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Purification and characterization of β-secretase inhibitory peptide from sea hare (Aplysia kurodai) by enzymatic hydrolysis

  • Lee, Jung Kwon;Kim, Sung Rae;Byun, Hee-Guk
    • Fisheries and Aquatic Sciences
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    • 제21권5호
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    • pp.13.1-13.8
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    • 2018
  • Amyloid plaque, also called senile plaque, the product of aggregation of ${\beta}$-amyloid peptides ($A{\beta}$), is observed in brains of the patients with Alzheimer's disease (AD) and is one of the key factors in etiology of the disease. In this study, hydrolysates obtained from the sea hare (Aplysia kurodai) were investigated for ${\beta}$-secretase inhibitory peptide. The sea hare's muscle protein was hydrolyzed using six enzymes in a batch reactor. Trypsin hydrolysate had highest ${\beta}$-secretase inhibitory activity compared to the other hydrolysates. ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was separated using Sephadex G-25 column chromatography and high-performance liquid chromatography on a C18 column. ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was identified as eight amino acid residues of Val-Ala-Ala-Leu-Met-Leu-Phe-Asn by N-terminal amino acid sequence analysis. $IC_{50}$ value of purified ${\beta}$-secretase inhibitory peptide was $74.25{\mu}M$, and Lineweaver-Burk plots suggested that the peptide purified from sea hare muscle protein acts as a competitive inhibitor against ${\beta}$-secretase. Results of this study suggest that peptides derived from sea hare muscle may be beneficial as anti-dementia compounds in functional foods or as pharmaceuticals.

동해와 남해 연안에 서식하는 군소(Aplysia kurodai) 서식지 주변의 해조상과 위 내용물 조성 (Composition of the Stomach Contents and Marine Algal Flora Around Sea Hare Aplysia kurodai Habitats in the East and South Coast of Korea)

  • 김민주;김남길
    • 한국수산과학회지
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    • 제56권1호
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    • pp.66-78
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    • 2023
  • The sea hare Aplysia kurodai is an economic species located along the Korean coast. This study aimed to investigate the stomach contents of A. kurodai and its relationship with marine algal flora surrounding their habitat. A. kurodai and marine algae were sampled in seven and five areas in the East and the South seas, respectively. The marine algae found in the stomach and surrounding marine habitat were identified. In the East Sea of Korea, 134 species of seaweed were recorded. Thirty-nine species of marine algae were identified in the stomach contents of A. korudai collected from the East Sea of Korea. Seventy-five species of seaweed were collected in the South Sea of Korea. In addition, 26 species of marine algae were identified in the stomach contents of A. kurodai from the South Sea of Korea. Among the stomach contents of A. kurodai, ten sheet,12 filamentous, 27 coarsely branched, and one jointed calcareous form species were identified.

개불과 군소육의 단백질 및 아미노산 조성 (Protein and Amino Acid Compositions in Echiurid and Sea Hare Muscles)

  • 최영준;한영실
    • 한국수산과학회지
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    • 제18권6호
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    • pp.550-556
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    • 1985
  • 수산무척추동물에 속하는 개불과 군소의 식품학적 평가를 위하여 육의 단백질 및 아미노산조성을 분석 검토하였으며, in vitro법에 의한 단백질의 품질추정을 위한 실험도 병행하였다. 개불과 군소의 육은 각각 $10.19\%$$6.33\%$의 조단백질을 함유하고 있었다. 이들 각 육은 개불에 있어서는 비단백태질소;$40.6\%$, 수용성단백질 ; $58.9\%$ 염용성단백질 ; $0.2\%$, 알칼리가용성단백질 ; $0.2\%$ 및 기질단백질 ; $0.1\%$, 그리고 군소에 있어서는 비단백태질소 ; $38.8\%$, 수용성단백질 ; $56.9\%$, 염용성단백질 ; $2.5\%$, 알칼리가용성단백질 ; $1.6\%$ 및 기질단백질 ; $0.2\%$로 구성되어 있었다. 양적으로 많은 비율을 점하는 수용성단백질의 subunit 조성을 측정한 결과, 개불은 15개 subunit, 군소는 10개 subunit가 검출되었다. 유리아미노산의 조성을 분석한 결과, 개불은 glycine과 alanine 이 총유리아미노산의 약 $75\%$를 차지 하였고, glycine, alanine, taurine, arginine 및 aspartic acid는 총유리아미노산의 약 $96\%$를 차지하였다. 군소의 총유리아미노산의 양은 개불의 총유리아미노산양의 약 1/10에 불과하였으며 taurine이 총유리아미노산의 약 $78\%$를 차지하였다. 단백질의 아미노산조성을 분석한 결과, 개불의 육단백질에는 glycine, aspartic acid, glutamic acid, arginine, lysine이 많이 함유되어 있었고 cysteine은 그 함량이 적었다. 그리고, 군소의 육단백질에는 glycine, glutamic acid, aspartic acid, arginine이 많이 함유되어 있었으며 cysteine과 tryptophan은 흔적양에 불과하였다. 한편, 개불과 군소육의 가수분해 시료중에는 개불은 glutamic acid, aspartic acid, glycine, arginine, leucine이 그리고 군소는 glycine, glutamic acid, aspartic acid, leucine, serine이 비교적 많은 함량을 보였다. in vitro 법으로 이들 두 동물의 육단백질의 영양가를 추정한 결과, 이미 알려진 수산동물의 육단백질에 비하여 떨어짐을 알 수 있었다.

