Chitosan을 Bacillus pumilus BN-262 유래의 chitosanase로 처리하여 trimer, tetramer, pentamer가 전체 올리고당 중 64.3%에 달하는 비교적 저분자의 chitooligosaccharides로 구성된 LMW-chitooligosaccharides를 얻었으며, chitosan을 Trichodema viride 유래의 cellulase로 처리하여 중합도 7 이상의 것이 전체 올리고당 중 49.3%에 달하는 상대적으로 분자량이 큰 chitooligosaccharides로 구성된 HMW-chitooligosaccharides 를 얻었다. 제조된 Chitooligosaccharides의 마우스에 대한 급성경구독성을 조사하였다. Chitooligosaccharides는 마우스에 대하여 어떠한 독성 효과도 보이지 않았으며 반수치사량은 5g/kg 이상인 것으로 추정되었다.
적색효모 세포벽 용해효소의 기질특이성을 밝히기 위해 기질로 사용가능한 다당을 screening하여 Rh.glutinis IFO 0695가 생산하는 mannan을 얻었다. 이 mannan의 구조는 $\beta$-1,3과 $\beta$-1,4 결합이 교대로 연결된 직쇄상의, 중합도 약 650인 수용성의 다당으로 밝혀졌다. 이 다당을 기질로하여 양 효소의 기질특이성을 조사한 결과, Bacillus생산효소는 $\beta$-1. 3, $\beta$-1. 4 mannan을 4당 또는 6당 단위로 가수분해하는 효소로서 그 절단점은 $\beta$-1, 4결합 이었다. 이 $\beta$-1,4 결합을 가수분해하기 위해서는 인접 결합이 $\beta$-1,3결합이어야만 하는 새로운 type의 $\beta$-1,4 mannauase이었다. 한편, Penicillium생산효소는 $\beta$-1, 3, $\beta$-1, 4 mannan의 $\beta$-1, 3결합을 2당 또는 4당의 단위로 가수분해하여 최종적으로는 2당을 생성하는 $\beta$-1, 3 mannanase의 일종이었다.
음식물류폐기물의 친환경적 처리를 위한 소재를 개발하기 위하여 지렁이로부터 유기물 분해 및 응집능을 갖는 기능성 미생물을 분리하였다. 분리된 균주 중 음식물류폐기물을 처리하는데 적합한 것으로 판단되는 균주를 최종 선별하여 JS-01균주로 명명하였으며 16s rDNA 염기서열분석에 의한 최종결과, Bacillus pumilus로 동정되었다. 0.5% Kaolin clay을 대상으로 JS-01균주의 응집능을 조사한 결과 응집을 위한 최적 생장조건은 MRS 액체배지에서 온도 $37^{\circ}C$ 및 pH 7.0으로 나타났다. 유기물분해능 중에서는 특히, 음식물류폐기물의 대표적 성분인 섬유소에 대한 분해능을 확인하였다. 따라서 JS-01균주는 음식물류폐기물의 친환경적 처리 및 재활용을 위한 미생물 소재 및 음식물 침출수의 효과적인 응집 처리를 위한 생체량 생성에 이용할 수 있을 것으로 사료된다.
We report the construction of two Bacillus subtilis expression vectors, pBNS1/pBNS2. Both vectors are based on the strong promoter P43 and the ampicillin resistance gene expression cassette. Additionally, a fragment with the Shine-Dalgarno sequence and a multiple cloning site (BamHI, SalI, SacI, XhoI, PstI, SphI) were inserted. The coding region for the amyQ (encoding an amylase) signal peptide was fused to the promoter P43 of pBNS1 to construct the secreted expression vector pBNS2. The applicability of vectors was tested by first generating the expression vectors pBNS1-GFP/pBNS2-GFP and then detecting for green fluorescent protein gene expression. Next, the mannanase gene from B. pumilus Nsic-2 was fused to vector pBNS2 and we measured the mannanase activity in the supernatant. The mannanase total enzyme activity was 8.65 U/ml, which was 6 times higher than that of the parent strain. Our work provides a feasible way to achieve an effective transformation system for gene expression in B. subtilis and is the first report to achieve B. pumilus mannanase secretory expression in B. subtilis.
우리 나라 전통발효식품인 된장으로부터 angiotensin 전환효소(angiotensin converting enzyme, ACE) 저해활성이 우수한 균주 SYG3를 분리하여 형태학적, 배양학적, 생리학적인 특성을 조사한 결과 B. pumilus 또는 그 유연균으로 동정되었다. 분리 균주의 ACE 저해물질 생산조건을 알아보기 위해 각종 배양조건에 따른 저해활성을 조사한 결과, 탄소원으로서는 glucose, 질소원으로서는 soybean powder에서 가장 높은 저해활성을 나타내었으며, skim milk와 casein에서도 비교적 높은 저해활성을 나타내었다. Soybean powder 농도에 따른 저해활성은 5%(w/v) 첨가시 가장 높은 저해활성을 나타내었으며. 그 이상의 농도에서는 저해활성의 변화가 거의 없었다. NaCl 농도는 3%(w/v) 첨가시 저해활성이 가장 높은 것으로 나타났으며 배양온도는 $32^{\circ}C$, 초기 pH 7.0에서 가장 높은 저해활성을 나타내었다. 최적배지조건에서의 배양시간에 따른 ACE 저해활성은 배양 36시간에 약 98%로서 최고에 도달하였다.
