The objectives of this investigation were to produce artificially an antitumor constituent by submerged culture of the mycelium of Coriolus versicolor (Fr.) Quel., to characterize the influence of various modifications of the nutrient and culture conditions with respect to the production, to determine chemical composition of the antitumor constituent, and to examine effects of the constituent on the immune response of mice. Submerged agitation of the mycelium in flasks containing a nutrient solution showed its adequate growth. Especially the mycelial growth in the medium containing glucose and yeast extract was abundant. The addition of cotton seed flour or ginseng waste to the medium increased the yield of mycelial growth and the production of the antitumor constituent. The replacement of glucose with starch also yielded the adequate growth. The antitumor constituent extracted from the mycelium and isolated from the culture filtrate was a protein-bound polysaccharide. The analyses of this constituent by GLC and amino acid autoanalysis showed that it contained four monosaccharides and fifteen amino acids. The protein-free polysaccharide of the constituent was also found to exert greater antitumor activity against sarcoma-180 in mice than the entire constituent. The antitumor constituent was found to potentiate the immune response of mice against sheep red blood cell. The protein-bound polysaccharide exerted more favorable influence on the immunity than the protein-free moiety.
Park, Kyung-Sook;Lee, Jae-Yang;Lee, Sang-Jik;Kim, Seon-Hee;Lee, Jae-Sung
The Korean Journal of Mycology
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v.20
no.1
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pp.72-76
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1992
The extraction and separation methods of protein-bound polysaccharides from the mycelium and culture broth of Coriolus versicolor (Fr) Quel were investigated. The use of 2% solution of surface active agent Triton X-100, was effective for extraction of the protein-bound polysaccharides from the mycelium. For the separation and partial purification of the protein-bound polysaccharides, the column chromatography using DEAE-Cellulose and DEAE-Sephadex proved to be effective.
To find antitumor components with low toxicity in the Basidiomycetes of Korea, the carpophores of Flammulina velutipes (Fr.) Singer were extracted with hot water for eight hours. The extract was purified by dialyzing through Visking tube and a protein-bound polysaccharide fraction was obtained as pale brownish amorphous powder after freeze-drying. The fraction was examined for antitumor activity against sarcoma 180 implanted subcutaneously in the left groin in ICR mice. The inhibition ratio of this fraction against the tumor was 62.3% at the dose of 10mg/kg/day for the period of ten days. The tumors in three of the ten treated mice were completely regressed. The chemical analysis of the antitumor component by anthrone and Lowry-Folin methods showed that it consisted of a polysaccharide (42.4%) and a protein (24.5%). The hydrolysis of the polysaccharide moiety with 3% HCl-MeOH and trimethysilylation of the hydrolyzate yielded five monosaccharides which were identified by G.L.C. Several amino acids were identified by an amino acid autoanalyzer in the acid hydrolyzate of the protein moiety.
The hypoglycemic effects of 2 mushrooms, Pleurotus ostreatus and Lentinus edodes, on streptozotocin(STZ) induced diabetic rats were investigated in this study . Diabets mellitus was induced in male Sprague-Dawley rats by the injection of STZinto the tail vein at a dose of 45mg/kg. Sprague-Dawley male rats(200-250g) were assigned to one control and three STZ-diabetic groups. Diabetic groups were assigned to STZ-control, pleurotus ostreatus and Lenitinus edodes groups. All groups were fed a AIN 76 diet. The two experimental groups were fed with each protein-bound polysaccharide(150mg/kg BW) for 14 days and with carboxymethyl cellulose for STZ-control group. The body weight gain was monitored and the blood levels of glucose and cholesterol were measured . Levels of protein triglyceride, and free fatty acid in plasma were analysed. Serum aminotransferase activity as also measured. The body weight gain was lower in the all diabetic groups than in the of normal group. The weight of spleen was reduced by adminstration of the Lentinus edodes protein-bound polysaccharides. The result suggest that orally administered Lentinus edodes protein-bound polysaccharides exhibited hypoglycemic effect in STZ -induced diabetic rats and that these protein-bound polysaccharides may be useful for the management of diabetes mellitus.
We investigated the absorption characteristics of protein-bound polysaccharide powders of various molecular weights isolated from the mushroom Agaricus blazei Murill. The monolayer moisture content calculated using the GAB equation showed a higher level of significance than did the BET equation. The higher the water activity, the lower the isosteric heat of sorption. The fitness of the isotherm curve was shown to be in the order of the Khun, Oswin, Caurie and Henderson models. The prediction model equations for moisture content were established by use of ln(time), water activity, and temperature.
