The plant Empetrum nigrum, valued in the traditional system of medicine, is well known for its antibacterial, antifungal, and antioxidant properties. In the present work, the effect of removal of shoot apical meristem (SAM) on shoot proliferation was studied. It was observed that removal of SAM promoted shoot proliferation whereas intact tip resulted in higher survival percentage. Further, the effect of different concentrations of BA on above was also studied. During root formation the effect of light quality after treatment with IBA was investigated. For rooting, continuous red light without IBA resulted in maximum rooting percentage. The above factors when taken into consideration during micropropagation of this endangered plant can result in healthier plantlets. The results show that the species could be successfully conserved by in vitro propagation system.
아배양을 통한 물박달나무 성숙목의 기내증식은 DKW 배지에서 양호하였다. 이 배지는 다른 두 배지보다 줄기증식 및 줄기생장이 양호하여 물박달나무의 적정 배지로 생각되었다. DKW 배지에서 액아배양과 정아배양에는 큰 차이는 없었으나 증식에는 액아배양이, 생장에는 정아배양이 다소 양호하였다. 한편 1/2 MS 배지에서는 절편기부에 callus가 직경 1.0cm이상 지나치게 형성되어 줄기신장을 억제하였고, WPM에서는 줄기형태는 정상이나 생장이 저조하여 물박달나무의 아배양 배지로는 부적당하였다. 발근은 NAA 처리가 IBA 보다 효과적이었다. l/2 DKW 배지에 1.0 mg/L NAA 처리로 80%의 기내발근 되었으며 유도된 뿌리수도 많았다 얻어진 줄기는 직접 기외삽목도 가능하였는데, 이 같은 결과는 물박달나무 성숙목의 효율적인 기내번식이 가능함을 시사한다.
본 실험은 희귀 및 멸종위기 식물인 미선나무의 효과적인 증식을 위하여 줄기 증식, 생장 및 발근에 미치는 절편의 위치 효과 및 치상 방법의 효과를 구명하기 위해 실시되었다. 줄기유도는 BA를 처리한 액아절편 배양이 효과적이었으며 절편 당 2.4개의 줄기가 유도되었다. 정아 및 액아절편을 BA 1.0 mg/L를 전처리하여 수평과 수직으로 치상하였을 때 줄기유도는 액아 절편의 수직치상으로 절편 당 2.5개로 가장 좋았다. 반면 줄기의 생장, 발근 및 뿌리 발달은 정아절편의 수직치상에서 양호하였고 BA의 전처리 시간이 길어질수록 발근이 억제되는 경향을 보였다. 기내증식된 줄기의 정아 및 액아를 절편으로 기외에서 미세삽목(micro-cutting)을 실시하여정아절편에서 100% 발근되었고, 뿌리수는 개체 당 평균 6.2개로 가장 양호하였다. 미세삽목묘는 온실에서 95% 이상 순화되었다. 이상의 결과로 볼 때 미선나무의 기내 증식은 액아를 절편으로 BA 처리 후 수직 치상하는 방법이 효과적이며, 줄기의 생장 및 발근은 정아를 절편으로 수직치상 하는 것이 효과적으로 나타났다. 또한 정아를 절편으로 미세삽목을 통해 효과적인 발근 유도 및 순화가 가능하여 미선나무의 실용적인 묘목생산이 가능함을 보여주었다.
감나무 (Diospyros kaki Thunb.)의 기내번식에 효과적인 배지 및 생장조정제를 구명하고자 일목계차랑 (Ichikikeijiro), 도근조생 (Tonawase), 평핵무 (Hiratenenasi) 3품종을 공시재료로 하여 시험한 결과, 신초의 생존에 가장 효과적인 배지는 MS 배지였으며 MS 배지내 질소원의 함량을 1/2∼1배로 조정한 경우가 신초의 증식 및 신장에 효과적이었다. 1/2N-MS배지에 2 mg/L zeatin 처리시 0.9 cm로 가장 많은 신초 신장을 보였고, 5 mg/L 처리시 증식된 신초수가 6.2개로 가장 많았다. 증식된 신초의 발근은 동일 배지에 1 mg/L IBA 처리시 가장 효과적이었다.