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세포주를 이용한 군소 다당류와 Glycosaminoglycan의 기능성 검색 (Screen of Functional Activity of Polysaccharide and Glycosaminoglycan from Sea Hare (Aplysia kurodai) by Cell Line)

  • 홍유미;박시향;윤보영;최병대;최영준
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제40권1호
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    • pp.14-19
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    • 2011
  • 군소에서 정제한 GAG는 대식세포주인 RAW 264.7에서 세포독성은 보이지 않았으며 NO 생성량, TNF-$\alpha$, IL-6 생성량을 증가시켜 면역조절 효과가 있음을 확인하였다. 그리고 $100{\mu}g$/mL 농도에서 배양 72시간 후 약 40%에 가까운 위암세포(AGS) 성장 억제 효과가 나타났고, 정상세포 IEC-6에는 독성을 보이지 않았다. 이 같은 결과는 면역조절을 위한 기능성식품 혹은 위암 치료제로서 군소의 당 추출물과 GAG의 활용 가능성을 제시한다.

군소(Aplysia kurodai)에서 추출한 다당 분획물의 면역 조절 효과 (Immune Regulating Effect of Polysaccharide Fraction from Sea Hare (Aplysia kurodai))

  • 박시향;정세영;최영준
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제40권3호
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    • pp.372-378
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    • 2011
  • 본 실험에서는 군소로부터 다당류를 추출 정제한 다당 분획물을 혈액 림프구와 대식 세포주를 사용하여 면역 조절효과를 실험해 보았다. 군소부터 추출 분획한 다당류는 48시간 동안 처리 시 Jurkat cell의 증식률을 40% 이상 증가시켰으며, 혈액암 세포종인 Jiyoye cell에 대하여는 그 성장률이 농도에 따라 감소하였다. 그렇지만 Jurkat cell에 24시간과 48시간 동안 군소 다당 분획물을 처리하였을 때 IL-2와 IFN-$\gamma$ 생성량의 유의적인 증가는 확인할 수 없었다. 그러나 RAW264.7 cell line에 대하여는 IL-12의 경우는 47% 이상 증가하여, 군소 다당 분획물의 면역 조절 효과의 가능성을 보여주었다.

군소(Aplysia kurodai)에 분포하는 글루코사미노글리칸의 추출과 기능특성 2. 글루코사미노글리칸의 구조 특성 (Extraction of Glycosaminoglycan from Sea Hare, Aplysia kurodai, and Its Functional Properties 2. Structural Properties of Purified Glycosaminoglycan)

  • 윤보영;최병대;배동원;최영준
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제39권11호
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    • pp.1647-1653
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    • 2010
  • 군소에서 추출한 다당류로부터 DEAE-Sepharose 상에서 glycosaminoglycan(GAG)을 정제하여 기능기의 분포, 구성당의 분포, 이당류의 조성과 당 구조를 조사하였다. 정제한 GAG는 기본 형태를 구성하는 이당류 단위가 전체 구성물 중 55% 이상을 차지하고 있는 다당 복합체였다. 정제한 GAG는 1648 $cm^{-1}$에서 amide I의 특징적인 띠와 1457 $cm^{-1}$에서 C-O stretch, 탄수화물 및 아미노산의 특징, 866 $cm^{-1}$에서 단당류의 특징을 보이는 것으로 나타났다. 정제한 GAG는 fucose, N-acetylgalactosamine, N-acetylglucosamine, glucose, galactose, 미량의 mannose와 xylose로 구성되어 있는 것으로 나타났고, 이중에서 N-acetylgalactosamine, N-acetylglucosamine이 70% 이상을 차지하는 다당 복합체인 heparan sulfate인 것으로 추정되었다. 군소 GAG는 단백질핵의 threonine 잔기에 O-연결된 GlyUA(2S)-GlcNS와 GlyUA-GlcNS(6S) 구조를 가지고 있는 것으로 나타났다.

