정자의 운동개시는 수정시에 정자와 난자가 만나기 위한 전제조건이다. 동물의 정자는 CAMP와Ca2'의 조절기구에 의해서 정자의 운동개시가 일어난다. 정자운동 활성 및 개시를 위한 세포 신호전달기구는 멍게류와 연어과 어류에서 많은 연구가 이루어져 왔다. 멍게류의 경우, 난에서 분비되는 정자 활성 및 유인물질(sperm-activating and -attracting factor)은 정자 활성 및 난으로의 유인을 위하여 외부의 $Ca^{2+}$을 요구한다. 한편 연어과 어류의 정자에서는 Cyclic AMP 의존형의 단백질 인산화가 정자 운동개시 기구에 관여한다. 방정된 정자 주위의 $K^{+}$ 농도의 감소는 특정한 $K^{+}$ channel 및 dihydropyridine 감수성의 L-/T- type $Ca^{2+}$ channel을 통한 $K^{+}$ 유출과 $Ca^{2+}$ 유입에 의해 세포막의 과분극과 세포내 $Ca^{2+}$ 이온의 농도증가를 가져온다. 세포막의 과분극에 의해서 합성된 cyclic AMP는 정자 운동개시의 주요기구인 cyclic AMP의존형의 단백질 인산화를 유도한다.
정자를 매개체로 한 유전자 전이는 형질 전환 동물의 생산을 위한 가능성 있는 간단한 방법이다. 또한 세포질내 정자 주입법에 의한 외래 유전자의 전이에 의한 형질 전환 동물의 생산이 최근에 보고되었다. 본 연구에서는 정자를 EGFP유전자와 공배양한 후 이를 난모세포내에 미세 주입한 다음, 수정란의 발달과 EGFP유전자의 발현을 조사하였다. 돼지 난자에 정자, 세포질막이 파괴된 정자 또는 정자를 주입하였다. 주입 후 수정된 난자는 NCSU23 배양액에서 배반포까지 배양하였으며, 배발생율과 EGFP 유전자의 발현을 연구하였다. 정자를 미세 주입한 결과 난할율은 67.0%로 정자두부를 미세주입한 난할율인 59.7%보다 높았고, 수정란의 EGFP 유전자 발현율은 각각 42.1와 20.0%로서 전자가 유의하게 높았다. 세포질막을 파괴하기 위해 다른 방법들로 정자를 처리하여 주입하였을 시 구정란의 배발생율에 영향을 주지 않았다 정자, 세포막이 파괴된 정자를 주입하여 배반포 발생율을 조사한 결과, 15.0과 14.2%로서 유의차가 없었다. 동결융해하거나 Triton X-100으로 처리한 정자를 주입하여, EGFP 발현율을 조사한 결과, 동결융해 정자를 사용했을 때의 성적이 38.4%로 타군의 성적인 22.4%에 비해 유의하게 높았다. 미세 주입에 앞서 정자는 EGFP 유전자의 0.01 ng/${\mu}\ell$ 부터 1 ng/${\mu}\ell$까지의 여러 농도로 배양되었다. 그러나 난할율을 조사한 결과 EGFP 유전자의 농도 차이에 따른 유의차가 없었다. 정자 배양액에 첨가된 EGFP 유전자의 농도가 0.1 ng/$m\ell$일 때 EGFP 발현율은 37.4%로서 가장 높은 결과를 보였다. 따라서 본 연구의 결과에 의하면 세포질막을 제거한 정자에 외래 유전자가 묻게 되며, 이 정자는 외래유전자를 수정란내로 옮겨 매개체로서의 역할이 가능할 것으로 생각된다.
