCl, 0.2 and 0.5 M) increased the synthesis of ${\beta}$-galactosidase from a Grx5-lacZ fusion gene, and transcription of Grx5 was also enhanced by SNP and KCl. Synthesis of ${\beta}$-galactosidase from the Grx5-lacZ fusion was lower in Pap1-negative TP108-3C cells than in wild type KP1 cells, and when Pap1 was overproduced in KP1 cells, the level of ${\beta}$-galactosidase increased. We also found that Pap1 is involved in the induction of Grx5 by SNP and KCl. S. pombe Grx5 may play a crucial role in responses to nitrosative and osmotic stresses.
Reactive oxygen species (ROS) are very harmful to living organisms due to the potential oxidation of membrane lipids, DNA, proteins, and carbohydrates. transformed E.coli strain QC 871, superoxide dismutase (SOD) double-mutant, with three sequence variant MnSOD1, MnSOD2, and MnSOD3 manganese superoxide dismutase (MnSOD) gene isolated from wheat. Although all QC 871 transformants grown at $37^{\circ}C$ expressed mRNA of MnSOD variants, only MnSOD2 transformant had functional SOD activity. MnSOD3 expressed active protein when grown at $22^{\circ}C$, however, MnSOD1 did not express functional protein at any growing and induction conditions. The sequence comparison of the wheat MnSOD variants revealed that the only amino acid difference between the sequence MnSOD2 and sequences MnSOD1 and 3 is phenylalanine/serine at position 58 amino acid. We made MnSOD2S58F gene, which was made by altering the phenylalaine to serine at position 58 in MnSOD2. The expressed MnSOD2S58F protein had functional SOD activity, even at higher levels than the original MnSOD2 at all observed temperatures. These data suggest that amino acid variation can result in highly active forms of MnSOD and the MnSOD2S58F gene can be an ideal target used for transforming crops to increase tolerance to environmental stresses.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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