• 한국미생물·생명공학회지
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• 제38권4호
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• pp.385-390
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• 2010

청국장의 기호도를 개선하는 발효균으로 분리된 protease 생산균은 Bacillus licheniformis로 확인되었다. Protease 생산을 위한 배지를 최적화하기 위한 탄소원, 질소원, 인, 금속이온의 성분을 변화시키면서 균의 성장과 효소 생산성을 비교하였다. Glucose를 탄소원으로 사용하였을 때는 균의 성장은 정상적으로 일어나지만, protease 생산이 심하게 억제되는 것으로 나타났으며, Potato starch를 탄소원으로 사용하였을 때 효소 생산성이 가장 높았다. 질소원으로는 yeast extact가 효소 생산에 가장 적합하였다. 한편 2가 금속이온중 $Zn^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Co^{2+}$을 배지에 첨가하였을 때는 균의 성장이 심하게 저해되었으며, 효소 생산도 되지 않았다. $CaCl_2$를 첨가한 배지에서는 균이 성장과 효소 생산성이 증가되었다. Potato starch(1.5%), yeast extract(1.5%), $CaCl_2$(0.7%), $K_2HPO_4$(0.03%)와 $KH_2PO_4$(0.03%)를 포함하는 것으로 구성된 최적화 배지에서 최대효소 생산성은 800 U/mL로 나타났으며 28시간 이후에는 배양액내 효소활성이 서서히 감소하였다.

• KSBB Journal
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• 제19권4호
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• pp.295-300
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• 2004

해양유래미생물에서 gelatin 분해능이 우수한 균주 Vibrio vulnificus CYK 279H를 이용하여 최적 효소활성조건을 검토하였다. 온도와 초기 pH는 $25^{\circ}C$, 7.5에서 높은 것으로 나타났으며, 단당, 이당, 다당류를 첨가하여 탄소원의 영향에서는, 0.3% (w/v) galactose 에서, 유$.$무기 질소원으로는 0.6% (w/v) yeast extract와 4.0% (w/v) gelatin, 0.2% (w/v) (NH$_4$)$_2$SO$_4$에서 효소활성이 가장 높게 나타났다. 염 농도로는 2.0% (w/v) NaCl, 금속이온은 Fe$^{2+}$를 첨가하였을 때 효소활성이 증가되었다. 선정된 최적배양조건에서 Vibrio vulnificus CYK 279H를 배양한 결과, 18 h 배양시 73 Unit/1로 기본배지 20 Unit/1보다 활성이 3.7배 증가한 것으로 확인되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권4호
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• pp.315-318
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• 2005

The effects of inorganic salts and feather concentrations on pretense production by Bacillus megaterium F7-1 were investigated. Pretense production was dependent on the presence of phosphates in the medium. Supplementation of medium with calcium ion slightly increased protease production. The highest protease production was obtained at $1.4\%$ feather. The optimal medium contained $2.0\%$ glucose, $0.8\%$ skim milk, $0.06\%\;K_{2}HPO_{4}\%,\;0.04\%\;KH_{2}PO{4},\;0.06\%\;NaCl,\;0.03\%\;MgCl_{2}\cdot6H_{2}O,\;0.002\%\;CaCl_{2}\cdot2H_{2}O,\;and\;1.4\%$ whole feather. By using this optimized medium, increased production of the protease was achieved compared with the cases of using basal medium.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제53권4호
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• pp.524-529
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• 2015

본 논문에서는 저온활성 protease의 생산을 최적화하기 위하여 극지 미생물인 Enterobacteriaceae sp. PAMC 25617의 반응표면분석법을 이용한 배지의 최적화를 수행하였다. One-factor-at-a-time 방법을 이용하여 yeast extract, TritonX-100이 protease의 생산에 영향을 미치는 주요인자인 것을 확인하였다. 물리적인 환경 요인으로 pH를 추가하여 반응표면분석 방법을 이용한 최대 protease 생산 농도를 갖는 각 인자들의 농도를 확인한 결과 5 g/L peptone, 3 g/L malt extract, 10 g/L $C_6H_{12}O_6$, 6.690 g/L yeast extract, 0.018 g/L TritonX-100의 농도에 pH 6.777의 조건에서 미생물을 배양하였을 경우, 최대 10.049 U/L의 protease가 생산될 수 있는 것으로 예측되었다. 실제 배양 결과 8.03 U/L의 protease가 얻어졌으며, 최적화 이전의 생산농도와 비교하여 150% 이상의 증가를 이루었다. 결과적으로 배지최적화를 통한 protease 생산량의 증가에 반응표면분석법의 적용이 유용하다는 것을 확인할 수 있는다. 이러한 결과로부터, 배지 최적화를 이용한 극지 미생물 유래 cold-adapted protease 생산량의 증가가 여러 산업 분야에서 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 환경위생공학
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• 제5권2호
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• pp.103-110
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• 1990

For production of thermophilic and alkaline protease, Bacillus sp. strain AP-5 was isolated from a compost. The production of the protease was reached at maximum for 4 days at $55^{\circ}$ in standing culture. Chitin and Cellulose as carbon source, and Skim Milk as nitrogen source were favorable for the production of the enzyme. Optimal temperature and optimal pH of the enzyme was $55^{\circ}$ and 11, respectively. Metal ion didn't effect on the enzyme activity, the protease was very stable at heat treatment of 30 min at $55^{\circ}$.

