DOA의 추출 및 분석조건과 랩 필름으로 포장된 식품의 저장 및 전자렌지로 가열 중 식품으로의 DOA의 이행량을 조사하였다. 추출용매와 방법에 대하여 실험한 결과 DOA는 carbon tetrachloride를 이용하여 약 1시간 이상 reflux시킬 때 가장 우수한 추출률을 나타냈다. 국내 시장에 유통 중인 PVC 랩은 가정용과 영업용의 경우 각각 평균적으로 약 18.9% 및 24.6%의 DOA 함량을 나타냈다. 저장시 DOA의 이행량은 돼지고기 삼겹살의 경우 저장 1일 및 3일째 각각 21% 및 26%로 조사된 식품 중 가장 높은 이행량을 나타냈다. 전자렌로 가열시에 조사된 모든 식품의 경우 랩과 직접 접촉이 안된 상태에서의 DOA 이행량은 약 5.5% 범위내로 미미하였으나 돼지고기 삼겹살의 경우 직접 접촉된 상태로 가열하였을 때는 약 49%의 DOA가 이행되었다.
Microwave assisted extraction(MAE) is known as a more environmental friendly process with economic advantages in terms of less time, less solvent, less energy and less wastes than the current time consuming reflux method. It was applied to develop a rapid extraction method for soluble ginseng components that are major materials used for the processing of ginseng products. In a comparative study between pre established MAE(ethanol 60%, power 80 W, process time 4 min$\times$5) and current extraction method(ethanol 80%, temp. 85oC, time 8 hr$\times$5), MAE was more efficient than the current method to obtain an extract yield(soluble solid), but it was insufficient to extract individual ginsenosides, total phenols, reducing components and acidic polysaccharides. MAE with 80% ethanol by 5 times showed, however, that its extraction efficiency on soluble solid, crude saponin, major ginsenosides, and the other components was equal or superior to that of the current method, indicating that ethanol concentration is one of the critical parameters influencing the MAE process. The quality of ginseng extracts from MAE was assured by evaluating the corresponding standards and by comparing TLC and HPLC patterns with the control.
한약재의 추출방법에 따른 인체신경모세포 SK-N-SH에 대한 보호 효과를 연구하였다. 당귀, 건지황, 작약 및 천궁을 시료로 사용하였고, 열수추출(환류냉각, 5 시간), 증숙추출(100$^{\circ}C$ 및 120$^{\circ}C$, 90분 후 열수추출) 방법과 에탄올추출(환류냉각, 5 시간)방법을 비교하였다. 추출물을 농도별로 SK-N-SH 세포에 2 시간 처리한 후 $H_2O_2$로 250${\mu}M$로 2 시간 산화스트레스를 유발한 다음 세포독성 및 apoptosis와 caspase-3의 발현 정도를 측정하였다. 모든 약재의 열수추출물이 다른 추출물보다 세포 증식을 촉진하였고, apoptosis를 억제하였다. 한약재 열수추출물 1${\mu}g/{\mu}l}$ 농도까지는 세포증식을 촉진하였지만, 그 이상의 농도에서는 오히려 감소시켰다. 열수추출물은 다른 추출물보다 총페놀성 화합물이 많이 함유되어 있었고, 항산화능이 높았다. 또한, 이와 같은 효과는 당귀의 열수추출물이 다른 약재 열수추출물보다 우수하였다. 본 연구결과는 약재의 열수추출법이 인체신경모세포인 SK-N-SH의 증식과 세포사멸 억제를 위해 가장 우수한 방법이었고, 당귀 열수추출물이 가장 우수한 효과를 지니고 있어 기억력 보호나 상실억제제로 활용할 수 있을 것이다.
마이크로웨이브 추출방법과 환류냉각 추출방법을 비교한 결과, 물과 메탄올 및 에탄올 혼합용매로 추출한 경우 마이크로웨이브 추출 방법에 의하여 추출시간을 단축시키면서 환류냉각 추출방법에서와 같은 수준의 추출율과 총 폴리페놀 함량을 갖는 섬쑥부쟁이 추출물을 얻을 수 있었다. 마이크로웨이브 추출시 최적 마이크로웨이브 에너지는 $120{\sim}150$ W였고 추출시간의 경우 $4{\sim}8$분이 적당하였다. 추출에 사용한 용매들 가운데 에탄올, 메탄올보다 물 그리고 물과 에탄올 또는 메탄올 혼합용매를 사용한 추출물의 추출율, 총 폴리페놀 함량 및 전자공여 효과가 높은 것으로 나타났다.
