• 생명과학회지
• /
• 제19권8호
• /
• pp.1055-1061
• /
• 2009

${\alpha}$-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionate (AMPA) 수용체는 중추신경계에 널리 발현하며, 연접부위에서 글루타메이트에 의한 흥분성 신경전달의 역할을 행한다. 이러한 수용체의 조절은 학습과 기억에 관여한다. 본 연구에서는 AMPA receptor subunit glutamate receptor-interacting protein 1 (GRIP1)과 결합하는 단백질로 armadillo family인 p0071/plakophilin-4을 분리하였다. GRIPl 단백질은 p0071/plakophilin-4 단백질의 C-말단과 결합하며, armadillo family 단백질 중 p0071/plakophilin-4 과만 결합한다. 효모 two-hybrid assay에서 GRIPl의 Postsynaptic density-95/Discs large/Zona occludens-1 (PDZ) 영역이 p0071/plakophilin-4 단백질과의 결합에 관여하며, p0071/plakophilin-4 단백질의 C-말단 아미노산인 "S-X-V" 배열이 결합에 필수적이었다. 이러한 결합은 뇌 균질액에서 Glutathione S-transferase (GST) pull-down assay와 공면역침강법으로 확인하였다. 이러한 결과들은 AMPA 수용체가 연접후막에 안정적으로 위치하는 새로운 역할을 시사한다.

• 생명과학회지
• /
• 제22권12호
• /
• pp.1608-1613
• /
• 2012

KIF5/Kinesin-I는 경쇄(light chain)를 통하여 결합함으로써 다양한 운반체들을 미세소관을 따라 운반한다. Kinesin light chains (KLCs)은 tetratricopeptide repeat (TPR) 영역을 매개로 운반체와 결합한다. 현재까지 KLCs와 결합하는 많은 운반체들이 확인되었으나 KLCs가 어떻게 특정운반체를 인식하여 결합하는지는 아직 확실히 밝혀지지 않았다. 본 연구에서 KLC1의 TPR 영역과 결합하는 단백질을 분리하기 위하여 효모 two-hybrid system을 이용하여 탐색한 결과 amyloid precursor protein (APP)과 결합하는 것으로 보고된 protein interacting with APP tail 1 (PAT1)을 분리하였다. KLC1은 PAT1의 C-말단 부위와 결합하며, PAT1은 KLC1의 TPR 영역을 포함한 부위와 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 PAT1는 KLC2와도 결합하였지만 kinesin heavy chains (KHCs)인 KIF5A, KIF5B, KIF5C와는 결합하지 않았다. 단백질간 결합은 glutathione S-transferase (GST) pull-down assay와 공동면역침강으로도 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액을 PAT1 항체와 APP 항체로 면역침강을 행한 결과 KLC와 KHCs가 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 PAT1이 Kinesin-I와 APP 포함 소포간의 상호작용을 매개한다는 것을 시사한다.

• 생명과학회지
• /
• 제20권7호
• /
• pp.1005-1011
• /
• 2010

$\gamma$-aminobutyric acid (GABA)는 중추신경계에서 억제성으로 작용하는 주요한 신경전달물질이다. GABA 수송체(GAT)는 연접간격에 존재하는 GABA를 세포 내로 재 흡수하여 GABA의 농도를 조절한다. 그런데 GABA 수송체가 어떻게 조절되는지는 아직 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 효모 two-hybrid system을 사용하여 뇌의 주요 GABA 수송체인 GAT1의 C-말단과 특이적으로 결합하는 ubiquitin-specific protease 14 (Usp14)를 분리하였다. Usp14는 GABA 수송체 GAT1및 GAT2와는 결합하지만, 다른 GAT isoform과는 결합하지 않았다. GAT1과의 결합에는 Usp14의 C-말단부위가 필수적으로 관여함을 확인하였다. 또한 이 단백질간의 결합을 GST pull-down assay로 확인하였으며, 생쥐 뇌 균질액의 co-immunoprecipitation을 통하여 in vivo에서도 GAT1과 Usp14가 결합함을 확인하였다. 이러한 결과들은 Usp14가 GAT1과 결합하여 세포막에 존재하는 GAT1의 수를 조절하는 역할을 할 가능성을 시사한다.