• 한국식품영양학회지
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• 제6권2호
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• pp.96-102
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• 1993

A Nuluk, a Korean traditional koji for brewing, was made with wheat flour and Rhizopus japonicus T2 which had a good aroma and strong abilities in producing saccharogenic and proteolytic enzymes, and cultural conditions for the production of those two enzymes were tested. The productivity of saccharogenic enzyme was markedly improved when Nuluk was made with unsteamed wheat flour as compared with that with steamed one, but that of acid protease was reduced. The addition of water containing 0.5% hydrochloric acid was unfavorable for the production of saccharogenic enzyme and neutral protease. The optimum ratio of water added to wheat flour for the production of saccharogenic enzyme and proteolytic enzyme was 28% on the basis of wheat flour. The productivity of saccharogenic enzyme was enhanced "when the Nuluk was molded after 10~20 hours precultivation but that of proteolytic enzyme was reduced as compared with no molding. The optimum temperature for the production of saccharogenic enzyme was 28f and that of proteolyic enzyme was also 28$^{\circ}C$. The optimum cultural time for the production of saccharogenic enzyme was 36 ~72 hours at 3$0^{\circ}C$ and that of proteolytic enzyme was 36 hours.ours.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권6호
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• pp.466-470
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• 1999

Protease production and its characteristics were investigated with Mucor racemosus f. racemosus PDA 103 which was isolated from Korean traditional meju. Optimum culture conditions of the strain for the production of the protease in basic medium[bean(Baektae):H2O=1:1(w/v)] were as follows: pH 6, 3$0^{\circ}C$ and 72hrs. Optimum pH and temperature for the enzyme activity of the protease produced by Mucor racemosus f. racemosus were pH 5 and 5$0^{\circ}C$, respectively. The enzyme was relatively stable a pH2.0~5.0 and at temperature below 4$0^{\circ}C$. Phenylmethane-sulfonyl fluoride and Ag+ inhibited the enzyme activity. This indicates that the enzyme is serine protease. Km value was 0.9$\times$10-4M and Vmax value was 5.93$\mu\textrm{g}$/min. This enzyme hydrolyzed casein more rapidly than bovine albumin.

• 약학회지
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• 제34권1호
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• pp.47-53
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• 1990

Alkalophilic bacteria isolated from compost were selected, identified and tested for production of alkaline protease. The bacterium was tentatively assigned to Bacillus sp. based on the morphological, cultural and biochemical characteristics. The optimum pH of growth was 10 Galactose and Sodium glutamate enhanced the production of alkaline protease. The protease was most active at pH 11.0 and $60^{\circ}C$ and stable in the range of pH 5-11 and temp. $30^{\circ}-55^{\circ}C$. The protease was stabilized by the presence of calcium salts.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제28권3호
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• pp.167-171
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• 2000

두엄에서 분리한 Thermoactinomycese sp. E79는 탈지 대두박(defatted soycean meal)을 특이적이로 분해하는 내열성 alkaline 단백질 분해효소를 생산한다. 이 효소를 생산하기 위한 환경인자를 조사하였는데 배지의 초기 pH가 6에서 8까지는 유사한 균체농도를 얻을 수 있었고 pH10에서는 단백질분해효소의 발현이 되지 않았다. 탄소원은 수용성 전분을 이용할 경우 최적의 값을 보여 9.2U/mL의 효소역가를 얻었고 포도당을 탄소원으로 사용한 경우 단백질분해효소의 발현이 억제되었다 최적의 효소발현을 위해 tryptone을 세포성장에 soytone을 단백질 분해효소 생산에 가장 적합한 질소원으로 선택하였다. 호기성 세균인 Thermoactinomycese sp. E79의 산소요구성으 알아보기 위해 산소전달속도를 달리하여 발효인자를 결정하였고 volumetric oxygen transfer coefficient 가 1.93$\times$102 hr-1 일 때 균체농도 6.58 g/L 효소역자 43.0 U/mL 의최대값을 보였다 또한 효소역가를 증강시키기 위해 200mg/L의 humic acid를 첨가한 경우 비첨가 대조구에 비해 단백질 분해효소 역가는 1.64배 세포성장은 1.77배 증가하였다.

• 생명과학회지
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• 제23권2호
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• pp.273-281
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• 2013

본 연구는 부산 인근의 해수욕장에서 얻은 해수에서 protease를 생산하는 균주를 분리하여 동정하고 균주의 배양학적인 특성과 protease의 효소학적 특성을 확인하였다. 해수에서 분리한 protease를 생산하는 미생물은 16S rDNA sequencing을 통해 Micrococcus sp. PS-1으로 동정하였다. Protease 생산의 최적조건은 2% skim milk와 1% NaCl이 포함된 pH 7.0의 LB배지에 48시간 배양이었다. 효소의 부분정제를 위해 ultrafiltration과 acetone 침전법을 사용하였고, zymography를 통해 분자량이 35.0 kDa과 37.5 kDa인 protease를 확인하였다. 또한 효소의 최적 활성은 pH 9.0와 $37^{\circ}C$에서 나타났고, 효소는 pH 8.0에서 11.0까지, $25^{\circ}C$에서 $37^{\circ}C$까지 80% 이상의 효소활성이 유지되어 안정한 것으로 확인되었으며 PMSF, EDTA 처리시 protease가 저해되는 것을 통해 alkaline metallo-serine protease로 확인되었다.