• BMB Reports
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• 제34권1호
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• pp.80-84
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• 2001

The human papillomavirus E7 protein can form a specific complex with a retinoblastoma tumor suppressor gene product (p105-Rb) that results in the release of the E2F transcription factor, which is critical for the growth-deregulation and transforming properties of the viral E7 oncoprotein. In an attempt to apply interaction between the E7 oncoprotein and a target cellular protein Rb for an in vitro screening system for drugs against human papillomavirus infection, we primarily investigated the E7Rb binding through a pull down assay and enzyme-linked immunosorbent assay. The pull down assay showed that both glutathione S-transferase-tagged E7 and His-tagged E7 immobilized on resins specifically produced complexes with bacterially expressed Rb in a dose-dependent manner, as determined by immunoblot analyses. This result coincided with that of an enzyme-linked immunosorbent assay, which is a useful system for the mass screening of potential drugs. Taken together, this screening system (based on the interaction between E7 and Rb) can be a promising system in the development of drugs against cervical cancers caused by human papillomavirus infection.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권4호
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• pp.260-266
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• 2005

본 실험에서는 MRF가 다량 존재하는 RBL-2H3 세포주에 다양한 PKC isotype별 억제제를 처리하여 in vitro상에서 Na, K-ATPase $\alpha$1L3를 이용한 pull-down assay와 RBL-2H3 세포를 이용한 membrane fractionation을 실시하였다. 그 결과 HRF는 in vitro에서 $\alpha$1L3와 결합한다는 사실을 재확인 할 수 있었고 실제 세포주 내에서 Na,K-ATPase와 결합한다는 것을 알 수 있었다. 사용한 약물로부터 PKC $\alpha,\;\beta,\;\delta$뿐 아니라 protein phosphatase 2B(PP2B)도 HRF와 $\alpha$1L3의 결합에 관여한다는 사실을 알 수 있었다. 또한 이들 PKC, PP2B에 의해 인산화된 HRF 분자는 cytosolic fraction으로 이행할 수 있으며 이러한 결과는 탈인산화된 HRF가 Na,K-ATPase와 결합하여 Na, K-ATPase의 기능을 조절한다고 추정할 수 있다. 그러나 약물자체가 histamine 분비에 영향을 미칠 수 있으며 cytosolic HRF보다 exocytosis된 HRF가 histamine를 더 분비하도록 할 수 있으므로, 약물을 전처리한 세포에 외부에서 HRF를 첨가하여 histamine이 유리되는 정도가 어떻게 변화하는지를 HRF를 가하지 않은 결과와 비교해야 할 것이다.

• 생명과학회지
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• 제20권8호
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• pp.1166-1172
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• 2010

Kinesin-I은 4분자의 단백질로 구성되어 있으며, N-말단의 motor 영역과 C-말단영역을 가지는 장쇄(KHC, 또한 KIF5s로도 통용) 2분자와 KIF5s (KIF5A, KIF5B와 KIF5C)의 줄기영역과 결합하는 단쇄(KLC) 2분자로 구성되어 있다. KIF5A의 결합 단백질을 동정하기 위하여 효모 two-hybrid system을 사용하여 특이적으로 결합하는 heterotrimeric G 단백질의 ${\beta}$ 단위체 단백질($G{\beta}$)을 분리하였다. $G{\beta}$은 KIF5A의 808에서 935아미노산 부위와 결합하며, 다른 KIF5들과도 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 $G{\beta}$의 WD40 반복 서열은 KIF5A와의 결합에 필수영역임을 확인하였으며, 이러한 단백질간의 결합은 Glutathione S-transferase (GST) pull-down assay를 통하여 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액에 KIF5들의 항체로 면역침강을 행하여 heterotrimeric G 단백질을 확인한 결과, KIF5들은 heterotrimeric G 단백질과 특이적으로 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 kinesin-I는 heterotrimeric G 단백질이 포함된 소포를 미세소관을 따라 이동시킴을 시사한다.

