• 한국작물학회지
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• 제42권5호
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• pp.615-625
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• 1997

Indica 벼의 원형질체들로 부터 효과적인 식물체 재분화 방법을 개발하였다. 이 방법은 배형성 진탕 세포 배양체로 부터 나출된 원형질체들을 feeder cell들이 agarose에 embedded된 배지 표면에 놓인 filter membrane 위에 배양하는 것이다. Feeder cell로서 Lolium multiflorum 세포배양체를 사용했을 때가 Oryza ridleyi를 사용했을 때보다 효과적이었고, 원형질체 평탄효율은 세포 배양체 age에 따라 달랐지만 최고로 0.68％ 까지 증가되었다. Carbohydrate source로서 maltose를 사용하거나 maltose와 sucrose를 1:1로 조합했을 때가 sucrose 단독으로 사용했을 때보다 식물체 재분화율이 증가되었고, 고농도의 agarose를 이용하여 원형질체로부터 유도된 캘러스를 dehydration시켰을 때 또한 재분화율이 괄목하게 증가되었다. 식물체 재분화율은 control 캘러스로부터 3.1∼30.6％ 였지만 dehydration처리한 캘러스로부터는 30.7∼70.7％까지 증가되었다. 원형질체로 부터 유도된 식물체들은 형태적으로 정상이며 개화했다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권2호
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• pp.117-121
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• 1994

쇠비름(portuaaca oleracea L.)의 줄기절편체로부터 캘러스유도를 위한 적정배지는 BAP 0.1 + 2,4-D 1.0 mg/L., 30g/L sucrose 및 10 g/L agar를 첨가한 MS배지로 나타났으며, 액체배양에 의한 세포의 증식에는 BAP 0.1 + 2,4-D 0.5mg/L가 함유된 MS배지가 효과적이었다. 장시간 건조처리는 세포는 활력과 재생 및 재분화율이 강하게 억제되나, 1시간 및 2시간동안의 단시간 건조처리한 세포의 재분화율은 각각 83및 80%로 나타나나 무처리 61%에 비해 높았다. 0.6% NaCl의 2일간 전처리는 세포의 재분화율에는 영향을 미치지 않으나, 세포활력 및 재생률에는 억제작용을 나타내었다. Sucrose 70및 100 g/L를 전처리한 쇠비름세포의 재분화율은 각각 80및 81%로 무처리에 비해 높았다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제4권3호
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• pp.129-134
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• 2002

We report the development of a new selection system for the transformation of pepper plants by mannose. In order to achieve this, we first tested several factors related to regeneration conditions. Among the 30 inbred lines examined, line P9l5 was able to generate shoots at the highest rate from both cotyledons and hyporotyls in MS media. A dosage curve for optimizing the selection conditions was established by mixing mannose (range 0-50 g/L) and sucrose (range 0-30 g/L). The least selection pressure on shoot formation was created by a mixture of sucrose and mannose at 20 g/L and 15 g/L, respectively, and the threshold for ultimate tissue death was 50 g/L of mannose irrespective of the sucrose concentration. However, we found that mannose itself was not the sole inhibitor of pepper shoot development. High concentrations of sucrose (30 g/L) contributed additively to the inhibition of shoot formation at higher mannose concentrations. Genotype preference is a major factor that enhances regeneration ability in mannose media, as was observed in MS media. P9l5 and P410 line had high regeneration rates under mannose selection conditions in the presence of Agrobacterium infection. Different virulence levels of Agrobacterium strains did change the regeneration rates, probably due to interaction with the specificities of the inbred lines. Taken together, P9l5 offers the best pepper inbred line for transformation and we recommend a selection condition of 20 g/L of sucrose and 15 g/L or more of mannose up to 50 g/L in media.

