중금속에 대한 내성을 나타낸 Serratia marcescens를 이용하여 카드뮴 흡착 기작에 관하여 조사하였다. 먼저 카드뮴에 대하여 민감성을 나타내는 돌연변이 균주인 PM을 개발하였으며 PM균주는 50ppm 이상의 카드뮴 농도에서 성장하지 못하였다. 카드뮴을 50ppm 처리한 균주에서 10회 이상 계대 배양하여 카드뮴에 적응을 유도한 PA균주는 PC, PM균주에 비해 성장 속도가 증가하였으며 세포 내 카드뮴 축적량도 4∼5배 증가하였다. PA균주는 100 ppm 카드뮴 처리군에서 처리량 중 23%를 세포내에 축적하였으며 세포막 부위보다 세포질 부위에 더욱 많은 카드뮴을 축적하였다. 카드뮴 처리시, 전 세포 단백질 양상에서 28 KDa과 64 KDa의 2개의 유도 단백질과 45 KDa의 감소 유도 단백질을 확인하였으며 원자 흡광 분석을 통하여 각각의 유도 단백질에 결합된 카드뮴 양은 단백질 1 g당 318.25 ㎍, 325.37 ㎍이 검출되었다. 세포내에 축적된 카드뮴을 전자현미경을 이용하여 카드뮴 결합 물질을 확인한 결과, 세포질의 단백질 분획에서 28 KDa크기의 유도 단백질이 카드뮴과 흡착한 것으로 나타났다. 카드뮴 흡착에 대한 DNA조사 결과 20 Kb 크기의 plasmid가 존재하였으며, curing agent로 plasmid를 제거한 결과 카드뮴 내성을 상실하여 본 분리 균주의 카드뮴 내성 유전자는 plasmid상에 위치하는 것으로 확인하였다.
Serratia marcescens 2354(ATCC 25419) 균주로부터 추출한 붉은 색소는 prodigiosin (PG)이었고, 이를 methanol에 녹여 자외선 및 가시광선 흡수 스펙트라를 측정한 결과 537 nm의 최대흡수파장 (${\lambda}_{max}$)을 갖는 산성용액에서의 전형적인 PG의 흡수 스펙트라이었다. 또한 methanol 용액에서 PG의 농도를 $1.0{\times}10-5M$에서 $9.0{\times}10-5M$로 증가시키면, 537 nm의 흡수강도는 증가하고 467 nm의 흡수강도는 감소하였으며, 500 nm에서 isosbestic point가 관측되었다. 이러한 현상은 537 nm와 467 nm가 각각 산과 염기용액에서의 PG 흡수대이고, 500 nm의 isosbestic point 등을 고려하면 가역적 산-염기 평형반응에 의한 결과라고 볼 수 있다. 한편 pH, 4.75의 acetic acid 완충용액에서 PG의 농도를 $6.0{\times}10^{-4}M$에서 $1.0{\times}10^{-4}M$로 감소시키면 500 nm에서 ${\lambda}_{max}$를 가지는 새로운 흡수대가 나타난다. 이 흡수대는 pH 4.75의 수용액에서만 나타나는 것으로 같은 pH의 순수한 methanol 용액에서는 나타나지 않는다. 이는 PG 분자가 $H_2O$에 의해 ${\alpha}$-이성질체에서 ${\beta}$-이성질체로의 전환에 기인하는 것이다. 즉 PG의 색변화는 용액의 농도 및 용매의 특성에 의해서도 일어날 수 있음을 확인하였다.
Serratia marcescens ATCC 21074 의 세포배양액으로 부터 순수분리한 metalloprotease 의 자가분해성 및 안정성과 관련된 몇가지 효소적 특성을 조사하였다. 최적 반응온도와 pH 는 각각 37.deg.C, pH 8.0 였으며 안정성은 pH 5.0-11.0 범위에서, 온도의 경우 10-37.deg.C 에서 비교적 안정한 것으로 나타냈다. Differential scanning calorimeter 로 이효소의 열적 성질을 분석한 결과 변셩 시작 온도는 37.6 .deg.C, endothermic peak 온도는 43.2 .deg.C, enthaply 변화량은 -8.4 mJ/mg 이었다. 이 효소는 30.deg.C 에서 24 시간 동안 거의 자가분해가 일어나지 않았으나 변성된 단백질의 셩우 쉽게 자가분해되는 것으로 나타났다. 또한 이효소는 trypsin, .alpha.-chymotrypsin, elastase 에 의해서 분해되지 않았으나 분해되지 않았으나 thermolysin 에 의해서는 쉽게 분해되었다.
내분비계 장애물질로 잘 알려진 bisphenol A (BPA)를 단일탄소원으로 이용하여 균체성장을 나타내는 미생물 87주를 공단주변의 토양, 폐수 혹은 활성슬러지로부터 분리하였다. 분리된 균주 중 균체성장이 우수한 균주 8중을 2차 분리하였으며, 이 중 BPA분해효율이 뛰어난 3종의 균주를 BPA분해미생물로 최종 선별하였다. 최종 선별된 3종의 균주를 16s rDNA의 부분적 염기서열 및 형태학적, 생리학적 특성조사를 통해 Serratia maycescens 1901, S, marcescens 1902 그리고 Pseudomanas putida 1401로 동정되었다. BPA분해능은 HPLC분석을 통해 배양액중의 잔존 BPA 농도로 측정하였으며, 최종 선별된 3종의 균주를 대상으로 BPA가 100 mg/1흑은 500 mg/l의 농도로 포함된 최소 무기염 배지(PAS) 및 비타민을 포함하는 PAS인 PAV 배지에서 배양하여 BPA 분해능을 조사한 결과 20-40%의 분해효율을 나타내었다. 이들 균주의 균체성장은 PAS 배지에서 보다 PAV배지에서 우수하였다. S. marcescens 1901은 저농도(100 mg/l) BPA에서 분해효율이 다른 2종의 균주보다 우수하였고, S. marcescens 1902와 P. putida 1401은 고농도(500 mg/l)에서 BPA분해효율이 높았다. 선별된 3균주의 순수배양과 흔합배양에 의한 BPA분해효율을 비교한 결과, 유의한 차이는 나타나지 않았다.