군소(Aplysia kurodai)에 분포하는 글루코사미노글리칸의 추출과 기능특성 1. 다당류 추출의 최적화와 글루코사미노글리칸의 정제 (Extraction of Glycosaminoglycan from Sea Hare, Aplysia kurodai, and Its Functional Properties 1. Optimum Extraction of Polysaccharide and Purification of Glycosaminoglycan)

  • 윤보영;최병대;최영준
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제39권11호
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    • pp.1640-1646
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    • 2010
  • 남해안에서 주로 여름철에 어획하여 부산 및 경남 지역을 위주로 소비하고 있는 군소에서 다당류 추출을 위한 최적 조건을 검토하였다. 군소 다당류 추출을 위한 단백질 가수분해 효소로는 Flavourzyme 500 MG가 가장 효과적이었고, 추출한 다당류의 회수를 위한 가장 효율적인 추출물의 농도와 ethanol 첨가량은 각각 Brix 60과 5배량이었다. DEAE-Sepharose 칼럼 크로마토그래피로 얻은 크로마토그램상의 전기전도도와 전기영동 이동도에 근거하여 0.5~0.75 M NaCl 상에서 용출되는 물질이 GAG임을 확인하였으며, heparan sulfate인 것으로 추정하였다. 다당추출물과 정제 GAG의 uronic acid 함량은 각각 1.0 g/100 g과 6.0 g/100 g이었고, GAG를 구성하는 성분으로 지표물질인 hexosamine의 함량은 당 추출물과 정제물에서 각각 5.6 g/100 g과 25.7 g/100g이었다. 정제물은 agarose 겔 전기영동 상에서 heparan sulfate로 추정되었으며, 분자량은 겔 크로마토그래피에서 29.6 kDa으로 나타났다.

해산복족류의 소화관조직중에 분포하는 단백질분해효소의 활성 (Proteolytic Activity of the Crude Enzyme Extracted from the Digestive Tract of Marine Gastropods)

  • 조득문;변재형;변대석;김장양
    • 한국수산과학회지
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    • 제16권3호
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    • pp.216-224
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    • 1983
  • 해산복족류의 소화관조직에 분포하는 단백질분해효소의 활성에 미치는 pH, 온도, 화학약제, 저온보존 등의 영향을 밝히므로서 그 생리 생태학적 관련 지식을 얻고, 나아가서 그 정제를 위한 몇가지 기본적인 성질을 구명코자 본 연구를 시도하였다. 실험 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 군소, 소라, 전복의 소화관조직에서 추출된 단백질분해효소의 활성최적조건에서의 활성을 보면, 산성역과 약산성역에서는 전복이 다른 두 복족류에 비하여 2배 혹은 그 이상 높았으며, 알카리성역에서는 군소가 다른 두 복족류이 비하여 6배 혹은 그 이상 높은 특징을 보였다. 2. 화학약제가 효소의 활성이 미치는 영향을 종합하여 보면, 대체로 금속이온중의 $Mn^{2+}$, 실험에 쓴 전 환원제, 킬레이트제중의 EDTA, SH 시약중의 DTT 등에 의하여 활성화하였고 금속이온중의 $Hg^{2+}$ 및 변성제중의 SDS 등에 의하여서는 공통적으로 조해를 받았다. 3. 이들 효소가 보인 활성능의 저온보존에 의한 영향을 보면, $0^{\circ}C$$-20^{\circ}C$에 보관하였을 때, 군소와 소라의 산성과 약산성역에서 최적활성조건을 보이는 효소들은 보관기간의 경과에도 영향을 보이지 않았지만 알카리성역에서 최적활성조건을 보인 효소들은 보관일수의 경과와 더불어 활성이 저하하여 불안정함을 알았다. 그러나, 전복의 약산성역에서 최적활성조건을 보이는 효소는 보관기간의 경과에도 활성에는 영향이 없었으나 산성과 알카리성역에서 최적활성조건을 보인 효소들은 보관기간의 경과와 더불어 활성이 저하하여 저온에서는 불안정함을 알 수 있었다.

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군소 (Aplysia kurodai)의 중추신경계로부터 myomodulin A와 E의 정제 (Purification of Myomodulin A and Myomodulin E from the Central Nervous System of the Sea Hare, Aplysia kurodai)

  • 김찬희;서해점;황은영;김은정;고혜진;김인혜;서정길;문정혜;허민도;박남규
    • 한국수산과학회지
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    • 제34권3호
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    • pp.279-284
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    • 2001
  • 군소의 중추신경계로부터 myomodulin A (MMA)과 myomodlin E (MME)의 정제에 대해 보고하고자 한다. 500마리 군소의 중추신경계를 산조건으로 추출한 후 4종류의 HPLC column system에 적용하여 두가지 신경성 펩타이드를 정제하였다. HPLC 분리과정에서 얻어진 모든 분획의 활성을 조사하기 위하여 bioassay system으로 진주담치 (Mytilis edulis)의 ABRM을 이용하였다. 최종 정제된 신경성 펩타이드는 Edman 분해법을 이용한 아미노산 서열 분석기, 질량분석기와 화학합성을 통해 완전한 일차구조를 밝힐 수 있었다. 정제한 MMA와 MME의 일차구조는 각각 Pro-Met-Ser-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$, (847.41 Da) 과 Gly-Leu-Gln-Met-Leu-Arg-Leu-$NH_2$, (830.50Da) 이었다. 또한 이들 합성 펩타이드는 진주담치의 ABRM에 대해 phasic contration의 조절활성을 나타내었다.

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