In order to study the protease from Agaricus bisporus (Lange), the crude protease preparation was separated by fractionation of mushroom extracts with ammonium sulfate. It was found that extracts from Agaricus bisporus (Lange) Sing. contained protease. The optimum pH of the enzyme was 6.0, and the pH range at which the enzyme was stable was 4.0 to 7.0. The optimum temperature at which the enzyme showed the highest proteolytic activity was $50^{\circ}C$, while the enzyme was instantly inactivated at about $60^{\circ}C$. The enzyme activity was inhibited by $Ag^+$, $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Ba^{2+}$, $Fe^{3+}$, $Co^{2+}$, $Ca^{2+}$, $Pb^{2+}$, $Mg^{2+}$ and $Mn^{2+}$. The $K_m$ value was 0.32 mM with Hammarsten casein.
본 연구에서는 홍삼 추출물 제조과정에서 추출 수율을 향상시킬 수 있는 효소를 선별하고 최적의 반응조건을 조사하였다. 상업용 단백질 분해효소 중 Alcalase가 단백질과 탄수화물 수율 향상에 효과적이었으며, 효소 사용량은 홍삼 중량의 2%, 반응 시간은 1.5시간이 적당하였다. 최적의 반응조건으로 홍삼을 Alcalase로 처리한 결과 대조구보다 고형분 수율은 45.1%에서 71.1%로 50% 이상, 총페놀 함량은 0.44%에서 0.80%로 80% 이상 증가하였으며, 항산화 활성은 대조군과 매우 유사하였다. 또한 진세노사이드 함량은 대조구의 1.48 mg/g에서 1.98 mg/g으로 30% 이상 증가하였다.
Sarcodon aspratus (Berk.) S. Ito에서 효소분획을 추출하여 casein 및 여러 식품 단백질기질을 조제하여 그것에 대한 분해작용을 실험하였다. Casein을 크게 분해하고 각 식품단백질기질도 분해하였으므로 protease의 존재를 알게 되었고 여러 기질에 대해 표준 pepsin과 비교할때 거의 동일한 역가를 나타내었으므로 우수한 protease가 함유되어 있음을 규명하였다. 아울러 능이가 육류체증 치료에 민간약으로 사용되는 근거를 제시하였다고 사료된다.
In a previous study, we found an antifungal effect on human pathogenic fungi by the cell-penetrating peptide Tat (47-58) derived from HIV-1. Tat (47-58) immediately entered into the fungal nucleus and affected some physiological changes on the intracellular condition. In this study, Tat (47-58) showed a broad spectrum of antibacterial activity against pathogenic bacteria including bacterial clinical isolates. To improve resistance against proteases for use in vivo, we synthesized an analog of Tat (47-58) by substituting the L-amino acid for the D-amino acid. The D-enantiomer of Tat (47-58) also exhibited a broad spectrum of antibacterial activity at almost the same level of L-Tat (47-58) concentration. Unlike L-Tat (47-58), D-Tat (47-58) showed a significant proteolytic resistance against all proteases tested and antimicrobial activities in the presence of trypsin. Moreover, D-Tat (47-58) inhibited MRSA infection in human HeLa cells whereas L-Tat (47-58) partially allowed MRSA infection, and the results were due to the proteolytic resistance of D-Tat (47-58).
Effect of iron on the extracellular proteolytic activity of live Uronema marium was determined by fluorescence polarization (FP) method. Supplementation of 0.5 and 5.0 μM iron significantly increased caseinolytic activity of live U. marinum. In contrast, supplementation of 50 μM iron showed no significant differences in FP values compared to the control. The present result suggests that iron in cultured water or skin tissue of olive flounder may influence on the penetration and establishment of U. marinum, correlating with modulation of extracellular protease activity of the ciliates.
To investigate antitumor components in Korean higher fungi, the carpophores of Pholiota squarrosa belonging to the family Strophariaceae were collected and extracted with hot water. A protein-bound polysaccharide fraction was obtained by adding ethanol to the extract and by dialyzing through Visking tube. The fraction was examined for antitumor activity against sarcoma 180 implanted in mice. It showed an inhibition ratio of 78.7% at the dose of 20mg/kg/day. The tumor in two of the ten mice was completely regressed. The chemical analysis of the antitumor fraction by Anthrone and Lowry-Folin methods showed that it consisted of 42% polysaccharide and 55% protein. The enzyme fraction of the carpophores showed no proteolytic activity on casein.