목 적 : 신생아 중환자실에서 일어났던 S. marcescens의 대유행의 임상적 양상과 위험 요소에 대해 알아보고자 하였다. 방 법 : 2004년 1월부터 8월까지 8개월간 부산대학교병원 신생아 중환자실에 입원해 있던 환아 중 S. marcescens이 분리되었던 24명을 환아군으로 하고, 같은 기간에 신생아 중환자실에 입원해 있었지만 균이 배양되지 않았던 21명을 대조군으로 하며, 균이 배양되었던 24명 중 감염을 일으킨 19명을 감염군으로 감염의 증거가 없던 5명을 보균군으로 나누어 각 군의 임상적 양상, 위험 요소의 비교 및 분리된 균주에 대한 항생제 감수성을 검사하였다. 동시에 환경 배양 검사를 하여 유행의 원인을 조사하였다. 결 과 : 환아군과 대조군, 감염군과 보균군 사이에 성별, 제태 연령, 출생시 체중, 분만 방법, 산모의 감염 여부, 입원 기간에는 유의한 차이점이 없었다. 환아들이 가진 기저질환으로는 신생아 호흡 곤란 증후군, 선천성 심질환, 괴사성 장염의 순으로 나타났다. 환자군이 대조군에 비해 카테터의 사용, 수술의 과거력, 항생제 사용, 인공 호흡기 사용, 비위관 삽입의 빈도가 많았다. 감염군에서 균이 배양되었던 검체는 혈액이 7명, 기도내에서 검출된 환아는 4명, 결막 삼출물은 4명, 소변에서 균이 검출된 환아는 2명, 뇌척수액에서 검출된 환아는 1명이었고, 이 중 S. marcescens의 감염으로 인해 사망한 환아는 3명으로 15.8%의 사망률을 나타내었다. 감염군 19명에서 배출된 균의 항생제 감수성은 ampicillin, cefotaxime, ceftazidime, gentamicin에 저항성을 imipenem, bactrim, amikacin에 감수성을 나타내었다. 분자학적 방법으로 분석한 결과 6월의 유행 당시 모두 같은 균종으로 나왔다. 철저한 소독과 격리를 한 뒤 더 이상 균이 발견되지 않고 있다. 결 론 : S. marcescens는 신생아와 같이 면역이 저하된 환자에게 빠르게 전파하여 폭발적인 유행을 일으킬 수 있으며 사망률도 높다. 임상 검체에서 S. marcescens가 분리되면 유행적 발생의 위험성을 빨리 인지하여 처음부터 적절한 감염 관리를 실시하여야 한다.
Gyaneshwar, P.;Reddy, Pallavolu M.;Ladha, Jagdish K.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제10권5호
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pp.694-699
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2000
Serratia marcescens IRBG500 and Herbaspirillum seropedicae Z67 grow endophytically in rice. The ability of these bacteria to colonize rice grown under increased nutrient availability was assessed in variety IR72 using strains marked with transposon-based gusA. The endophytic colonization was monitored via bacterial enumeration and histochemical visualization of GUS expression of bacteria in plant tissues. Rhizoplane and endophytic colonization by both bacteria was significantly inhibited in the rice plants grown in the presence of 10 mM $NH_4Cl$. In contrast, the addition of 10 mM $KNO_3$ showed no adverse effect on colonization. Increasing the concentration of $Ca^{2+}$ to 5 mM significantly reduced endophytic colonization by both bacterial strains, whereas the addition of 0.5 mM $Fe^{2+}$ substantially lowered the colonization of roots by S. marcescens IRBG500 but showed no effect on colonization by H. seropedicae Z67. Taken together, these finding suggest that, like in legume-rhizobial symbiosis as well as plant-pathogen interactions, nutrient status, particularly $NH_4^+$ and $Ca^{2+}$ concentrations in the surrounding medium, plays an important role in the regulation of endophytic infection and colonization processes in rice.
A DNA fragment, pCKB13, containing two genes encoding Coenzyme a transferase, was isolated from a genomic DNA library of S. marcescens KCTC 2172. The complete nucleotide sequence of the 2,081-bp BamHI fragment on pCKB13 was determined. Sequencing of the fragment led to the identification of two open reading frames showing high homology with two Coenzyme A (CoA) transferases, Acetoacetyl-CoA transferase (Acot) and Succinyl-CoA transferase (Scot), enzymes catalyzing the reversible transfer of CoA from one carboxylic acid to another. The enzyme activity of Coenzyme A transferase increased after introducing the multicopy of the cloned gene in E. coli. The recombinant protein, overexpressed by multicopy and induction with IPTG, was a polypeptide of 42 kDa, as confirmed by SDS-PAGE. The protein was purified to homogeneity through three sequential chromatographic procedures including ion-exchanged DEAE-sepharose, CM-sepharose, and Mono Q.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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