Phytoplasma was identified from leaf lettuce (Lactuca sativa) cultivated in commercial green-house in Korea. Diseased leaf lettuce revealed proliferation of shoots, and yellowing and shrinking of leaves (lettuce proliferation-K). Polymerase chain reaction (PCR) with universal primer pair P1/P6, and aster yellows (AY) specific primer pair R16F1/R1 amplified 1.5kb and 1.1kb length of DNA fragments, respectively. Nucleotide sequences of 16S rRNA gene were determined (Gen Bank accession no EF489024). Phylogenetic analysis of 16S rDNA showed the closest relationship with AY phytoplasma (GenBank accession no. AY389822 and AY389826), indicating that lettuce proliferation-K is a member of AY. Phytoplasma bodies were detected in phloem sieve tubes of diseased lettuce by transmission electron microscopy. The structures had round or pleomorphic shapes with a diameter of 130-300nm. Phylogenetic analysis of 16S rRNA gene, microscopic observation of phytoplasma bodies and symptomatology indicated that lettuce proliferation-K is caused by phytoplasma in the AY group. This is the first report of phytoplasma disease in lettuce in Korea.
향료 및 약용 수종으로 가치 있는 좀목형 (Vitex negundo var. insica)의 기내증식 기술을 개발하고자 3년생 나무의 당년생 신초지로부터 채취한 신초의 기내 증식 및 발근에 미치는 생장조절제의 효과를 구명하였다. 다경줄기 유도는 0.5-2.0 mg/L BA가 첨가된 WPM 배지에서 효과적이었고, 가장 많은 줄기 수 (7.9개/절편)는 1.0 mg/L BA 농도에서 얻었다. 줄기 생장은 WPM 기본배지에서 1-2개의 우세 줄기로 자라는 특징이 있었고 길이는 3.4 cm 정도이었다. BA 2.0 + GA 0.5 mg/L 혼용처리는 증식과 더불어 생장을 촉진하는 효과를 보였다. 줄기 증식 시 처리된 생장조절제는 차후의 발근에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 전반적으로 BA 처리로 유도된 줄기는 차후 발근도 잘되었으나 고농도 BA 처리 (4.0 mg/L)는 발근을 억제하였다. 저농도의 TDZ 처리도 BA 처리와 유사한 경향을 보였으나 0.5 mg/L 농도로 유도된 줄기는 발근이 현저히 억제되었고 그 이상의 농도에서 유도된 줄기는 전혀 발근되지 못했다. 증식 시 BA에 IBA를 혼용처리하면 증식은 물론 차후의 발근에 가장 좋은 것으로 나타났다. 이상의 결과는 약용가치가 뛰어난 좀목형의 기내배양을 통한 효율적인 증식 가능성을 보여주었다.
This communication describes for the first time an efficient and reproducible protocol for large-scale multiplication of Bambusa nutans. Nodal segments collected from field-grown clumps and cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with $4.4{\mu}M$ benzylaminopurine (BA) and $2.32{\mu}M$ kinetin (Kin) gelled with 0.2% gelrite yielded 80% aseptic cultures with 100% bud-break. The in vitro-formed shoots obtained after bud-break were successfully multiplied in MS liquid medium supplemented with $13.2{\mu}M$ BA, $2.32{\mu}M$ Kin, and $0.98{\mu}M$ indole-3-butyric acid (IBA). Sub-culturing of shoots every 3 weeks on fresh multiplication medium yielded a consistent proliferation rate of 3.5-fold. Shoot clusters containing three to five shoots were successfully rooted with 100% success on half-strength MS liquid medium supplemented with $9.8{\mu}M$ IBA, $2.85{\mu}M$ indole-3-acetic acid (IAA), $2.68{\mu}M$ naphthaleneacetic acid (NAA), and 3% sucrose. Plantlets grown in vitro were acclimatized and subsequently transferred to the field. Inter-simple sequence repeat analysis has confirmed the genetic uniformity of the tissue-cultured plants up to 27 passages.
