The recognition and cleavage of 5S rRNA from P. alcaligenes by metallopeptides to the form $Ni(II){\cdot}Gly$-Gly-His(Arg)COOH and $Cu(II){\cdot}Gly$-Gly-His(Arg)COOH were investigated. The results of RNA cleavage analyses suggest that metallopeptides selectively target the unpaired or unstably paired bases of stem-loop structure of 5S rRNA. The selectivity of metallopeptides was little affected by the species of metal ion, Ni(II) or Cu(II). When the result of cleavage by metallopeptides was compared with that of by metal complexes M(II)CR, the recognition by metallopeptides was more selective and structure specific. The cleavage data by metallopeptides and other metal complexes were used to probe the secondary structure of 5S rRNA from P. alcaligenes.
Kim, Sang-Bumn;Cho, Bong-Rae;Lee, Young-Hoon;Park, In-Won
BMB Reports
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v.29
no.2
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pp.133-136
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1996
The affinity cleavage reagent Methidiumpropyl-EDTA-Iron(II) is applied to the structural analysis of 5S rRNA. Analysis of cleavage sites induced by MPE-Fe(II) on 5S rRNA shows that MPE intercalates easily between the unstable base pairs or into the bulges, thereby it strongly cuts the nucleosides nearby. The stable helical stems A, B, D and E as well as loop d are weakly cut. Most of the single-stranded loops are not cleaved. Based on the cleavage pattern of the 5S rRNA by MPE-Fe(II) and RNase V1, we suggest that MPE-Fe(II) may be used as a potential chemical probe in searching for the unstable helical regions of RNA, and for the sequences that appear to be involved in folding and distorting 5S rRNA.
The objective of this study was to determine the breed differences in the 3'-untranslated region (UTR) of MC1R mRNA, which may be used to distinguish Korean brindle cattle (Chikso) from other breeds. We investigated the relationship between the variation of 3'-UTR of the MC1R mRNA and coat color among different breeds and the Korean brindle cattle with different coat colors. MC1R mRNA expression levels were determined in accordance with the coat color and hair colors of the tail. Total cellular RNA was extracted from the hair follicles of the tails in Hanwoo, Korean brindle cattle, Holstein and $Hanwoo{\times}Holstein$ crossbred cattle. After cDNA synthesis, PCR was performed. Sequences of the 3'-UTR of MC1R mRNA were analyzed. The 3'-UTR of the MC1R mRNA from different breeds of cattle did not show any variations. There were no variations in the 3'-UTR of the MC1R mRNA in Korean brindle cattle with different coat colors. The levels of MC1R mRNA expression in hair follicles of the tail varied substantially among the Korean brindle cattle with different coat colors, except yellow coat color. Correlation between the MC1R mRNA expression in the hair follicles of the tail and coat color may be present in the Korean brindle cattle, but not between the variations of 3'-UTR of MC1R mRNA and coat color. Further studies to determine the regulation of MC1R mRNA expression from the hair follicles of different coat colors will be beneficial in clarifying the role of MC1R in the coat colors of the Korean brindle cattle.
In order to find novel sRNA in Bacillus subtilis which would be used to adapt to several conditions, we searched the whole genome of Bacillus subtilis using the following procedure. At first, the locations of recognition sequence of transcription factors such as PerR, OhrR, Fur and Zur were searched in the intergenic region of Bacillus subtilis genome and the locations of rho independent transcription terminator sites were also determined. Based on the information of these locations, the sRNA candidates were chosen by close locations (less than 300 bp) between the recognition site of transcription factors and rho independent transcription terminator site. Than transcription promoter sites were searched in the region of previously identified sRNA candidates and 5 PerR, 1 OhrR, 1 Fur and 1 Zur regulated good sRNA candidates were found.
This study has demonstrated the molecular variation of 5S rRNA genes in 15 Allium subgenus Rhizirideum and 1 Allium subg. Allium. For cloning of the 5S rRNA genes, PCR products were obtained from amplification with oligonucleotide primers which were derived from the conserved coding region of 5S rRNA genes. These amplified PCR products were cloned and identified by FISH and sequence analysis. The 5S rRNA loci were primarily located on chromosomes 5 and/or 7 in diploid species and various chromosomes in alloploid species. The size of the coding region of 5S rRNA genes was 120 bp in all the species and the sequences were highly conserved within Allium species. The sizes of nontranscribed spacer (NTS) region were varied from 194 bp (A. dektiude-fustykisum, 2n=16) to 483 bp (A. sativum). Two kinds of NTS regions were observed in A. victorialis var. platyphyllum a diploid, A. wakegi an amphihaploid, A. sacculiferum, A. grayi, A. deltoide-fistulosum and A. wenescens all allotetraploids, while most diploid species showed only one NTS region. The species containing two components of NTS region were grouped with different diploid species in a phylogenetic tree analysis using the sequences of 5S rRNA genes and adjacent non-coding regions.