• BMB Reports
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• 제38권4호
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• pp.381-385
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• 2005

Severe acute respiratory syndrome (SARS) is an emerging infectious disease associated with a novel coronavirus (CoV) that was identified and molecularly characterized in 2003. Previous studies on various coronaviruses indicate that protein-protein interactions amongst various coronavirus proteins are critical for viral assembly and morphogenesis. It is necessary to elucidate the molecular mechanism of SARS-CoV replication and rationalize the anti-SARS therapeutic intervention. In this study, we employed an in vitro GST pull-down assay to investigate the interaction between the membrane (M) and the nucleocapsid (N) proteins. Our results show that the interaction between the M and N proteins does take place in vitro. Moreover, we provide an evidence that 12 amino acids domain (194-205) in the M protein is responsible for binding to N protein. Our work will help shed light on the molecular mechanism of the virus assembly and provide valuable information pertaining to rationalization of future anti-viral strategies.

• 생명과학회지
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• 제24권1호
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• pp.14-19
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• 2014

Kinesin-1은 2개의 장쇄(KHCs, 또는 KIF5s)와 2개의 단쇄(KLCs)가 결합한 복합체로 되어 있다. 본 연구에서 효모 two-hybrid system을 이용하여 중추신경계의 신경세포에서 주로 발현되는 KIF5A와 결합하는 단백질을 탐색한 결과 phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate ($PI(3,5)P_2$)의 5번 위치 인산을 제거하는 탈인산화효소 Fig4(Sac3)를 분리하였다. KIF5A는 Fig4의 C-말단과 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. Fig4는 KIF5A의 C-말단과 결합하지만, 두 개의 다른 장쇄인 KIF5B와 KIF5C 그리고 KLC1와는 결합하지 않았다. 단백질 간 결합을 glutathione S-transferase pull-down assay와 공동면역침강으로 추가 검증하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액을 KIF5A 항체로 면역 침강한 결과 Fig4가 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 kinesin-1이 Fig4와 결합한 단백질 복합체 혹은 운반체를 세포 내에서 운반함을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제21권4호
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• pp.613-615
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• 2011

ERp29는 endoplasmic reticulum (ER) lumen에 존재하는 단백질로 protein disulfide isomerase (PDI) family에 속한다. 비록 관련 연구 결과는 조금 있지만 정확한 생물학적인 기능은 아직 분명하지 않지만, 분비단백질과정과 단백질 folding에 관여하는 것으로 알려 지고 있다. ERp29의 기능 연구를 위하여 yeast two-hybrid screening/GST pull-down assay방법을 사용하여 ERp29-결합단백질인 ADP-ribosylation factor 5 (ARF5)를 동정하였다. 이들의 결합은 정상적인 세포생리상태에서는 결합하지만 ER stress 상태에서는 떨어졌다. 이 결과는 ERp29의 기능 연구를 위하여 하나의 실마리를 제공할 것이다.

• 한국산림과학회지
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• 제89권3호
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• pp.431-439
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• 2000

이 연구에서는 환경친화적 임도 노선 선정과 임도 노선에 대하여 환경적 공학적 특성을 평가할 수 있는 GIS 응용 전산 프로그램을 개발하였다. 이 모델은 도형 및 속성 자료 관리 모듈, 적정 노선 선정 모듈, 노선의 환경적 공학적 효율성 평가 모듈, 산악 지형 분석 모듈, 평가서 작성 모듈의 5개 세부 모듈로 구성되었으며, 이 모듈들은 임업 현장 실무에서 쉽게 활용될 수 있도록 'pull-down' 메뉴 체계로 개발되었다. 모델의 운영 체계는 ESRI사의 Avenue, Microsoft의 Visual Basic 6.0을 이용하여 작성하였고, GIS 엔진은 ArcView 3.1, Spatial Analyst 및 3-D Analyst를 이용하였다. 이 논문에는 임도 노선 선정 및 평가와 관련된 응용 원리 및 전산 모델의 구조와 운용 체계가 제시되었다.