This study was designed to determine whether low-density lipoporoteins (LDL) extracted from egg yolk in extender improve the function of Korean Jeju Black Bull semen. The semen was cryopreserved with 5% ethylene glycol (EG) or 7% glycerol (G) extenders containing 10% egg yolk (EY), 4% LDL and 5% EY or 8% LDL. Frozen-thawed sperm were evaluated sperm motility, viability, membrane integrity and acrosome integrity. Post-thawed sperm motility has been significantly higher (p<0.05) in 4% LDL + 5% EY ($69.00%{\pm}4.18$; EG and $63.00%{\pm}9.75$; 7% G) than 8% LDL ($57.00%{\pm}5.70$; EG and $52.00%{\pm}4.47$;G). Treatment of 4% LDL + 5% EY-EG ($66.85%{\pm}5.06$) has been significantly improved sperm viability compared to other treatments except 10% EY - EG. Moreover, in membrane integrity, swollen sperm ratio has been only significantly increased (p<0.05) in 4% LDL + 5% EY - EG ($64.65%{\pm}6.10$) among all treatments. In assess to detect acrosome integrity, especially, AR pattern ratio has been significantly decreased (p<0.05) in 4% LDL + 5% EY - EG among all treatments. In sperm viability as time passes, between 4% LDL + 5% EY and 10% EY, there was no significant difference, but 8% LDL was significantly decreased sperm viability in EG (1 and 2 hrs) and G (30 min, 1, 2, 5 and 12 hrs) extender. However, there were no significant differences among all treatments except 8% LDL-G in sperm membrane integrity. 8% LDL-G has been significantly decreased swollen sperm ratio at 5 hrs after thawed. It is concluded from these results that 4% LDL + 5% EY to the freezing extender showed more positive effect on the frozen-thawed spermatozoa in Korean Jeju Black bull.
Phthalate는 내분비 교란물질로 호르몬의 변화, 에스토젠, 앤드로젠, 갑상선 호르몬의 분비를 방해한다. 또한, 인간과 동물에서 심혈관질환, 대사작용, 면역 및 번식체계에 영향을 끼친다. Curcumin은 항산화물질로 항염증 활성 및 항암작용에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 phthalate가 정자의 운동성, 생존율, 미토콘드리아 활성 및 세포막 기능에 미치는 영향을 알아보고자 실시하였다. 또한, curcumin을 처리하여 phthalate에 노출된 정자에 미치는 영향을 분석하였다. 정자의 운동성과 생존율은 di-n-butyl phthalate (DBP), mono-n-butyl phthalate (MBP) 및 di-2-ethylhexyl phthalate (DEHP)을 처리하였을 때 감소하였다(p<0.05). Phthalate는 정자의 미토콘드리아 활성 및 세포막의 기능을 감소시켰다(p<0.05). 그러나, 정자의 운동성과 생존율은 curcumin을 처리하지 않은 것보다 처리한 정자에서 높게 나타났으며(p<0.05), 정자의 미토콘드리아 활성 및 세포막 기능에서도 높게 나타났다(p<0.05). 결론적으로, phthalate는 정자의 생존율과 세포의 기능에 영향을 미칠 수 있고, 이로부터 세포의 기능을 보호하기 위해서는 curcumin의 처리가 필요 할 것으로 생각된다.
The MTT assay is one of superior evaluation methods widely used to analyze the viability of metabolically active cell. It can be used to determine the percentage of viable sperm through measurement of the reduction of MTT granules at mitochondria in sperm tail. The purpose of this study is to determine the optimal condition of a simple and easy MTT assay to validate boar sperm viability and compare the accuracy of this test with microscopic examination. The MTT reduction rate for sperm viability were analyzed in microtiter plates (96 well) from 1 hr to 5 hr incubation periods at $37^{\circ}C$ using spectrophotometer (microplate reader) at 550 nm wavelength. The remainder of semen sample was simultaneously examined to compare the correlation of accuracy between MTT assay and other sperm parameters. Those sperm parameters were included the motility, survival rates, membrane integrity, mitochondria activity and acrosome integrity. The OD values of MTT assay (MTT reduction rates) did not greatly change at 1 hr to 5 hr incubation periods in different proportion of live and freeze-killed sperms (dead sperm). The MTT reduction rates or survival rates were decreased according to the different concentration of live and dead sperm. The linear regression at 1 hr and 4 hr incubation periods in sperm MTT assay was y=291.55x-72.176 and y= 180.64x-44.569, respectively. There are high correlation between 1 hr and 4 hr incubation periods (p<0.001). The results of MTT assay and other sperm parameters has a positive correlation (p<0.01 or 0.05). The correlation coefficients for MTT assay was 0.88115 for motility, 0.89868 for survival rates, 0.91722 for membrane integrity and 0.77372 for acrosome integrity, respectively. In conclusion, the MTT assay can be used as a reliable and efficient evaluation method for boar sperm viability. It can be use practical means to evaluate the quality of boar sperm by a fast, inexpensive and easy method.