본 연구에서는 황련의 지표물질인 berberine의 추출효율을 측정하기 위하여 추출온도, 추출용매, 추출시간 등의 조건 변화에 따른 최적의 추출조건을 찾았다. $60^{\circ}C$에서 2~3시간 환류하였을 때 추출효율이 가장 좋았으며, 추출용매로는 메탄올이나 아세트산을 사용하였을 때 각각 추출효율이 우수하였다. 이온쌍 추출법에서는 사용되는 sodium lauryl sulfate의 첨가 효과는 추출 효율을 오히려 감소시키는 결과를 나타내었다.
구릿대(A. dohurica) 잎의 항산화성과 생리활성을 탐색하기 위하여 물과 에탄올을 용매로 환류 추출방법과 가압열수 추출방법으로 만든 각 추출물에 대하여 폴리페놀의 함량을 측정하였으며, 구릿대 잎의 항산화성을 알아보기 위하여 전자공여능, SOD 유사활성능, 아질산염 소거능을 측정하였다. 또한 xanthine oxidase 및 tyrosinase 저해 활성을 측정하여 구릿대의 생리활성에 대하여 분석하였다. 폴리페놀의 총 함량은 가압 열수 추출물(PW; 95.23 mg/g)>환류 에탄올 추출물(RE; 69.81 mg/g)>환류 물 추출물(RW;41.06 mg/g)으로 PW가 RW 보다 2배 이상 많은 폴리페놀을 함유하였다. 전자공여능은 $1,000{\mu}g/mL$의 농도에서 $61.14%{\sim}76.02%$로 에탄올 추출물인 RE가 가장 높았으며, SOD 유사활성능도 19.00%로 가장 높았다. $pH\;1.2,\;1,000{\mu}g/mL$의 농도조건에서 아질산염 소거능은 $44.24%{\sim}54.33%$로 PW에서 가장 높은 소거활성을 나타내었다. Xanthine oxidase 저해율은 $5,000{\mu}g/mL$의 농도에서 97% 이상이었으며, 특히 환류 물 추출물인 RW는 $500{\mu}g/mL$의 농도에서도 97% 이상의 높은 저해 효과를 나타내었으며, PW에서도 90% 이상의 저해율을 나타내었다. Tyrosinase 저해율은 $5,000{\mu}g/mL$의 농도에서 $23.88%{\sim}46.25%$로 RE의 저해율이 가장 높은 것으로 분석되었으며, $5,000{\mu}g/mL$의 농도에서도30% 이상의 저해효과를 나타내었다. 이상의 결과로 보아 구릿대 잎의 가압 열수 추출물은 다른 추출물에 비해 많은 폴리페놀을 추출할 수 있으며, 높은 아질산염 소거효과를 나타내었다. 환류 에탄올 추출물은 다른 추출물에 비해 높은 전자공여능, SOD 유사활성능, 그리고 tyrosinase 저해효과를 나타내는 것으로 분석되었다. 따라서 구릿대 잎은 식품 첨가물 및 화장품 원료로 사용할 수 있는 좋은 생물자원으로 판단된다.
토양중 tightly bound paraquat의 효과적인 추출방법을 모색코자 HCl 및 $H_2O_2$첨가 그리고, keldahl 분해장치를 이용하여 회수율 및 여과시간의 단축을 조사하였으며, ammonium chloride와 calcium chloride의 농도와 진탕 시간을 달리하여 loosely bound paraquat의 유출정도를 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 토양 50g에 70ml의 conc. HCl을 첨가하여 시간별로 진탕하고 여기에 진한 황산을 가하여 1시간동안 환류 추출한 결과, 60분간 진탕할때 기존의 추출방법에 비해 A토양은 1.15배 높은 96.7%의 회수율과 4.64배 단축된 14분의 여과 시간을, B토양은 1.09배 높은 84.0%의 회수율과 4.91배 단축된 11분의 여과시간을 나타냈다. 아울러, 이러한 결과는 회수율의 증가는 물론 여과시간의 단축, pH조정과정에서 과다한 NaOH사용을 통한 총용량의 증가 방지, 그리고 전체적인 실험시간의 단축을 꾀할 수 있었다. 2. HCl의 첨가에 의한 진탕과정 없이 $H_2O_2$만을 첨가하는 경우, $H_2O_2$ 30ml첨가하여 30분간의 환류 재추출하는 것이 적정 수준이었는데, 회수율은 증대하였으나 여과시간의 단축은 거의 없었다. 반면, 50ml의 $H_2O_2$ 첨가만으로도 회수율의 증대는 있었으나 실험의 위험성을 고려시 적절하지 못하다고 생각된다. 3. Kjeldahl 분해장치를 이용한 방법으로 회수율의 증대를 나타내는 경향은 있었으나, 반복간의 큰 오차를 나타내었으므로 추출방법으로 적합하지 못하다고 생각된다. 4. Loosely bound paraquat의 추출을 위해 0.01, 0.1, 1, 10M ammonium chloride와 calcium chloride를 이용하여 1.5, 3, 6, 12, 24시간으로 진탕시간을 달리하여 분석한 결과, 시간, 농도, 추출액의 변화에도 불구하고 모든 처리구에서 paraquat은 검출한계 미만의 수준이었다.