• 미생물학회지
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• 제24권4호
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• pp.364-369
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• 1986

Streptomyces tuberaidicus 의 원형질체 생성, 생성된 원형질체의 정상 균사체료의 환원 그리고 원형질체 융합에 대하여 조 사하였다. 또한 균사체로부터 원형질체가 생성되는 과정을 주사전자현미경을 사용하여 관찰하였다. 원형칠체는 슐샤의 끝부위 에서 뿐만 아니라 균샤 말단의 부풀어오른 부위 그리고 균사의 중간 부위에서도 생성이되는 세 종류의 원형질체 생성양을 보였다. 원형질체의 정상균사체로의 환원률은 tryptone-yeast extract-sodium acetate-$MgCl_2-CaCl_2$-sucrose로 조성된 배 지에서 대략 17%이었으며, 이때 $Ca^{++},\;Mg^{++}$ soccrose의 농도가 각각 50mM, 5mM, 0.4-0.SM일때 최척의 환원률을 보였다. S. tµberaidicµs의 histidine과 adenine을 요구하는 두 균주의 원형질서l간의 융합에서 30% 이상의 융합빈도플 얻

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권3호
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• pp.251-257
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• 1986

Lactobacillus casei 균주의 protoplast 형성과 정상세포로의 재생에 관한 최적조건이 연구되었다. Lactobacilus casei 균주들은 sucrose 1 mole이 함유된 20mM potassium phosphate완충액 (pH6.8)에서 mutanolysin을 10 $\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ 농도로 처리하였을 때 용이하게 protoplast가 형성되었다. Protoplast의 최대형성은 균주가 0. 5%의 glycine이 함유된 TCM 배지에서 생장이 대수기 중기에서 말기에 도달된 세포를 수확하여 사용했을 때에 이루어졌다. 세포 재생은 6 mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$, 0.8 M sucrose 그리고 horse serum 10%가 함유한 재생 배지에서 효율적으로 이루어 졌다. Protoplast의 세포벽 재생 빈도는 3$0^{\circ}C$에서 3-4 일간 배양후 2-5% 범위로 나타났다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제41권4호
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• pp.223-228
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• 2014

팔레놉시스 PLB (protocorm-like bodies) 조직을 이용하여 대량증식 및 신초재분화 체계 확립을 위하여 다양한 증식배지, 액체배지와 고체배지의 효과, sucrose 농도 등이 PLB 증식과 신초 재분화에 효과가 있는지 그리고 활성탄소, citric acid 및 ascorbic acid 등이 팔레놉시스 PLB 배양시 갈변화 현상을 감소하는데 효과가 있는지 알아 보고자 본 연구를 수행하였다. 그 결과, 난과 식물에서 증식배지로 널리 사용되는 VW, HCa, Orchimax 및 Kudson C 배지 중 VW 배지가 PLB 증식에서 타 배지와 비교해서 최소 1.3배에서 최대 2배의 증식효율 그리고 신초 재분화에서도 50% 이상 높은 효율을 보여 주었다. 최적 배지로 선정된 VW배지에 apple powder 및 banana powder를 첨가한 VWAB 배지를 기반으로 액체 및 고체배양에서 PLB 증식효율과 신초재분화율을 비교한 결과, 통계적으로 유의한 차이는 발견되지 않았다. Sucrose 농도를 0 ~ 50 g 처리한 실험에서는 PLB 증식과 재분화 효율 둘 다 10 g 처리구에서 가장 좋은 결과를 보여 주었다. 마지막으로 팔레놉시스 PLB 증식 및 재분화 과정에서 자주 발생하는 갈변화를 감소시키기 위하여 활성탄소, citric acid와 ascorbic acid를 처리한 실험에서는 활성탄소 1 g이 1.5%의 가장 낮은 갈변율을 나타내었다. 이러한 실험결과는 향후 팔레놉시스 PLB를 이용한 대량증식 및 재분화 체계 확립에 크게 기여하리라 판단된다.

• 한국작물학회지
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• 제49권1호
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• pp.52-60
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• 2004

