• 제목/요약/키워드: primer coat

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RT-PCR 기법을 이용한 Lily Symptomless Virus의 검정 (Detection of Lily Symptomless Virus Using RT-PCR Technique)

  • 정영희;전재흥;최경화;김현순;정혁
    • 한국식물병리학회지
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    • 제12권2호
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    • pp.187-190
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    • 1996
  • 백합으로부터 total RNA를 분리하여 LSV 외피단백질 유전자의 551 bp에 해당하는 특정 염기서열을 증폭할 수 있는 primer로 RT-PCR를 수행하였다. 그 결과 Lilium oriental hybrid cvs. Miani, Marco Polo, Casablanca, Le Reve 품종에서 551 bp의 DNA 절편이 증폭되었고 이 절편의 염기서열을 분석한 결과 LSV외피단백질 유전자의 일부임을 확인할 수 있었다. 그러므로 RT-PCR 방법으로, 실험에 사용하 s4품종 모두 LSV에 감염되어 있음을 알 수 있었다.

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Corrosion Protection of Automotive Steels by Novel Water-borne Primer Systems

  • Ooij, William J. van;Puomi, Paula
    • Corrosion Science and Technology
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    • 제6권5호
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    • pp.239-244
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    • 2007
  • Corrosion protection of automotive steels has traditionally been assured by using a zinc phosphate metal pretreatment followed by the deposition of a cathodic electrocoat system. This system has been developed and optimized over the years into a highly robust and dependable system with a high performance. However, in terms of efficiency and use of resources and energy, the need is now felt to develop a simpler system with fewer steps, shorter lines, less energy requirements (curing and e-coat deposition) and less stringent waste disposal requirement (phosphate sludge). We report here on the development of a one-step system that can possibly replace both the zinc phosphate and the e-coating processes. Such a system is based on the so-called superprimer concept that we have recently developed for the replacement of chromate pretreatment and chromate-containing primers in the aerospace industry. With some modifications, such systems can also be adapted for use in the automotive industry.

Application of High Performance Coatings for Service Life Extension of Steel Bridge Coatings

  • Lee, Chan-Young
    • Corrosion Science and Technology
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    • 제20권4호
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    • pp.169-174
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    • 2021
  • In this study, performance tests, a field evaluation, and a life cycle cost (LCC) analysis for high performance coating systems were conducted to prepare a plan to reduce the cost of maintenance coating and contribute to the service life extension of steel bridges by applying high performance coatings to steel bridges that will be constructed in the future. From the deterioration models based on the field evaluation for chlorinated rubber and urethane topcoat systems, which have been applied often, the mean service lives were derived as 20.8 and 26.6 years, respectively. For the other coating systems that have not been applied in practice, the coordination factors were differentially applied with evaluation items. The most durable coating system was predicted to be thermal spray coating (TSC) primer/epoxy intermediate coat/fluoride resin topcoat, with a predicted value as long as 42.2 years. The LCC analysis indicates that partial application of high performance coating, such as TSC and fluoride resin, to specific parts vulnerable to corrosion and ultraviolet ray (UV) is more advantageous than the use of general coating systems.