돈분 고속발효에 적합한 미생물 제제를 개발하기 위하여 Bacillus속을 돈분에서 분리한 후,분리 균주의 생장능력, 효소활성 및 상호균주에 대한 항균활성을 비교 분석하였다. 분리된 4종을 동정한 결과, Bacillus cereus KD-2, B. pumilus KD-3, B. licheniformis KD-4로 분석되었고, 분리균주 KD-1은 그 어떤 Bacillus 종들과도 높은 일치성을 보이지 않았다. 생장최고온도는 Bacillus sp. KD-1이 $45^{\circ}C$, B. cereus KD-2가 $50^{\circ}C$, B. pumilus KD-3는 $53^{\circ}C$, B. licheniformis KD-4는 $55^{\circ}C$이었다. 이들 균주 모두를 혼합한 미생물 제제의 효소활성은 protease와 amylase는 37-$53^{\circ}C$ 범위에서 그 활성도에 차이를 보이지 않았고, lipase는 37-$42^{\circ}C$에서의 효소활성이 47-$53^{\circ}C$에 비해 2배 이상 높았다. 혼합 미생물 제제에 사용된 균주들의 상호 항균활성은 Bacillus sp. KD-1, B. cereus KD-2, B. pumilus KD-3는 타 균주의 생장에 영향을 주지 않았고, B. licheniformis KD-4의 배양 상층액을 10% (v/v)의 농도로 첨가시 다른 균주의 생장에 거의 영향을 주지 않았으나, 50% (v/v)로 혼합할 경우 다른 균주들의 생장을 억제하였다. 이 미생물 혼합 제제로 발효된 유기질비료의 성분은 유기물이 61.9%, 질소가 1.6%, C/N비가 22.4%, 인산이 0.21%, 칼리가 1.0%로 분석되었다. 발효 부산물인 액체비료의 암모니아 가스농도는 12.35 mg/1로 낮게 검출되었다.
Vahed, Majid;Motalebi, Ebrahim;Rigi, Garshasb;Noghabi, Kambiz Akbari;Soudi, Mohammad Reza;Sadeghi, Mehdi;Ahmadian, Gholamreza
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권11호
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pp.1519-1528
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2013
Bacillus pumilus SG2, a halotolerant strain, expresses two major chitinases designated ChiS and ChiL that were induced by chitin and secreted into the supernatant. The present work aimed to obtain a mutant with higher chitinolytic activity through mutagenesis of Bacillus pumilus SG2 using a combination of UV irradiation and nitrous acid treatment. Following mutagenesis and screening on chitin agar and subsequent formation of halos, the mutated strains were examined for degradation of chitin under different conditions. A mutant designated AV2-9 was selected owing to its higher chitinase activity. To search for possible mutations in the whole operon including ChiS and ChiL, the entire chitinase operon, including the intergenic region, promoter, and two areas corresponding to the ChiS and ChiL ORF, was suquenced. Nucleotide sequence analysis of the complete chitinase operon from the SG2 and AV2-9 strains showed the presence of a mutation in the catalytic domain (GH18) of chitinase (ChiL). The results demonstrated that a single base change had occurred in the ChiL sequence in AV2-9. The wild-type chitinase, ChiL, and the mutant (designated ChiLm) were cloned, expressed, and purified in E. coli. Both enzymes showed similar profiles of activity at different ranges of pH, NaCl concentration, and temperature, but the mutant enzyme showed approximately 30% higher catalytic activity under all the conditions tested. The results obtained in this study showed that the thermal stability of chitinase increased in the mutant strain. Bioinformatics analysis was performed to predict changes in the stability of proteins caused by mutation.
건포류 86건에 대한 시험 결과, 37건(43.0%=37/86)에서 Bacillus spp가 18건(20.9%=18/86)에서 B. cereus가 분리되었다. 분리 동정된 37주는 B. cereus 48.6%(18/37), B. mycoides 13.5%(5/37), B. coagulus 5.4%(2/37). B. firmus 5.4%(2/37), B. circulus 2.7%(1/37), B. stearothermophilus 2.7%(1/37), B. pumilus 2.7%(1/37), E. spp. 8.1%(3/37), 그리고 Brebacillus brevis 10.8%(4/37) 등으로 나타나 식중독균의 일종인 B. cereus가 가장 많이 나타나 주의를 요할 것으로 사료된다.
This study was carried out to investigate the characteristics of extracellular cellulase and xylanase from 4 selected different species, such as enzyme activity and stability by pH, temperature and metal ions, for application into enzymatic deinking system. The optimal temperature and pH for enzyme activity of Bacillus pumilus I, B. subtilis I, B. pumilus II and B. subtilis II were mainly $40{\sim}60^{\circ}C$ and pH $6.0{\sim}7.0$, respectively. Certain metal ions, calcium and cobalt, elevated enzyme activity, even though there were different results of enzyme activities based on various metal ions in 4 different species. With these results we suggest that enzymatic deinking system should be proceed at $50^{\circ}C$ with neutral pH condition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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