충남 대둔산의 토양으로부터 분리한 점액세균을 ARJ라 명명하고 그 특성을 알아보았다. CT 배지에서 swarming을 하며 성장한 이 균주는 slime을 형성하였고, 액체 및 고체배지 상에서 황록색의 색소를 방출하였으며 swarming 부분을 파장이 366 nm인 자외선으로 조사하였을 때 초록색의 형광을 띄었다. 또한 이 균주는 영양분이 고갈되었을 때 fruiting body를 형성하는 것으로 보아 Myxobacteria라고 생각되었으며 주사전자 현미경 관찰 결과 이 균주가 형성한 fruiting body는 stalk이 없었고 naked myxospore를 가지고 있었다. Myxobacteria의 분류에 있어서 가장 중요한 이러한 형태학적 특성들로 볼때 이 균주는 Myxococcus virescens와 가장 유사한 것으로 밝혀졌다. 한편 이 균주는 특히 gram 양성 세균에 대해 antimicrobial activity가 있는 것으로 나타났는데, 여과한 배양 여액에서도 이렇ㄴ activity가 있었지만 비변성 polyacrylamide 전기영동을 하여 본 결과 이 물질이 단백질은 아닌 것으로 밝혀졌다. 또한 이 배양 여액은 상당한 proteolytic activity가 있었으며 최소한 2개의 proteolytic enzyme이 있는 것으로 비변성 polyacrylamide 전기영동을 통하여 밝혀졌다.
To understand the activity of non-specific defence factors in cultured Sebastes, the antibacterial effect of the serum, skin mucus and homogenate of various organs from cultured oblong rockfish (Sebastes oblongus) and rockfish(Sebastes schlegeli) against pathogenic bacteria, Aeromonas hydrophila, Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum, and Streptococcus sp. was compared with that of flounder(Paralichthys olivaceus) and seabass(Leteolabrax japonicus). And the activities of proteolytic enzyme, chitinolytic enzyme and haemolycin as non-specific defence factor were investigated on the oblong rockfish and rockfish. Samples from oblong rockfish showed the highest antibacterial activity by lysoplate assay on agar plate mixed with pathogens, followed in descending order by rockfish, seabass, and flounder. Turbidimetric assay was carried to evaluate the lysozyme activity of fish samples against lyophilized cells of Micrococcus lysodeiktikus. The serum, kidney, liver, stomach, intestine and eyeball of oblong rockfish and the mucus and gill of rockfish appeared to have the highest lysozyme activity among the fish strains investigated. All samples except skin mucus, liver, and eyeball of oblong rockfish and rockfish showed proteolytic enzyme activity. Chitinolytic enzyme activity was showed in random sampling and haemolytic activity was remarkable in oblong rockfish. Therefore, Sebastes strain was proved to have effective defense mechanisms based on the antibacterial activities, and lysozyme, proteolytic enzyme, chitinolytic enzyme, and haemolycin were considered to act as the non-specific defence factor of Sebastes.
This study was performed to screen the antimicrobial activities and proteolytic enzyme stability of the acidified extract of the Blue mussel Mytilus edulis. The acidified extract showed potent antimicrobial activities against Gram-positive bacteria, Bacillus subtilis, and Gram-negative bacteria, Escherichia coli D31, but had no activity against Candida albicans. Treatment of extract with trypsin completely abolished all or significant antibacterial activity against the tested bacteria, but slightly decreased antimicrobial activity against B. subtilis, and treatment of extract with chymotrypsin retained almost antibacterial activity against the tested bacteria except for E. coli D31. To confirm the additional enzyme stability of the extract, antimicrobial activity of the extract was tested after treated with several enzymes. Enzymes treated extract showed potent antimicrobial activity against B. subtilis and its activity was also retained for 5 h after trypsin treatments. Non-proteinaceous materials in the acidified extract also showed strong DNA-binding ability but did not show bacterial membrane permeabilizing ability. All our results indicate that mussel extract might contain the proteinaceous or non-proteinaceous antibacterial materials target not bacterial membrane but intracellular components. These results could be used to develop mussel extract as an additive for the improvement of stability or antimicrobial activity of antibiotics against specific bacteria.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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