분자유전학적인 기술을 이용한 육 감별법

  • 김태헌
    • 한국축산식품학회:학술대회논문집
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    • 한국축산식품학회 2000년도 국제심포지엄 및 제26차 추계학술발표회
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    • pp.59-75
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    • 2000
  • 본 연구는 한우고기를 수입육 및 젖소고기 등의 쇠고기를 판별할 수 있는 DNA marker를 개발 하기 위하여 수행하였다. 첫 번째 실험으로 RAPD 기법을 이용한 종 특이 marker 개발 및 이 marker의 SCAR marker로의 개발을 목표로 수행되었다. Random primer 300개에 대하여 PCR 수행하여 품종 특이적인 양상을 나타내는 14개 primer를 선별하였고 그 중 MG-3, MG-6, MG-12의 primer는 각각 0.9 kb, 1.0 kb, 2.0kb의 위치에서 홀스테인, 한우,헤어포드 특이적인 RAPD 단편을 나타내었다. 이들 단편들 중 한우 특이적인 단편을 클로닝한 후 random primer가 포함된 부분의 염기서열을 결정하였다. 10bp의 RAPD random primer에 10 bp의 염기를 추가하여 SCAR primer를 제작하였다. SCAR marker의 PCR수행 결과, RAPD marker와 같은 1.0 kb의 크기에서 한우에서만 특이적으로 하나의 밴드로 증폭이 되었다. 이러한 결과는 젖소 DNA와의 비교실험에서와 같이 Holstein에서는 나타나지 않으면서 한우에서만 단일밴드가 증폭되어 한우와 젖소의 판별에 이용이 가능할 것으로 판단된다. 두 번째 실험으로 포유동물의 모색과 연관된 MC1R 유전자 변이와 소 품종간의 유전자형 빈도를 파악하고 한우와 흑모를 가진 홀스테이나 앵거스와의 판별 가능한 DNA marker로서의 이용성을 알아보기를 위하여 수행하였다. MC1R 유전자의 변이부분을 증폭시킬 수 있는 한쌍의 primer를 제작하여 350 bp 크기의 PCR 산물를 얻어 제한효소 BsrF I 과 MspA1 I 으로 각각 절단한 후 2.5%의 Metaphore agarose gel에 전기영동하여 유전자형을 결정하였다. 소 품종별 유전자형 빈도를 분석한 결과 한우에서는 $E^+e$와 ee 유전자형이 각각 0.10과 0.90로 나타난 반면 젖소(홀스테인)에서는 유전자형 $E^DE^D,\;E^DE^+$$E^De$가 각각 0.86, 0.00 및 0.14, 앵거스에서는 각각 0.57, 0.26 및 0.17의 빈도를 보여 젖소와 앵거스 두 품종 모든 개체가 대립유전자 $E^D$를 가지고 있어 한우와는 분명한 차이를 보였다. 그러나 수입육의 경우 분석시료 43%만이 $E^D$를 가지고 있었다. 따라서 MC1R 유전자의 유전자형을 PCR-RFLP 방법을 이용한다면 현재 젖소고기가 한우고기로 둔갑 판매되는 부정유통을 방지할 수 있는 하나의 DNA 지표인자로서 활용될 수 있을 것으로 판단되었다. 결론적으로 본 연구에서 개발한 한우 특이 SCAR marker와 MC1R 유전자를 이용한다면 국내에서 사육하고 있는 젖소고기가 한우고기로 둔갑 판매되는 부정유통사례를 근접할 수 있는 방법이 될 것으로 판단되나 다양한 품종이 교잡된 수입쇠고기와의 판별기술 개발을 위해서는 보다 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다.

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하악 전치 설측면에 대한 다양한 접착시스템의 접착강도 (Bond strength of different bonding systems to the lingual surface enamel of mandibular incisors)

  • Turkoz, Cagri;Tuncer, Burcu Balos;Ulusoy, Mehmet Cagri;Tuncer, Cumhur
    • 대한치과교정학회지
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    • 제40권4호
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    • pp.260-266
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    • 2010
  • 본 연구의 목적은 서로 다른 종류의 접착시스템과 법랑질 보호제 등이 설측 브라켓의 인장강도에 영향을 미치는지 알아보는데 있다. 75개의 발치된 하악 전치를 5개의 그룹으로 임의로 나눈 후 설측 브라켓을 부착하였다. Group 1은 Transbond XT를, Group 2는 Transbond XT와 함께 불소 유리레진(Ortho-coat)을 Group 3는 Transbond XT와 Chlorohexidine varnish (Cervitec Plus)를 Group 4는 광중합 접착제(Aegis Ortho)를 Group 5는 antimicrobial self-etching primer (Clearfil Protect Bond)을 사용하였다. 불소유리 레진이나 Chlorohexidine varnish의 사용유무는 접착력에 영향을 미치지 못하였다. Group 5이 다른 그룹에 비해 접착력과 접착제 잔류지수(adhesive remnant index, ARI)가 통계적으로 유의하게 높았다 (p < 0.001). 법랑질 보호제 적용 시 설측 브라켓의 접착력에 부정적인 영향을 미치지 못하였다. 이상의 결과로 이번에 사용한 제품들은 설측 교정치료 기간 동안 환자의 구강위생을 개선시킬 수 있어 환자와 술자에게 도움을 줄 수 있을 것이다. 그러나 에나멜 층이 얇은 경우 Clearfil Protect Bond의 과도한 접착강도에 대해 고려해야 할 것이다.

수국에서 분리한 Cucumber mosaic virus의 특성 (Characterization of Cucumver mosaic virus Isolated from Hydrangea macrophylla for. otaksa (Sieb. et Zucc) Wils.)