• 생명과학회지
• /
• 제19권7호
• /
• pp.968-975
• /
• 2009

본 연구에서는 8주의 유산소 및 저항성 트레이닝 그룹으로 나누고 그에 따른 트레이닝이 서로 다른 테스트를 하였을 때, 운동 특이성 효과(specific effect)와 전사효과(transferabilty)에 영향을 미치는 지를 연구하였다. 결론적으로 8주간의 유산소 및 저항성 트레이닝은 동일한 테스트를 통하여 운동의 특이성은 나타냈으나 서로 다른 테스트를 해 봄으로써 전사효과의 향상은 나타내지 못했다. 전사효과를 나타내지 못한 가장 큰 이유는 8주라는 기간이 중추신경과 근육의 적응하기에는 다소 짧은 기간이라 사료되며 추후의 연구에서는 트레이닝 기간등을 고려한 좀 더 세분화된 연구가 필요하다고 생각된다.

• Molecules and Cells
• /
• 제37권3호
• /
• pp.264-269
• /
• 2014

The molecular interaction between tumor suppressor p53 and the anti-apoptotic Bcl-2 family proteins plays an essential role in the transcription-independent apoptotic pathway of p53. In this study, we investigated the binding of p53 DNA-binding domain (p53DBD) with the anti-apoptotic Bcl-2 family proteins, Bcl-w, Mcl-1, and Bcl-2, using GST pull-down assay and NMR spectroscopy. The GST pull-down assays and NMR experiments demonstrated the direct binding of the p53DBD with Bcl-w, Mcl-1, and Bcl-2. Further, NMR chemical shift perturbation data showed that Bcl-w and Mcl-1 bind to the positively charged DNA-binding surface of p53DBD. Noticeably, the refined structural models of the complexes between p53DBD and Bcl-w, Mcl-1, and Bcl-2 showed that the binding mode of p53DBD is highly conserved among the anti-apoptotic Bcl-2 family proteins. Furthermore, the chemical shift perturbations on Bcl-w, Mcl-1, and Bcl-2 induced by p53DBD binding occurred not only at the p53DBD-binding acidic region but also at the BH3 peptide-binding pocket, which suggests an allosteric conformational change similar to that observed in Bcl-$X_L$. Taken altogether, our results revealed a structural basis for a conserved binding mechanism between p53DBD and the anti-apoptotic Bcl-2 family proteins, which shed light on to the molecular understanding of the transcription-independent apoptosis pathway of p53.

• 한국산학기술학회논문지
• /
• 제17권10호
• /
• pp.319-330
• /
• 2016

3D 프린팅 기술은 다양한 산업분야에서 개념모델 및 기능성 시제품을 제작하는데 많이 응용되고 있지만, 3D 프린팅 소재 및 제작된 제품 신뢰성 등의 여러 가지 이유로 상용화 제품으로 적용되는 데 한계가 존재한다. 본 논문에서는 3D 프린팅 기술을 이용한 산업적 응용분야 중 하나로 발전소 저탄장에 사용되는 풀 코드 스위치 모듈의 부품들 중 잦은 돌발 상황으로 인해 파손이 자주 발생하는 허브 구동부와 레버 고정부 부품들에 대해 현장에서 작업자들이 단기 대체부품으로 적용이 가능하도록 하는 부품 최적 설계 및 FDM 방식 3D 프린팅 제조공정기술에 대한 연구결과를 제시하였다. 3D 프린팅 기술의 경우 소재 적용에 있어서 한계가 존재하므로, 본 논문에서는 구조 최적화 설계를 통해 구조 안정성을 확보하는 방안에 대해 연구를 수행하였다. 허브 구동부 부품에 대해 내부 구조 형상 및 구조 설계 변수 최적화를 수행하여 좌측구동모드에서는 안전계수가 153.67% 증가한 1.243을 확보할 수 있었으며, 우측구동모드에서는 404.96% 증가한 3.156을 확보할 수 있었다. 레버 고정부 부품의 경우, 반복적인 스위칭 구동에 의한 굽힘 모멘트로 인해 발생하는 파손을 최소화하기 위해 구조 최적화 설계를 수행하여 26% 증가한 구조 안전계수(7.52)를 확보할 수 있었다. 본 연구를 통해 3D 프린팅 기술을 단기 대체부품 제조공정에 적용함에 있어서 소재 최적화를 통한 설계보다는 3D 프린팅 공정의 적층특성을 활용한 구조적 최적화 설계기법 이 더욱 유연한 결과를 도출할 수 있음을 확인할 수 있었다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제14권11호
• /
• pp.6305-6309
• /
• 2013