고추냉이의 정단분열조직을 생장조절제 무처리, cytokinin류와 1.0 mg/L IAA를 혼용처리 및 cytokinin류를 단용 처리한 MS배지에 배양한 후 캘러스, shoot 및 뿌리발생률을 조사하였고 분화된 multiple shoot는 본엽 3~5매 정도에서 분할한 후 IAA와 IBA 단용 배지에 계대배양하여 뿌리형성에 적합한 생장조절제의 효과를 조사하였다. 생장조절제 무처리구의 경우 캘러스 유도없이 치상체에서 직접 shoot 및 뿌리발생이 이루어졌으나 배양 80일까지 shoot수는 2~3매로 생육이 저조하였다. Cytokinin류와 1.0 mg/L IAA 혼용처리의 경우 전 처리구가 100%의 캘러스가 유도되었으나 캘러스의 계속적인 증식은 없었고 대부분 캘러스로부터 다수의 뿌리가 형성된 후 배양 60일 후에 배양당시 부착된 엽원기가 shoot로 분화되는 경향이었는데 shoot수는 2~7개 정도였고 1개의 치상체당 multiple shoot수는 2~3개 정도였다. 1.0 mg/L zeatin과 1.0 mg/L IAA 혼용처리구의 경우 뿌리형성 후 shoot가 분화되어 본엽 4~5매의 완전한 식물체가 재분화되었다. Cytokinin류 단용 처리는 생장조절제의 종류와 무관하게 배양 5~10일 경부터 100%의 shoot가 분화된 후 증식되었고 배양 90일 후에는 다수의 multiple shoot로 증식되었는데 BA와 kinetin의 경우 1.0 mg/L에서 zeatin은 2.0 mg/L에서 multiple shoot분화율이 가장 높았다. 그러나 shoot로부터 뿌리분화는 극히 저조하여 완전한 식물체로의 재분화수는 IAA혼용처리에 비해 저조하였으나 shoot 분화에는 cytokinin류 단용 처리가 훨씬 효과적이었다. Multiple shoot를 본엽 3~4매에서 액아를 붙여 분할하여 뿌리분화율을 조사한 결과 IAA처리구보다 IBA처리구가 효과적이었는데 특히 0.01 mg/L IBA의 경우 계대배양 60일 후 93.3%의 뿌리 분화와 2~3개의 multiple shoot로 증식되어 shoot로부터 뿌리형성에 가장 좋은 결과였다.
정단 및 마디조직을 이용한 지황의 기내증식방안을 마련하기 위하여 일련의 시험을 실시하였다. 재생된 신초의 정단을 재배양하였을 경우 BA 5.0 mg/L에서 7.8개의 신초가 형성되었으며 투명화된 묘의 발생은 Gelrite 보다는 Bacto-agar 첨가구에서 감소하였다. 광도와 한천의 농도가 증가할수록 신초형성수 및 생장은 억제되었고 생체중 : 건물중의 비율도 감소하였다. 광도가 2000 lx일 때는 Bacto-agar 0.6-1.2%, 3,000 lx에서는 한천 0.4-0.6%에서 건전한 신초를 10개 이상 생산할 수 있었다. 활성탄소 0.1-0.3%첨가는 신초의 생장촉진과 뿌리형성에 촉진적으로 작용하였으며 투명화 발생률도 감소시켰으나 신초형성수는 현저히 감소시켰다. MS배지내 첨가되는 다량원소의 농도를 0.8-1.0배 하였을때 신초형성수 및 생장이 촉진되었다. 기관형성에 미치는 오옥신의 종류 및 농도별 효과를 조사한 결과 NAA나 IBA 보다는 IAA 0.3mg/L 와 BA 5.0mg/L를 혼합처리 하였을 때 증식률이 16배에 달하였다.
In vitro proliferation system was achieved by using nodal segment excised from greenhouse grown juvenile stock plants of Alnus japonica. Stem explants were cultured on MS medium supplemented with different plant growth regulators of cytokinin and/or their combinations. The most effective cytokinin source was the combination of zeatin 2.0 mg/L and TDZ 0.05 mg/L producing the average number of shoots (16.8 $\pm$ 3.6). In addition, healthy roots were formed after small clumps of shoots were transferred to half strength of MS medium containing IBA 0.02 mg/L with optimal rooting capacity. Soil acclimatization was successfully conducted in cell tray containing artificially mixed soil with 92 % survival rate.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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