  • 방주희;박선정;이금희;최장경;이상용
    • 식물병연구
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    • 제7권1호
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    • pp.1-7
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    • 2001
  • 1998년 수원 근교에서 채집한 전형적인 모자이크 병징을 나타내는 수국(Hydragea macrophylla for. otaksa)으로부터 CMV를 분리하고, Hm-CMV라 명명하였다. 기주실험, 물리적 실험, 혈청학적 성질, RNA와 coat protein의 성질, RT-PCR 및 RAP-PCR 분석을 통하여 Hm-CMV의 특성을 분석하였다. 12종의 CMV 지표식물에서 실시한 기주반응실험의 결과, 지금까지 보고된 CMV 계통들의 반응과 특징적인 차이는 인정되지 않았다. Hm-CMV의 물리적 성질은 내열성에서 6$0^{\circ}C$를 보여 기존 CMV들 보다 낮았다. 혈청학적으로 Hm-CMV는 Y-CMV와 융합하는 subgroup I CMV로 분석되었다. SDS-PAGE로부터에 Hm-CMV의 외피단백질은 28 kDa의 band가 확인되었으며, 4종의 게놈 RNA는 Y-CMV와 같은 분자량을 나타냈으나, 위성 RNA는 존재하지 않았다. 수국의 이병엽에서 분리한 dsRNA의 분석 결과도 Y-CMV와 같은 패턴을 보였다. Hm-CMV의 외피단백질유전자에 대한 RT-PCR 분석 결과, 예상된 분자크기의 DNA 증폭이 인정되었으며, PCR 산물을 이용한 EcoR I 및 Msp I을 처리한 결과는 subgroup I CMV의 특성을 나타냈다. 그런, RAP-PCR의 결과, Hm-CMV는 subgroup I내의 다른 계통들과 구분되었다.

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Isolation and Characterization of Watermelon Isolate of Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV-HY1) from Watermelon Plants with Severe Mottle Mosaic Symptoms

  • Shim, Chang-Ki;Han, Ki-Soo;Lee, Jung-Han;Bae, Dong-Won;Kim, Dong-Kil;Kim, Hee-Kyu
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제21권2호
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    • pp.167-171
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    • 2005
  • We isolated the Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV) particles from watermelon leaves and designated as CGMMV-HY1 as a watermelon isolate and attempted to characterize the pathogenic isolate responsible for such an epidemic in watermelon and also to monitor dominant viral isolates in greenhouse. The watermelon plants infected with CGMMV generally showed mottle mosaic, mosaic, growth stunting, necrosis and deformed fruit. The reactions of indicator plants to CGMMV-HY1 were the local lesions on Nicotiana tabacum cv. White Burley, Nicotiana tabacum cv. Samsun, and Chenopodium amaranticola, and the mosaic symptoms only on Cucumis sativus, but the CGMMV-HY1 did not infect Nicotiana sylvesytis, Datura stramonium, Chenopodium quinoa, and Petunia hybrida. Purified virus particles were rod-shaped and about 300 nm long. The coat protein (CP) of purified CGMMV-HY1 was single band with molecular weight of about 16.5 kDa which was confirmed by western blot analysis probed with monoclonal antibody of CGMMV-HY1. The genomic and subgenomic RNAs of 6.4 kb and 0.75 kb were revealed by the electrophoresis on 1.2% formaldehydedenatured agarose gel. Viral and complementary CGMMV-specific primer sets were designed for spanning the genome using previously reported CGMMV sequences. A 464bp of CP gene of CGMMV-HY1 was amplified by RT-PCR and cloned into PGEM-T easy vector. The nucleotide sequence of CP gene of CGMMV-HY1 shared 98%, 99%, and 100% identities with that of CGMMV strains W, KOM, and KW respectively. Based on these results, we identified CGMMV-HY1 as a CGMMV isolate of watermelon, a member of Tobamovirus.

Characterization of Peanut stunt virus Isolated from Black Locust Tree (Robinia pseudo-acacia L.)