We have examined the 16S-23S rRNA intergenic spacer region (ISR) of Vibrio vulnificus KCTC 2959. ISRs were amplified by primers complementary to conserved regions of 16S and 23S rRNA genes. ISR amplicons were cloned and sequenced. Analysis of the ISR sequences showed that V. vulnificus KCTC 2959 contains five types of polymorphic ISRs. Size of ISRs ranged from 424 to 741 bp in length and the number of tRNA genes ranged from one to four. The ISRs were designated as ISR-E $(tRNA^{Glu}),\;ISR-IA\;(tRNA^{Ile}-tRNA^{Ala})$, ISR-EKV $(tRNA^{Glu}-tRNA^{Lys}-tRNA^{Val})$, ISR-IAV $(tRNA^{Ile}-tRNA^{Ala}-tRNA^{val})$ and ISR-EKAV $(tRNA^{Glu}-tRNA^{Lys}-tRNA^{Ala}-tRNA^{Val})$ based on their tRNA genes. Multiple alignment of representative sequences from different Vibrio species revealed several domains of high sequence variability. We used the sequences of variable domains to design species-specific primer for detection PCR. Specificity of the primers was examined using genomic DNA prepared from 18 different Vibrio species. The results showed that the PCR using primers designed in this study can be used to detect V. vulnificus from other Vibrio species.
Small subunit ribosomal RNA (SSU rRNA) gene nucleotide sequences of bovine ReiLerin isolates from Korea (KLS and KCB) and japan (JHS) were determined. The genes from each isolate were amplified by the polymerase chain reaction and the approxi- mately 1.8 kb product cloned and sequenced by a modified dideoxynucleotide method. Overlapping gene segments produced with a series of primers were sequenced, resoRting in a complete DNA sequence for both forward and reverse strands of the SSU rRNA genes of each isolate. SSU rRNA gene sequences (termed Type A) were identical among the bovine ReiLeri,n isolates from Korea and the isolate from Japan. A GenBank data library homolo- gy search showed the sequence to be the same as that listed as leiLeyia buKeLi isolated from cattle in Marula, Kenya.
The 16S rRNA gene is the most common gene in the phylogenetic analysis of procaryotes. However very high conservative of 16S rRNA has limitation in the discrimination of highly related organisms, hence other molecule was applied in this study and the result was compared with that of 16S rRNA. Three COGs (Clusters of Orthologous of protein) were only detected in 42 procaryotes ; transcription elongation facto. (COG0195), bacterial DNA primase (COG0358) and uridylate kinase (COG0528). Uridylate kinase gene was selected because of the similarity and one single copy number in each genome. Bacteria, belong to same genus, and Archaebacteria were same position with high bootstrap value in phylogenetic tree like the tree of 16S rRNA. However, alpha and epsilon Proteobcteria showed different position and Spirochaetales of Eubarteria was grouped together with Archaebacteria unlike the result of 16S rRNA. Uridylate kinase may compensate the problem of very high conservative of 16S rRNA gene and it would help to access more accurate discrimination and phylogenetic analysis of bacteria.
In the barly coleptile sections treated with either $1{\times}10^{-5}M$ abscisic acid (ABA) or $1{\times}10^{-5}M$ gibberellic acid (GA), the time course changes of ribonuclease (RNase) activity and ribonucleic acid (RNA) profiles were studied. The results may be summarized as follows: 1. While GA suppressed RNase activity, ABA activated it. 2. High level of s-RNA and low level of r-RNA compared with normal plant sections in hormone-untreated coleoptiles seemed to be the results of increased RNase activity in the incubation period. 3. While GA retarded the decomposition of r-RNA, ABA activated it and the results seemed to be related with RNase activity. 4. GA activated the synthesis of RNA-DNA component, and ABA suppressed it. 5. Increase in the amount of s-RNA with the treatment of ABA may be due to the decomposition of r-RNA.
The genetic variations among six species of Rana from Korea (R. nigro-maculata, R. piancyi, R. dybowskii, R. sp, R. rugosa type A, B and R. amurensis) were investigated using 499 bases of mitochondrial DNA sequences for ND2 (NADH dehydrogenase subunit 2) gene and $tRNA^{Trp}$ gene. Partial sequences of ND2 gene (427 bp) and full sequences of $tRNA^{Trp}$ gene (73 bp) were identified. The level of sequence divergences ranged from 0.2 to 5.2% within species and 4.9-28.0% among 6 species of the genus Rana. The $tRNA^{Trp}$ gene of the genus Rana was composed of 77 nucleotides which showed a two dimensional "cloverleaf" structure. The secondary structure of $tRNA^{Trp}$ was not found compensatory changes which could potentially confound phylogenetic inference. In the neighborjoining tree, brown frogs were clustered first with the level of sequence divergence of 13.20% between R. amurensis and R. dybowskii, and 9% between R. dybowskii and R. sp. supported by 99% bootstrap iterations, respectively. R. nigromaculata and R. plancyi were clustered into another group with 5.1% divergence supported by 100% bootstrap iteration. R. rugosa A 8nd B types were grouped by 4.9% divergence and clustered into the last group with other two groups with 100% bootstrap iterations.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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