The purpose of this study is to observe the effect of protein-bound polysaccharide (PBP) on proliferation of Th1 cells and cytotoxicity of cancer cell. Mushrooms (Ganoderma lucidum, Agaricus blazei, Lentinus edodes, Coriolus versicolor and Phellinus linteus) were fractionated by 100$^{\circ}C$ hot water for 3hr. PBP was stimulated and proliferated Th1 cells most at 10 mg/$m\ell$ concentration and the percentage of cell proliferation was 40%. It was estimated cytotoxicity of PBP against 7 kinds of cancer cell lines. Antitumor activities of Agaricus blazei against P388D1 and L1210 (tumor cell lines) were 2.4% and 39.7% survival rate, and Lentinus edodes was 48.4% and 52.5% survival rate, respectively. PBP mixtures of Agaricus and Lentinus edodes prolonged (27∼40%) significantly the survival rate of mice intraperitoneally implanted with sarcoma 180.
We investigated the optimum conditions for conversion of water-insoluble components of basidiocarps of Ganoderma lucidum to water-soluble components by hydrolyzing with chitinase. We also tried it with Ganoderma luciclum residue remaining after extracting hot water-soluble components of Ganoderma lucidum. After hydrolyzing under optimum conditions (20 ppm chitinase, 2% Ganoderma lucidum or 6% Ganoderma lucidum residue, at pH 3 and at $ 35^{\circ}C$), the contents of total water-soluble components (polysaccharide or protein) were measured, and it was found that the contents of water-soluble components increased to 1.5-2.7 fold. Michaelis constant, $K_m$ and maximum rate, $V_max$ calculated by Lineweaver-Burk plot for hydrolysis of Ganoderma lucidum were 1.75% and 0.02%/min respectively and those for hydrolysis of Ganoderma lucidum residue were 53.15% and 0.53%/min respectively The protein-bound polysaccharide was isolated after hydrolysis and molecular weights were measured by Sepharose CL-4B gel filtration and compared with the molecular weights of polysaccharide before hydrolysis.
This study was conducted to investigate the extraction characteristics of the polysaccharide from Jeseng mushroom (Fomitopsis pinicola Jeseng). Yields of the polysaccharide extracted from powdered mushroom by autoclaving(120, 30 min) with water at different pH and salt concentration were 8.2~9.2% in pH 5~11, 4.7~5.5% in 1~5% salt solution, respectively. The yield by the 0.05~1.0 N KOH-extraction was ranged 3.45~13.20%, while that by HAS-extraction(homogenizing after KOH swelling) using 1~2.5 N KOH 73.6~78.4%. Content of carbohydrate, protein, lipid and ash of the crude polysaccharide extracted from fruits body and its cultured mycelium by method of water extraction, KOH extraction(0.005~1N) and HAS-extraction were ranged 86.5~92.6%, 2.3~13.1%, 0.1~4.2% and 0.1~1.7%, respectively. The polysaccharide were composed of 62.0~77.8 g/g of pentose, 138.0~187.8 g/g of hexose and 21.2~117.3 mg/g of protein. From these results, the polysaccharide extracted was supposed to be a protein-bound polysaccharide.
We have isolated an anti-complementary polysaccharide from the hot water extracts of Phellinus linteus mycelia. Anti-complementary polysaccharide, PL-5-IIIa, was purified by ultrafiltration, gel permeation chromatography using Sepharose CL-4B. GPC (Sepharose CL-4B) and its homogenicity was demonstrated by HPLC. Using gel permeation chromatography with standard dextrans, its molecular weight was determined as about 800,000 dalton. The purified PL-5-IIIa was identified as a protein bound polysaccharide comprising of 29.6% protein and 64.2% carbohydrate which was composed of fucose(15.8%), galactose(43.1%) and mannose(40.6%).
To find pharmacologically active hybrids among the inter-order protoplast fusants of Lentinula edodes and Ginoderma lucidam the antitumor test was performed and the fusant P22 was selected among them. The hot water and alkaline extracts from the cultured mycelia of P22 were purified and separated into four fractions by DEAE-cellulose anion exchange chromatography. When a dose of 20 mg/kg/day of each fractions was injected into ICR mice by i.p., the tumor inhibition ratio of Fr. IV against solid sarcoma 180 was the higher than any other fraction. Fr. IV was a protein-bound polysaccharide which was composed of 69. 12% polysacchafide and 9.76% protein and the molecular weight of Fr. IV was $6.7{\times}10^4$ dalton.
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