  • Bang, Ju-Hee;Choi, Jang-Kyung;Lee, Sang-Yong
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제22권2호
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    • pp.125-130
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    • 2006
  • An isolate of Peanut stunt virus (PSV) isolated from black locust tree (Robinia pseudo-acacia L.) showing severe mosaic and malformation symptoms, was designated as PSV-Rp. PSV-Rp was characterized by the tests of host range, physical properties, RNA and coat protein composition and RT-PCR analysis. Nucleotide sequences of the cucumoviruses CP genes were also used for identification and differentiation of PSV-Rp. Six plant species were used in the host range test of PSV-Rp. PSV-Rp could be differentiated from each Cucumovirus strain used as a control by symptoms of the plants. The physical properties of PSV-Rp virus were TIP $65^{\circ}C$, DEP $10^{-3}$, and LIP $2{\sim}3$ days. In dsRNA analysis, PSV-Rp consisted of four dsRNAs, but satellite RNA was not detected. Analysis of the coat proteins by SDS-PAGE showed one major protein band of about 31 kDa. RT-PCR using a part of Cucumovirus RNA3 specific primer amplified ${\sim}950bp$ DNA fragments from the crude sap of virus-infected black locust leaves. RFLP analysis of the RT-PCR product could differential PSV-RP from CMV The nucleotide sequence identity between the PSV-Rp CP and the TAV-P CP genes and the PS-V-RP CP and CMV-Y CP genes were 61.6% and 40.5%, respectively. On the other hand, the nucleotide sequence identity of the PSV-Rp CP gene was $70.9%{\sim}73.4%$ in comparison with those of PSV subgroup I (PSV-ER and PSV-J) and 67.3% with that of PSV subgroup II(PSV-W). Especially, the nucleotide sequence identity of PSV-Rp CP gene and that of PSV-Mi that was proposed recently as the type member of a novel PSV subgroup III was 92.4%.

Biological, Physical and Cytological Properties of Pepper mottle virus-SNU1 and Its RT-PCR Detection

  • Han, Jung-Heon;Choi, Hong-Soo;Kim, Dong-Hwan;Lee, Hung-Rul;Kim, Byung-Dong
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제22권2호
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    • pp.155-160
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    • 2006
  • A strain of Pepper mottle virus (PepMov) was isolated from chili pepper plants in Korea. In host range study, this virus, designated PepMoV-SNU1, shared most characteristics with PepMoV isolates reported previously. Thermal inactivation point ($45^{\circ}C\;to\;75^{\circ}C$) and dilution end point ($10^{-1}\;to\;10^{-4}$) of PepMoV-SNU1 showed differences depending on the propagation hosts. Cylindrical and pinwheel-shaped inclusions were always observed in pepper leaf tissues infected with the virus alone. Unexpectedly, a special structure of pinwheel shaped inclusion surrounded with unknown small spots was also observed in the leaf section when co-infected with a strain of pepper mild mottle virus. The partial sequence of coat protein gene and 3' untranslated region of PepMoV-SNU1 showed 98% identity with those of other PepMoV isolates. A primer pair derived from 3' end of the coat protein gene and poly A tail regions were designed. Optimal detection condition of PepMoV-SNU1 by RT-PCR was tested to determine appropriate annealing temperature and additional volumes of oligo-dT (18-mer), dNTP, and Taq polymerase. Under the optimized condition, an expected 500 Up PCR-product was detected in pepper leaves infected with PepMoV-SNU1 but not in healthy plants.

한국에서 분리한 Tobacco rattle virus(TRV-K)의 특성 (Characterization of Tobacco rattle virus(TRV-K) isolated in Korea)

  • 신혜영;구봉진;강상구;장무웅;류기현
    • 식물병연구
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    • 제8권4호
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    • pp.207-214
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    • 2002
  • 대구시와 경상북도 지역에서 Tobacco rattle virus(TRV) 감염에 의한 증상으로 보이는 글라디올러스(Gladiolus hybridus), 크로커스(Crocus spp.), 수선화(Narcissus spp.)를 채집하였다. 톱니무늬(notch), 줄무늬(stripe), 변형 (malformation)등의 증상의 잎 조직을 시료로 하여 direct negative staining method(DN) 및 immunosorbent electron microscopy(ISEM)법에 의해 투과전자현미경으로 바이러스 입자를 관찰한 결과, 각각의 시료에서 긴 입자는 170~200 X 22nm, 짧은 입자는 40~114$\times$22nm 크기의 막대모양 입자가 다수 확인되었다. 글라디올러스에서 분리한 tobacco rattle virus(TRV-K)를 담배(Nicotiana tabacum)에 즙액 접종, 증식시킨 후, 정제하여 항혈청을 제작하였다. TRV-K 의 coat protein(CP)유전자를 특이적인 올리고뉴클레오타 이드 프라이머를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR)으로 증폭시킨 후에 염기서열분석법으로 확인하였다. 그 결과 TRV-ORY의 CP와 99.5%의 상동성을 나타냈다.