Sa, Soo-Jin;Kim, In-Cheul;Choi, Sun-Ho;Hong, Joon-Ki;Kim, Du-Wan;Cho, Kyu-Ho;Kim, Young-Hwa;Chung, Ki-Hwa;Park, Jun-Cheol
한국수정란이식학회지
/
제28권4호
/
pp.349-353
/
2013
The objective of this study was to compare the effect of semen extenders on the sperm motility, viability, acrosome integrity and functional integrity of plasma membrane (HOST: hypo-osmotic swelling test) during liquid preservation of Korean Native boar semen. In this experiment, semen was diluted in Androhep plus, Beltsville Thawing Solution (BTS), ModenaTM, Seminark and Vitasem LD. Sperm-rich fractions were collected from three Korean Native boars and sub-samples were diluted ($30{\times}10^6$ spermatozoa/ml) in different semen extenders. Semen samples were stored at $17^{\circ}C$ for 96 hours. On everyday (0, 24, 48, 72, 96 h) after storage, the sperm characteristics relevant for fertility, such as sperm motility, viability, acrosome integrity and HOST positive were evaluated. The motility of spermatozoa stored in different extenders was no significantly different among other extenders (P>0.05). Also, no difference was observed among samples processed with different extenders in the percentage of sperm viability, acrosome integrity and HOST positive. All extenders maintained a high percentage (70%) of sperm motility, viability and acrosome integrity through 96 h of storage. The result of this study show that there was no significant differences among extenders in their capacity to preserve motility, viability and membrane integrity of spermatozoa from normal, fertile Korean Native boars for 96 h of liquid preservation at $17^{\circ}C$.
본 연구는 붉은머리오목눈이(Paradoxornis webbiana)의 정자변태 과정을 알아보기 위하여 전자현미경으로 세포분화 단계에 따른 세포구조물의 특징을 기초로 하여 관찰한 결과 정자변태의 전과정을 10단계로 나타내었다. 염색질의 변화는 골지기에서 균질한 섬유상의 형태가 두모기에서는 서서히 응축하여 첨체기에 막대상으로 응축되고 성숙기에 이르러 더욱 응축되고, 균질화되어 완전한 핵을 형성하였다. 꼬리의 형성시기는 초기 골지단계에서 시작하여 성숙후기에 완료되었다. 축사는 9+2구조이며, 미토콘드리아 다발은 2개가 1조를 이루어 축사를 중심으로 $15^{\circ}$ 각도로 규칙적으로 배열되어 있었다. 그리고 microtubules들이 미토콘드리아 외막을 둘러싸고 있었다 정자의 파동막의 형태는 S자형으로 정자원형질막을 둘러싸고 있었다.
Objective: This study was conducted to investigate the effect of L-carnitine on the pig semen characteristics during storage. Methods: Spermatozoa samples were examined for spermatozoa quality and then randomly divided into 5 groups: 0 (control), 12.5, 25, 50, and 100 mM L-carnitine. Sperm motility, plasma membrane integrity and antioxidant parameters (total reactive oxygen species, total antioxidant capacity, and malondialdehyde) were evaluated after 0, 3, 5, and 10 day cooled-storage at 17℃. Moreover, ATP content, mitochondria activity as well as sperm-binding and in vitro fertilizing ability of preserved boar sperm were also investigated. Results: Supplementation with 50 mM L-carnitine could effectively maintain boar sperm quality parameters such as sperm motility and membrane integrity. Besides, we found that L-carnitine had positive effects on boar sperm quality mainly through improving antioxidant capacities and enhancing ATP content and mitochondria activity. Interestingly, by assessing the effect of L-carnitine on sperm fertility and developmental potential, we discovered that the extender containing L-carnitine could improve sperm quality and increase the number of sperms bounding to zona pellucida, without improving in vitro fertility and development potential. Conclusion: These findings suggested that the proper addition of L-carnitine to the semen extender improved boar sperm quality during liquid storage at 17℃.