항산화 활성이 우수할 것으로 기대되는 남구절초($Dendranthema$$zawaskii$ var. $yezoense$)와 코스모스($Cosmos$$bipinnatus$) 지상부의 항산화 물질 함량 및 항산화 활성을 증가시킬 수 있는 효율적인 추출방법을 개발하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 추출수율은 두 종 모두 초음파추출물에서 우수하였으며, 환류냉각추출물보다 1.11-1.92배 증가되었다. 총 폴리페놀과 총 플라보노이드의 함량 또한 초음파추출물에서 우수하였다. 총 폴리페놀은 함량은 45분 동안 초음파추출한 코스모스에서 $80.70mg{\cdot}g^{-1}$ DW로 가장 높았고, 총 플라보노이드 함량은 45분 동안 초음파추출한 남구절초에서 $50.41mg{\cdot}g^{-1}$ DW로 가장 높았다. DPPH radical 소거능은 추출방법에 따른 차이가 없거나 환류냉각추출물이 다소 우수한 경향을 보였으며, 환류냉각추출한 코스모스 지상부 추출물의 소거능($RC_{50}=0.135mg{\cdot}mL^{-1}$)이 가장 우수하였다. ABTS radical 소거능은 남구절초와 코스모스 모두 초음파 15분 추출물에서 가장 우수하였다(각각 $RC_{50}$=0.159, $0.139mg{\cdot}mL^{-1}$). $Fe^{2+}$ chelating효과는 30분 동안 초음파추출한 남구절초 지상부에서 가장 높았다($RC_{50}=0.803mg{\cdot}mL^{-1}$). 남구절초 지상부 추출물의 지질과산화 억제활성은 환류냉각추출물에서 가장 우수하였으나, 코스모스 지상부 추출물의 지질과산화 억제활성은 45분 동안 초음파추출한 처리구에서 가장 높았다. 연구 결과, 식물 종과 목표로 하는 항산화 효과에 따라 추출방법을 달리해야 할 것으로 생각되었다.
New HPLC method was developed for determination of some flavonoids such as naringin, hesperidin, neohesperidin, rutin, quercitrin, naringenin, hesperetin and apigenin and their contents in citrus juice and citrus peel from citrus varieties Brown in Cheju. Detection was at 280nm and reverse phase ${\mu}$-Bondapak C-18 column was used. Water/methanol/acetic acid as the mobile phase was better than water/acetonitrile/acetic acid. Flavonoids were more stable in 20% n,n-dimethylformamide in methanol(20% DMF) than methanol and pH 12 adjusted by 1N-sodium hydroxide solution. Standard flavonoid solutions were injected three times consecutively and the reproduciability was 0.236 to 3.550%, Correlation coefficient of the calibration curve was 0.9946 to 0.9999. The exiraction efficiency of hesperidin from citrus peel was evaluated with different extraction method such as reflux, ultra-sonicating method, using three solvents (aqueous solutions with pH12 adjusted by 1N-sodium hydroxide, methanol and 20% DMF), respectively. The reflux for 4 hour in 20% DMF was the most efficient of the tested methods and solvents, and recovery percentage were 78.0∼130.0%. Flavonoids were determined in citrus juice. Naringin was 68.2mg/100$m\ell$ in Natsudaidai, Hesperidin were 85.6mg/100$m\ell$ in Sankyool and Neohesperidin was 25.3mg/100$m\ell$ in Dangyooja. Flavonoids were determined in citrus peel. Naringin was 110mg/g in Dangyooja, Hesperidin was 242mg/g in Hungjin and Neohesperidin was 87.9mg/g in Dangyooja.
고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 고삼 중의 oxymatrine을 분석하였다. acetonitrile을 포함하는 완충용액과 $C_{18}$컬럼을 이용한 역상 크로마토그래피를 수행하였다. Oxymatrine의 분리는 215 nm에서 UV흡수가 관측되었다. 고삼 중의 oxymatrine의 추출은 다양한 용매와 다양한 추출방법을 사용한 결과, 마쇄한 고삼의 최적의 추출 효율은 $80^{\circ}C$에서 50% ethanol로 5시간 동안 환류가열 하였을 때 가장 높은 효율을 보였다. 대부분의 추출 방법은 복잡한 전처리를 필요로 하지만, 본 연구에서는 승화 추출법으로 복잡한 전처리를 제외시킨 추출법을 고안하였다. 승화 추출은 높은 진공 ($1{\times}10^{-3}$ torr) 과 높은 온도 ($200^{\circ}C$)에서 수행되었다. 승화 추출법을 사용한 추출 효율은 다른 추출 방법들과 비교해서 전처리 과정을 거치지 않은 장점은 있었으나 추출 효율이 좀 낮았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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