Background: TIAM2, a Rac guanine nucleotide exchange factor, is closely associated with cell adherence and migration. Here, we aimed to investigate the role of TIAM2 in non-small cell lung cancer (NSCLC) cells. Materials and Methods: A small interference RNA (siRNA) was introduced to silence the expression of TIAM2. Invasion and motility assays were then performed to assess the invasion and motility potential of NSCLC cells. GST-pull down assays were used to detect activation of Rac1. Results: TIAM2 was highly expressed in NSCLC cells. Knockdown of TIAM2 inhibited the invasion and motility, and suppressed activation of Rac1. Further experiments demonstrated that knockdown of TIAM2 could up-regulate the expression of E-cadherin, and down-regulate the expression of MMP-3, Twist and Snail. Conclusions: Our data suggest that TIAM2 can promote invasion and motility of NSCLC cells. Activation of Rac1 and regulation of some EMT/invasion-related genes may be involved in the underlying processes.

• 산업경영시스템학회지
• /
• 제28권3호
• /
• pp.75-86
• /
• 2005

To investigate the fatigue characteristic of upper limbs, this study analyzed RMS(root mean square) and MPF(mean power frequency) value between initial and terminal stages of each experiment condition. And the effect of intermittent endurance time was evaluated using the Borg's CR10 value that was measured for the parts of upper limb. According to the results of ANOVA on RMS value, there were significant difference on the %MVC about push, pull, and down force exertion. Particularly the ANOVA of up force exertion was significant difference on shoulder flexion, elbow flexion and rest time as well as %MVC. The results of ANOVA for MPF value were significant difference on the %MVC in regard of the push and up force exertion. In case of up force exertion, MPF value tended to shift low frequency at all of the experiment conditions. According to the analysis of duty cycle, RMS value considerably increased over 50% duty cycle and as the %MVC increased, the duty cycle affected the increase of RMS value. MPF value for up and down force exertion decreased at 33%, 50% and 67% duty cycle for all of %MVC. Borg CR10 value of hand and forearm were below the 3-point to the 40% of endurance time at 30%MVC and to the 20% of endurance time at 50%MVC with the exception of up force exertion. But Borg CR10 values of upper arm and shoulder at up force exertion were more than 3-point to the 20% of endurance time at 30%MVC and in the start point of endurance time at 50%MVC.

• Animal cells and systems
• /
• 제6권3호
• /
• pp.277-282
• /
• 2002

Topoisomearse II is an essential enzyme in all organisms with several independent roles in DNA metabolism. Recently, it has been demonstrated that the C-terminal region of topoisomerases II is associated with hetero-logous protein-protein interactions in human and yeast. In this study, we identified that RTP1, a rat homologue of EIA binding protein BS69, is another topoisomerae II interacting protein by yeast two-hybrid screening. RTP1 has an E1A-binding domain and a MYND motif, which are known to be required for transcriptional regulation by binding to other proteins and interaction with the leucine zipper motif of topoisomerase II. The physical interaction between RTP1 and topoisomerase ll$\alpha$ was examined by GST pull-down assay in vitro. The expression level of RTP1 peaks in S phase as that of topoisomerase ll$\alpha$. These results suggest that the interaction between topoisomerase ll$\alpha$ and RTP1 might play an important role in regulating the transcription of genes involved in DNA metabolism in higher eukaryotes.

• Molecules and Cells
• /
• 제24권3호
• /
• pp.372-377
• /
• 2007

The orphan nuclear receptor, SF-1, plays a pivotal role in the development and differentiation of the endocrine and reproductive systems, and also regulates the transcription of a host of genes, including those encoding several steroidogenic enzymes and gonadotropins. We found that a previously unidentified repressor, EID-1, is an SF-1-interacting protein that inhibits the transactivation of SF-1. A transient transfection assay revealed that EID-1 inhibits SF-1, but not LRH-1, $ERR{\gamma}$, or mCAR. Using the yeast two hybrid and GST pull-down assays, we determined that EID-1 interacted strongly with SF-1. In addition, it colocalized with SF-1 in mammalian cells and interacted specifically with the AF-2 domain of SF-1, competing with SRC-1 to inhibit SF-1 transactivation. EID-1 is expressed in the mouse testis, and its expression decreases during testis development. The results of the present study suggest that EID-1 can act as a repressor, regulating the function of SF-1.