Su, Jie;Wang, Caiyun;Song, Yongli;Yang, Yanyan;Cao, Guifang
Animal Bioscience
/
제35권9호
/
pp.1351-1359
/
2022
Objective: The objective of this study was to analyse the differentially abundant proteins caused by freeze-thawing of ram sperm and explore candidate proteins of interest for their ability to improve ram sperm cryopreservation outcomes in vitro. Methods: Sperm were from three mature Dorper. Fresh and frozen sperm proteins were extracted, and the differentially abundant proteins were analysed by mass spectrometry. Among these proteins, lactoferrin (LTF) was selected to be added before cryopreservation. Next, sperm samples were diluted in Tris extender, with the addition of 0, 10, 100, 500, and 1,000 ㎍/mL of LTF. After thawing, sperm quality was evaluated by motility, plasma membrane integrity, mitochondrial activity and reactive oxygen species (ROS). Results: Cryopreservation significantly altered the abundance of 40 proteins; the abundance of 16 proteins was increased, while that of 24 proteins was decreased. Next, LTF was added to Tris extender applied to ram sperm. The results showed that sperm motility and plasma membrane integrity were significantly improved (p<0.05) by supplementation with 10 ㎍/mL LTF compared to those in the control group. There was no significant difference in mitochondrial activity between the 0 ㎍/mL group and other groups (p>0.05). Supplementation of the cryoprotective extender with 10 ㎍/mL LTF led to decreased ROS levels compared with those in the control and other groups (p<0.05). Conclusion: The LTF is an important protein during cryopreservation, and the addition of 10 ㎍/mL LTF to a cryoprotective extender can significantly improve the function of frozen ram sperm.
Zhendong Zhu;Haolong Zhao;Qitai Yang;Yajing Li;Ruyuan Wang;Adedeji Olufemi Adetunji;Lingjiang Min
Animal Bioscience
/
제37권5호
/
pp.852-861
/
2024
Objective: The present study aimed to investigate the effect of β-nicotinamide mononucleotide (NMN) supplementation on ram sperm quality during storage at 4℃ in vitro. Methods: Tris-citric acid-glucose solution containing different doses of NMN (0, 30, 60, 90, and 120 µM) was used to dilute semen collected from rams and it was stored at 4℃. Sperm motility, plasma membrane integrity as well as acrosome integrity were evaluated at 0, 24, and 48 h time points after storage at 4℃. In addition, sperm mitochondrial activity, lipid peroxidation (LPO), malondialdehyde (MDA) content, reactive oxygen species (ROS) content, glutathione (GSH) content, superoxide dismutase (SOD) activity, and apoptosis were measured at 48 h time point after storage at 4℃. Results: Results demonstrate that the values obtained for sperm motility, acrosome integrity, and plasma membrane integrity in the NMN treatments were significantly higher than control (p<0.05). The addition of 60 µM NMN significantly improved ram sperm mitochondrial activity and reduced LPO, MDA content, and ROS content compared to control (p<0.05). Interestingly, sperm GSH content and SOD activity for the 60 µM NMN treatment were much higher than those observed for control. NMN treatment also decreased the level of Cleaved-Caspase 3, Cleaved-Caspase 9, and Bax while increasing Bcl-2 level in sperm at 48 h time point after storage at 4℃. Conclusion: Ram sperm quality can be maintained during storage at 4℃ with the addition of NMN at 60 µM to the semen extender. NMN also reduces oxidative stress and apoptosis. Overall, these findings suggest that NMN is efficient in improving the viability of ram sperm during storage at 4℃ in vitro.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.