The optimized in vitro culture system was investigated for improvement of regeneration efficiencies by observing the responses of scutella-derived callus of Korean rice (Oryza sativa L.). Large variations of callus induction (43.9-93.9%) and shoot regeneration (0-88.7%) were observed among the rice cultivars depending on medium. However, shoot regeneration was significantly improved by selected utilization of basal medium, growth regulators, and carbon sources. N6 basal medium was more efficient for embryogenic callus induction than MS or LS basal medium, while MS was superior to N6 for shoot regeneration. The calli of highly regenerative cultivars grew faster and showed higher rates of green tissue formation (GT) and shoot regeneration (SR) and lower rate of callus browning (CB) than those of recalcitrant cultivars. Although a higher level of kinetin stimulated the GT and SR in highly regenerative cultivars, $10\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin generally suppressed the GT and SR, while CB was accelerated compared to $2\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin. Additional benefits of sorbitol combined with maltose (or sucrose) under $5\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin were certainly confirmed on regeneration efficiencies compared to sucrose alone as carbon source and osmotic regulator. This combination showed high rate of GT and SR with multiple shoots while low rate of CB. With MSRK5SM-Pr medium ($5\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin, 3% sorbitol, 2% maltose, $500\textrm{mgL}^{-1}$ proline), the regeneration efficiencies of total 17 out of 24 cultivars were practically improved 160% on average compared to MSRK2S ($2\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin, 3% sucrose) control medium. Especially, the medium was most effective to the cultivars showing a medium level of regenerability such as Daesanbyeo and Dongjinbyeo and Suwon477, enhancing efficiencies more than 300-600% compared to MSRK2S medium.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제45권2호
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• pp.131-139
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• 2018

본 연구에서는 쉽싸리의 재분화와 순화에 영향을 주는 탄소급원의 효과에 관한 연구를 수행하였다. 식물체 재분화는 1/2MS 배지에 3 ~ 10%의 sucrose와 glucose를 각각 다른 농도로 처리하여 재분화를 유도하였다. 그 결과 3%와 5% sucrose 처리에서 줄기증식과 발근이 증가되었으며, 고농도 처리에서는 줄기와 뿌리 길이 등의 생육이 억제되었다. 기외 순화 중 3% 혹은 5% sucrose 처리 배지에서 생육한 식물체의 뿌리비대, 뿌리길이, 줄기 길이 및 생존율은 glucose 및 다른 농도처리와 비교하여 가장 높게 나타났다. 따라서 3% 및 5% sucrose 처리는 쉽싸리의 기내 생육과 순화를 위해 가장 적정한 농도로 확인되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제30권1호
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• pp.41-45
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• 2003

Iris 속 식물인 꽃창포의 번식 특성에서 종자의 잡종성과 적은 분얼로 인한 분주 번식의 어려움을 해결하고 고유한 품종의 특성을 유지하기 위해서는 조직배양을 통한 대량 번식의 구명이 필요하므로 Iris 속 식물의 화기부위 별 절편체를 이용하여 기내 번식에 의한 대량 증식방법을 정립하고자 본 실험을 수행하였다. 자생꽃창포의 화피기부조직, 자방, 소화경, 화경을 치상하여 기내배양환경에 적절한 환경을 구명하고자 조도 2000 Lux에서 일장 (0~24시간), 온도 (10~3$0^{\circ}C$), sucrose (l~9%)의 조건에서 배양하였다. 자생꽃창포의 화기 절편체로부터 유식물체 재분화에 적합한 일장은 16시간의 장일조건이, 온도 조건은 $25^{\circ}C$에서, sucrose 농도는 3%에서 가장 적합한 것으로 나타났으며 특히 화기 부위 중 화피기부조직과 자방 배양에서 높은 신초 형성을 보였다. 화기조직 치상절편체로부터 부정근의 분화는 암상태에서 촉진되어지고 sucrose는 6%에서 뿌리를 생장시키며 1$0^{\circ}C$, 15$^{\circ}C$의 저온에서는 신초,뿌리의 분화가 저조하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권4호
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• pp.246-250
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• 1991

Conditions for the production and regeneration in Lactobacillus bulgaricus protoplasts were investigated. Protoplasts of L bulgaricus strains were obtained by treatment with mutanolysin and lysozyme together in a protoplast forming buffer containing 0.02 M N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid (HEPES) (pH 7.0) and 0.5 M sucrose. High protoplast yield was obtained from cells cultured in the de Man, Rogosa and Sharpe(MRS) medium at the middle to late logarithmic growth phase. Regeneration was efficiently accomplished with a complex medium containing 1% sucrose, 20 mM $MgCl_2$, 5% gelatin, and 0.5% bovine serum albumin. The frequency of regeneration of protoplasts was 10~20% after 5 days of incubation at $30^{\circ}C$.