• 생명과학회지
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• 제19권7호
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• pp.859-865
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• 2009

미세소관은 세포골격단백질의 중요한 구성 단백질로 축삭돌기 내에서는 세포막 방향으로 정렬되어 있다. Kinesin superfamily (KIFs)는 세포 내에서 미세소관을 따라 세포 내 소포들을 운반하는 분자 자동차 (molecular motor) 단백질이다. 본 연구에서 우리는 효모 two-hybrid system을 사용하여 KIF1A의 coiled-coil 영역과 결합하는 단백질로 미세소관 불안정화 요소인 SCG10 단백질을 분리하였다. SCG10은 KIFs에서 KIF1A와만 특이적으로 결한 하며, KIF1A의 400에서 820아미노산 부위가 SCG10과의 결합에 필수적임을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 SCG10의 coiled-coil영역은 KIF1A와의 결합에 필수영역임을 확인하였으며 단백질간의 결합은 Glutathione S-transferase pull-down assay를 통하여 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액에 SCG10항체로 면역침강을 행하여 KIF1A를 확인한 결과KIF1A는 SCG10과 특이적으로 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 KIF1A는 SCG10와 결합하여 SCG10이 포함된 소포를 미세소관을 따라 이동시킴을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제15권6호
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• pp.928-934
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• 2005

ATF2는 c-Fos와 c-Jun과 같은 전사인자이며 이들은 루신지퍼 단백질이다. 루신지퍼 단백질은 동형이합체 혹은 이형이합체를 형성하며 promoter 영역에 결합하여 전사조절에 중요한 역할을 한다. 세포의 전사인자 ATF2는 ATF/CRE site에 결합하며 특히 선택적인 interfamily 이형이량체를 형성함으로써 전사 조절에 있어서 다양한 메카니즘을 제공할 수 있다. 본 연구에서는 ATF2 cDNA를 6xHis를 가진 expression vector에 subcloning하여 E.cnli BL2l에서 발현시켰다. 6xHis tag은 nickel-chelating chromatography를 가능하게 하였다 발현된 ATF2는 In vitro binding pull-down assay에서 동형이합체를 이를 뿐만 아니라 AP-1 그룹의 인자들과 선택적인 이형이합체를 형성함을 보여 주었다. BATF와는 강하게 결합하였으며 c-Jun과도 안정된 이합체를 형성하였다. 그러나 c-Fos와는 이합체를 형성하지 않으므로서 AP-1그룹 내에서도 이합체 형성이 선택적으로 이루어짐을 알 수 있다.

• 대한의용생체공학회:의공학회지
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• 제15권3호
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• pp.333-340
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• 1994

임상병리과 정보관리시스템은 임상병리과에서 검사결과를 관리하는데 필수적인 요소이다. 저자들은 일반혈액 검사실의 전반적인 업무와 백혈구 감별검사에 대해 개인용 컴퓨터인 IBM 486 PC의 호환기종과 SCO foxbase 데이터베이스를 사용하여 일반 혈액검사실 정보관리시스템을 개발하였다. 사용한 컴퓨터는 주 기억용량이 16MB이고 하드디스크가 210MB, 9개의 RS-232C를 가진 IBM 호환 486 개인용 컴퓨터이고, 출력은 24핀 도트 프린터를 사용하였다. 이 시스템은 두대의 자동혈구분석기와 연결하여 검사결과를 자동으로 입력받고 병원의 주 컴퓨터와 API 기능을 사용하여 검사정보 및 검사결과를 전달할 수 있도록 하였다. 프로그램의 개발은 SCO foxbase에 내장된 Xbase 언어를 사용하였으며, 병원 주 전산기와 자동혈구분석기와의 연결은 C언어를 사용하였다. 이 시스템은 저렴한 비용으로 일반 혈액 검사실의 전산화를 구축할 수 있어 향후에 추진될 임상병리과 전체의 정보관리시스템을 구축하는데 일부분이 되고 다른 병원에서 임상병리과 전산화를 구축할 때에 모델이 될 것으로 사료된다.